人乳腺珠蛋白基因表达和趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断中的应用

目的探讨人乳腺珠蛋白(HMAM)、趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例女性体检者、134例良性乳腺肿瘤患者、129例乳腺癌患者和104例其他肿瘤患者外周血中HMAM mRNA,化学发光法检测CA153,ELISA检测CXCL16,分析三种标志物与乳腺癌患者临床组织学分期的关系、手术前后的差异及联合检测在乳腺癌诊断中的应用。结果乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平高于对照组和良性乳腺肿瘤组,HMAM和CA153水平高于其他肿瘤组(P<0.05)。乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平在手术后均下降,Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。HMAM的检测特异性最强,CXCL16的检测灵敏度最高;CA153和CXCL16联合检测可提高灵敏度和阴性预测值;HMAM、CA153和CXCL16联合检测的特异性和阳性预测值高于CA153和CXCL16联合检测,HMAM、CA153和CXCL16联合检测的灵敏度、阳性预测值和阴性预测值高于单一指标检测(P<0.05)。结论HMAM和CA153对乳腺癌预后有一定的预测作用,HMAM、CA153、和CXCL16对术后随访有意义,联合检测有助于提高对乳腺癌诊断的早期诊断。     

PA感染与定植中细胞因子变化的研究

目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。取肺组织HE染色光镜下观察肺部炎症情况。结果①细菌培养结果:模型组在接种后肺组织PA菌落数明显升高;定植组咽拭子培养见大量PA生长;定植组及对照组肺组织未见PA菌生长;②模型组血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达在接种后第3、7、11天均明显高于定植组及对照组(其差异有统计学意义)。结论血清细胞因子IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α检测有助于对铜绿假单胞菌感染与定植的鉴别诊断。     

子宫肌瘤和肌壁组织B7-H3 mRNA表达水平及意义

目的探讨子宫肌瘤患者肌瘤组织和正常子宫肌壁B7-H3 mRNA的表达水平及其在子宫肌瘤患者发病中的作用。方法利用逆转录多聚酶链反应法和实时荧光定量PCR法检测44例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和正常子宫肌壁的B7-H3 mRNA表达水平。结果子宫肌瘤的肌瘤组织表达的B7-H3 mRNA高于正常子宫肌壁。结论子宫肌瘤组织高表达B7-H3 mRNA,B7-H3 mRNA高表达可能与子宫肌瘤发生发展有关。     

荧光定量PCR法在不同孕期通过母体血浆检测胎儿RhCcE血型

目的比较荧光定量PCR法(FQ-PCR)在不同孕期通过母体血浆检测胎儿RhCcE血型的准确性。方法随机采集孕期8～38周的孕妇外周血334份,分离血浆,提取游离胎儿DNA,用FQ-PCR方法检测胎儿RhCcE血型,利用胎儿脐带血标本检测的结果做验证。结果在妊娠8～≤12、13～≤20及21～38周的孕妇中,RhCcE血型各基因型的FQ-PCR检测结果与脐带血血清学检测结果比较:C基因型正确率分别为94.1%(16/17)、91.6%(22/24)、100%(18/18),漏检率为5.9%(1/17)、8.3%(2/24)、0%(0/18);c基因型正确率分别为97.6%(41/42)、100%(55/55)、100%(30/30),漏检率为2.4%(1/42)、0%(0/55)、0%(0/30);E基因型正确率分别为97.8%(46/47)、98.4%(60/61)、100%(35/35),漏检率为2.1%(1/47)、1.6%(1/61)、0%(0/35)。结论随着孕期的增加,FQ-PCR法检测胎儿RhCcE血型的准确性相应增加,孕晚期时达100%。     

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析

目的分析乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)与血清标志物的关系。方法选取340份乙肝血清标本采用实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM),并根据HBVM测定分为A、B、C、D、E 5组,A组44例,HBs Ag、HBe Ag均(+);B组75例,HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab均(+);C组68例,HBs Ag、HBc Ab均(+);D组115例,HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab均(+);E组38例,全阴或HBs Ab单项(+)。结果 A、B、C组检测HBV DNA阳性率显著高于D组,A、B组检测阳性率高于C组(P<0.05),A组稍高于B组,差异无统计学意义(P>0.05),E组未检测到HBV DNA阳性。HBV DNA阳性中,HBs Ag阳性率高于HBV DNA阴性标本中HBs Ag阳性率(P<0.05)。HBV DNA与HBs Ag、HBe Ag相关性明显,与抗HBs、抗HBc、抗HBe无相关性。结论 HBs Ag对HBV感染的灵敏度较高;采用FQ-PCR定量进行HBV DNA检测可作为血清学方法的补充,对乙肝诊断有重要价值。     

