银杏内酯对PC12细胞缺糖损伤凋亡相关基因的影响

目的：考察银杏内酯对缺糖引起的PC12细胞损伤的保护作用及对凋亡相关基因表达的影响,探讨银杏内酯对中枢神经系统的保护机制。方法：缺糖培养引起PC12细胞损伤,分别加入100,10,1,0.1 mg·L^-1的银杏内酯,MTT法检测给药前后与正常组的细胞活力变化,实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR, FQ-PCR)法分析各组抑制凋亡基因(Bcl-2),凋亡诱导基因(Bax)及原癌基因(c-myc)的表达情况。结果：缺糖培养早期12 h时,银杏内酯给药使Bcl-2表达量增高,Bax和c-myc表达量降低；缺糖培养24 h时,银杏内酯仅能引起c-myc的表达量下降。结论：在细胞缺糖损伤早期,银杏内酯通过调节凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-myc产生细胞应激保护效应,在损伤晚期主要通过调节c-myc的表达量产生应激保护效应。     

女性不孕与解脲支原体和沙眼衣原体感染的关系

目的:了解泸州地区女性不孕患者泌尿生殖道解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)感染现状,探讨女性感染UU、CT后与不孕的关系。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对238例女性不孕者(不孕组)和208例正常生育者(对照组)的宫颈分泌物进行UU、CT检测。结果:不孕组UU阳性率为36.97%(88/238),CT阳性率为30.25%(72/238),UU+CT阳性率为14.29%(34/238);对照组UU阳性率为13.46%(28/208),CT阳性率为10.58%(22/208),UU+CT阳性率为4.81%(10/208)。不孕组UU、CT和UU+CT的阳性检出率均明显高于对照组(P<0.01)。结论:生育期女性生殖道感染UU、CT是导致不孕的重要因素之一,对不孕妇女常规进行UU、CT检测并及时治疗非常必要。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。     

黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的荧光定量PCR检测

目的:调查黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的情况。方法:采用荧光定量PCR方法对203例黄疸婴儿尿液标本进行HCMV-DNA定量检测。结果:在所检测的203例婴儿中,HCMV-DNA阳性的有52例,感染率为25.62%。HCMV-DNA拷贝数与黄疸持续时间无相关性。结论:HCMV是引起婴儿黄疸的主要原因之一,荧光定量PCR检测婴儿尿液中的HCMV-DNA快速、方便,检出率高,可及时诊断出巨细胞病毒的感染,以便及时治疗,降低畸形儿发生率。     

黄芪对感染血吸虫小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体表达的影响

目的探讨黄芪对感染血吸虫小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体表达的影响。方法采用黄芪注射液腹腔注射,在小鼠感染血吸虫满8周开始治疗,疗程12周,注射生理盐水作阴性对照。应用实时监测荧光定量PCR技术,于感染满8周、12周和20周检测脑组织外周型苯二氮卓受体mRNA的表达水平。结果黄芪治疗组小鼠脑外周型苯二氮卓受体mR-NA水平在感染12周和20周时均明显低于同期对照组(P<0.01),与正常组比较无显著差异(P>0.05);黄芪治疗组治疗前、中和后脑外周型苯二氮卓受体mRNA水平比较差异无统计学意义,而对照组治疗前后差异显著。结论黄芪可降低血吸虫病小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体mRNA表达,提示黄芪可能通过此机制对肝性脑病有一定的治疗作用。     

实时荧光定量PCR法在检测泌尿生殖道感染病原体中的应用

目的评价荧光定量PCR(FQ-PCR)在实验室检测泌尿生殖道病原体、淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)中的应用。方法 464例拟诊为泌尿生殖道感染者的临床标本,用培养法检测NG、UU病原体和胶体金免疫层析法检测CT抗原,对同一标本同时用FQ-PCR检测NG、UU或CT的核酸。结果 FQ-PCR和培养法检出NG阳性率分别为28.4%(63/222)和14.9%(33/222),P<0.01,检测UU的阳性率分别为41.7%(126/302)和32.5%(98/302),P<0.05,FQ-PCR和金标法检测CT阳性率分别为18.2%(57/314)和6.1%(19/314),P<0.001,FQ-PCR对3种病原体的检出率均明显高于培养法或金标法。结论 FQ-PCR法检测NG、CT以及UU在临床诊断NG,UU和CT感染中具有重要应用价值,是常规方法的有效补充。     

母亲巨细胞病毒DNA检测与新生儿感染的相关性研究

目的研究产妇人巨细胞病毒（HCMV）感染乳汁与血液中病毒载量相关性，探讨乳汁HCMV检测在HCMV感染中的临床应用价值。方法采用荧光定量PCR（FQ—PCR）检测疑似HCMV感染的502例产妇乳汁及血液HCMV．DNA，并对其新生儿血清及尿液HCMV—DNA进行检测，观察新生儿的感染情况。结果502例产妇乳汁阳性率12．15％，血液阳性率15．74％，两组阳性率差异无统计学意义（x2=2．396，P〉0．05），而血液中平均拷贝对数值高于乳汁中，差异有统计学意义（t=7．706，P〈0．05）。且乳汁与血液HCMV—DNA拷贝数对呈显著正相关（r=0．698，P=0．000）。502例疑似HCMV感染产妇的新生儿血液、尿液HCMV—DNA检测共63例阳性，阳性率12．55％。母乳HCMV阳性组与母乳HCMV阴性组、母血HCMV阳性组和母血HCMV阴性组比较，新生儿血液、尿液HCMV—DNA阳性检测率均升高（x2值分别为438．69、63．71、407．48，均P〈0．05）。结论巨细胞病毒感染孕产妇血液与乳汁的病毒载量存在相关性，乳汁携带病毒为婴幼儿发生感染的重要原因。     

中药"疣毒清"(Verrucout)对尖锐湿疣病毒(HPV)杀灭作用的实验研究

目的 考察中药“疣毒清”在体外对HPV的杀灭作用,以阐明其治疗机理。方法 从临床切除的CA标本中提取HPV,加入中药“疣毒清”后,在4℃下共孵,按时提取HPV-DNA,用FQ-PCR法测定其病毒含量。结果 含HPV的试管加入“疣毒清”后,经反复测试,24小时即不能测出HPV,而对照管及非相关中药管均含同等浓度的HPV-DNA拷贝。结论“疣毒清”具有明确的杀灭HPV的作用,这一功能阐明了它在治疗CA时的机制。     

3种荧光定量聚合酶链反应试剂筛查入境人员中疑似肺结核病例的效果比较

目的比较3种荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂检测痰标本中结核杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR在国境口岸快速检测结核病人的价值。方法对129例疑似肺结核患者的痰标本分别采用FQ-PCR试剂法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;以培养法为金标准比较艾康、匹基和博奥3种FQ-PCR试剂的特异性和灵敏度。结果艾康检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为90.12%、93.55%、78.95%,特异度为95.65%、100%、95.65%;匹基检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为87.50%、95.16%、61.11%,特异度为100%、100%、100%;博奥检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为86.59%、95.24%、57.89%,特异度为100%、100%、100%。结论 FQ-PCR是一种简便快速方法,对于涂片镜检阳性结核病病例的检测具有很高的敏感性和特异性,对于涂片镜检阴性结核病病例检测有很高的特异性,适于国境口岸出入境人员中结核病病例的快速检测。     

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响.方法 以实时荧光定量PCR（Real-time FQ-PCR）技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原＋LPS/ES抗原组和LPS＋ LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化.结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受.