人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

目的 构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测。方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体。PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒。体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达。结果 成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL。体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达。结论 构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎冶疗奠定实验基础。     

三七药材指纹图谱的研究

Fingerprinting of Panax notoginseng was performed by high-performance liquid chromatography using Agilent Hypersil C18 (250.0 mm x 4.0 mm, 5 microm) column with the mobile phase of acetonitrile and water and gradient elution. The detection wavelength was set at 203 nm. The method is simple and reliable to identify and evaluate the quality of Panax notoginseng.     

细菌 DNA拮抗措施研究进展

细菌DNA能够激活哺乳动物巨噬细胞、树突状细胞、B细胞以及自然杀伤细胞(NK)等多种免疫细胞，诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1、IL-12、γ型干扰素(IFN-γ)等炎症介质释放，引起急性炎症反应，甚至发展为全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)并导致死亡。细菌DNA免疫刺激效应的结构基础是CpG基元(CpG motif)，即以未甲基化的     

中国仓鼠肺成纤维细胞和HeLa细胞DNA氧化损伤的自身修复能力与比较

目的:研究不同氧化相关因素对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和HeLa细胞DNA损伤的自身修复情况.方法:将CHL细胞和HeLa细胞用不同氧化相关因素处理一定时间[CHL细胞:过氧化氢(H2O2)25 min,重铬酸钾(K2Cr2O7)105 min,阿霉素(Dox)75 min;HeLa细胞:H2O2 25 min,K2Cr2O7 105 min],随后立即去毒培养0、0.5、1、2、3 h,以碱性单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况.结果:①CHL细胞经H2O2、K2Cr2O7、Dox作用后引起DNA链断裂,去毒培养1 h链断裂修复明显(P<0.01);去毒培养2～3 h,前两毒剂的损伤组完全修复,而Dox组链断裂仍高于未损伤组;②HeLa细胞经H2O2、K2Cr2O7作用后引起DNA链断裂,去毒培养0.5 h链断裂明显修复(P<0.01),去毒培养1 h则完全修复;③CHL细胞和HeLa细胞损伤后修复的拖尾率与修复时间的回归系数显著不同(P<0.05).结论:两种细胞在氧化性DNA损伤后均迅速启动自身修复,但HeLa细胞比CHL细胞有更快的修复能力;同时这两种细胞由Dox所致损伤修复能力均较H2O2、K2Cr2O7所致的差.     

肿瘤细胞的铁代谢及其调节

铁是细胞生长增殖及机能活动所必需的微量元素之一。它在细胞的DNA合成、电子传递、氧运送等过程中起着极其重要的作用。如果没有铁，细胞便不能从G1期进入到细胞周期的S阶段。此外，在细胞周期(例如：p53，GADD45和WAF1／p21)中，铁对大量分子的表达和调控上似乎也起着重要作用。     

DNA—蛋白质交联在砷中毒人群遗传损伤监测中意义及与皮肤癌变的关系

目的 :探讨ＤＮＡ 蛋白质交联 (ＤＰＣ)在监测砷中毒遗传损伤及皮肤病变的发生发展中的应用价值。方法 :依据皮肤病理组织学检查结果对砷接触者进行分组 ,并采用12 5Ⅰ 后标记法测定其ＤＮＡ 蛋白质交联状况。结果 :燃煤砷接触可增加人体ＤＮＡ 蛋白质交联的发生率 ,其发生早于皮肤损害 ,与对照、病区非病人及一般病变组比较 ,皮肤角化过度、癌前病变及癌变组明显增高 (Ｐ <0 0 5或Ｐ <0 0 1) ;该指标的增高与尿砷、发砷值密切相关 ;吸烟及燃煤年限可对其产生影响 ,年龄分层中以 4 0岁以上者ＤＰＣ形成最为突出 ,男性的ＤＰＣ形成高于女…     

二十二碳六烯酸对神经细胞生长发育的影响

目的：观察二十二碳六烯酸（DHA）对神经细胞生长发育的影响。方法：将无血清培养的新生大鼠大脑神经细胞分为实验组和对照组，实验组加入0.33mol/L乳化DHA 40μl。对两组细胞进行形态学观察及蛋白质含量测定。结果：实验组大脑神经细胞的突起生长速度、胞体面积和直径、神经细胞存活率及蛋白质含量均显著高于对照组。结论：DHA对神经细胞的生长有促进作用，这一作用可能与促进神经细胞蛋白质合成有关。     

母体血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的应用

目的：建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法：对30例孕7－41周妇女血浆进行聚合酶链式反应，特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点，扩增片段的大小为149bp。30例孕妇血浆均经过酚－氯仿法提取DNA作为模板，进行聚合酶链反应。结果：20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带，检出率为85．0％。10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带，无假阳性结果。本研究中早、中、晚孕期性别符合率分别为80％、80％、90％，总符合率为85％。结论：使用酚－氯仿法提取血浆中的DNA，可以提高模板的浓度和纯度，改善PCR条件，提高了结果的准确性，作为无创性产前诊断方法有应用于临床。