HBV前C区部分序列亚克隆与FQ-PCR标准曲线的制备

目的探讨HBV前C区基因用于乙型病毒性肝炎早期诊断价值和意义并基于此靶基因制备荧光定量PCR标准曲线。方法设计特异性引物,将pBR322-HBV质粒前C区部分序列PCR产物AT亚克隆至pBS-T载体,提取和纯化质粒DNA,制作标准品并在FQ-PCR仪上得到标准曲线,进而对精确度和重复性进行统计分析。结果获得了预期希望的质粒。荧光定量PCR标准曲线的相关系数为0.995,线性范围5×103 copies/μl~5×109 copies/μl。批内、批间变异系数值均小于5%,精确度高,重复性好。结论HBV前C区基因用于乙型病毒性肝炎早期检测和诊断有一定价值和意义。且FQ-PCR标准曲线的成功制备,临床早期检测乙肝病毒感染奠定了基础。     

小脑变性相关蛋白2 mRNA在癫痫患者脑组织中的表达及其临床意义

目的了解小脑变性相关蛋白2(CDR2)mRNA在癫痫(EP)患者脑组织中的表达及其临床意义。方法将48例EP患者分成耐药(40例)和非耐药(8例)两组,用基因芯片扫描和FQ-PCR分别检测脑组织中CDR2基因表达,并与对照组比较。结果基因芯片扫描提示CDR2 mRNA在EP患者与对照组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR结果与基因芯片扫描一致。结论EP患者脑组织中有CDR2 mRNA表达,由于其表达产物可通过血-脑脊液屏障进入脑脊液(CSF)和血液中,因而检测CDR2 mRNA在血或CSF中的表达产物有可能成为诊断EP的一个重要指标。     

FQ-PCR方法检测女性CA患者HPV_(6、11)和HPV_(16、18)的实验研究

目的:探讨女性尖锐湿疣(CA)患者HPV6、11型和HPV16、18型的感染情况。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测216例女性CA患者疣体组织或分泌物中的HPV6、11型和HPV16、18型。结果:HPV6、11型阳性率为94.91%(205/216),HPV16、18型阳性率为16.20%(35/216),HPV6、11型和HPV16、18型同时阳性的感染率为12.50%(27/216)。定量测定结果显示,HPV6、11型患者病毒载量最高1.0×108 copies/ml,最低2.8×103copies/ml;HPV16、18型患者病毒载量最高1.0×108 copies/ml,最低2.57×104 copies/ml。结论:FQ-PCR技术具有灵敏、简捷、安全、特异性强的特点,避免了单纯PCR扩增产生的假阳性。女性尖锐湿疣患者应用此方法检测HPV阳性率高,可以快速区分高危型及低危型的HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和癌变作出可能性预测。     

乙型肝炎血清标志物与HBV DNA的相关性分析

目的探讨乙型肝炎患者血清标志物（HBV-M）与HBV-DNA的关系. 方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量-PCR （FQ-PCR）法对1 433例乙肝患者进行HBV-M以及HBV-DNA定量检测. 结果在HBsAg（＋） HBeAg（＋） HBcAb（＋）血清中HBV-DNA阳性率和含量最高,血清中HBeAg与HBV-DNA含量密切相关,但部分HBeAg阴性或HBeAb阳性患者也有较高的HBV-DNA阳性率及含量. 结论单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV的复制情况,对诊断、治疗乙肝患者及疗效观察具有较大的指导意义.     

尖锐湿疣临床治愈后原皮损区人乳头瘤病毒监测

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)亚型、存在时间及其与尖锐湿疣(CA)复发的关系. 方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术,对临床治愈后的CA患者于3、6、9个月在原皮损区取活体组织行HPV亚型的测定. 结果 HPV6、11型63例, 3例临床及病例均支持CA的诊断,但FQ-PCR检查结果阴性;9个月时检出的10例阳性患者中HPV6、112例、HPV16、182例和HPV6、11/16、18混合型6例;而2例HPV6、11型阳性患者中有1例复发,2例HPV16、18 1例复发,6例HPV6、11/16、18 3例复发. 结论 HPV6、11型是最常见的亚型,疣体去除后HPV6、11型和HPV16、18型、HPV6、11/16、18 3种类型在机体内存在的时间大多＞3个月;除疣治疗后6个月时HPV6、11在局部皮肤内大多被清除,这说明该型预后较好,复发率较低;HPV的阳性检出率与临床复发率之间呈密切相关性.