调肝与健脾对节育器致人子宫异常出血症子宫内膜组织ERK1/2、PI_3K信号通路的影响差异

目的:探讨柴胡止血液对置器后子宫异常出血患者的影响机制。方法:原代培养置器后子宫异常出血患者的宫内膜组织,给含药血清后,分别采用western blot和ELISA的方法测定ERK1/2和PI3K磷酸化的水平。结果:4号组织的归脾汤组升高了PI3K磷酸化水平,P<0.05;1号组织的柴胡止血液组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;3号组织的柴胡止血液组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;5号组织的柴胡止血液组有升高PI3K磷酸化水平的趋势;2号组织的归脾汤组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;4号组织的归脾汤组有升高ERK1/2和PI3K磷酸化水平的趋势。结论:对于出血量大的肝旺患者,柴胡止血液可能通过激活ERK1/2通路来增强血管的收缩从而达到止血的目的;对于出血量较小的肝旺患者证,柴止血液可能通过激活PI3K通路来调节组织抗炎作用,从而达到治疗效果。     

肉苁蓉抗运动性疲劳机制的实验研究

目的观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏乳酸脱氢酶同工酶、糖原及一氧化氮合酶3（NOS3）的影响，探讨其抗运动性疲劳的作用机制。方法将昆明种小鼠随机分为正常对照组、运动对照组和肉苁蓉实验组。正常对照组和运动对照组每只每日灌胃生理盐水0．2mL，肉苁蓉实验组每只每日灌胃肉苁蓉水煎液0．2mL（3g／kg），共15d；末次给药1h后，运动对照组和肉苁蓉实验组小鼠尾部负重5％游泳90min，10h后连同正常对照组小鼠处死取肝脏，一部分用中性甲醛固定制备石蜡切片，一部分制成肝细胞匀浆检测乳酸脱氢酶活性；常规腿染色观察肝脏组织结构，糖原染色法显示肝脏糖原，S-P免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏NOS3的表达。结果运动对照组与正常对照组比较，乳酸脱氢酶活性高（P〈0．05），肝脏结构损伤严重，糖原含量减少，NOS3表达下降（P〈0．05）；肉苁蓉实验组与运动对照组比较，乳酸脱氢酶活性降低，主要是乳酸脱氢酶5（LDH5）下降，肝小叶结构较清晰，糖原丰富，NOS3表达上调（P〈0．05）。结论肉苁蓉可降低LDH5活性，上调NOS3的表达，促进肝糖原合成，发挥肝脏保护和促进体能恢复作用。     

三七3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因的克隆和生物信息学分析

目的克隆三七总皂苷甲羟戊酸合成途径中的1个关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,HMGR)基因,为进一步研究HMGR蛋白的功能及开展三七皂苷的合成生物学研究奠定基础。方法根据NCBI上已公布的同属人参的HMGR基因全长序列(登录号GU565097.1)设计特异性引物。利用RT-PCR技术,以三七愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模板扩增基因片段;并对其编码的蛋白进行生物信息学预测和基因表达分析。结果序列分析表明,获得的三七HMGR(命名为PnHMGR)基因的cDNA序列大小为1 893 bp,该序列与人参、刺五加和杜仲中HMGR基因的一致性分别达到98%、93%、80%,且含有大小为1 725 bp的开放阅读框,经Genbank查询为一新的cDNA。生物信息学预测PnHMGR基因编码蛋白包含2个跨膜区,不含信号肽,具有HMGR催化作用的活性中心结构域。实时荧光定量PCR检测到PnHMGR基因在三七细胞生长30 d表达量最高。结论首次从药用植物三七中克隆得到HMGR基因的编码区序列,为进一步鉴定PnHMGR的功能和开展三七皂苷的合成生物学研究奠定了基础。     

丹参酮ⅡA在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装(英文)

目的:研究丹参酮IIA对3T3-L1脂肪细胞中脂联素表达和蛋白多聚化的作用。方法:用油红染色鉴定3T3-L1脂肪细胞的分化状态。用Real-time PCR检测基因的mRNA表达水平。用2%15%梯度SDS-PAGE及Western blot检测脂联素三种聚体。用siRNA技术进行基因沉默。结果:本研究发现传统中药丹参中的萘醌二萜类成分丹参酮IIA在脂肪细胞中激活AMPK通路,同时抑制脂肪细胞分化,降低脂联素的表达。而在前体脂肪细胞分化过程或成熟脂肪细胞中加入丹参酮IIA进行处理,均明显促进脂联素的多聚化,增加高聚体的浓度。抑制AMPK通路能够解除丹参酮IIA对脂联素的作用。结论:丹参酮IIA通过激活AMPK在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装。     

Didymin attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting oxidative stress

Objective: This study was designed to investigate the protective effects of didymin (Did) on doxorubicin (DOX)-induced cardiotoxicity. Methods: After pretreatment with Did (2, 4, 8 mg/kg intraperitoneal i.p.) for 7 d, the male C57 mice were injected with single dose of DOX (20 mg/kg i.p.). The cardioprotective effect of Did was observed on the 7th day after DOX treatment. Results: DOX delayed body growth and caused cardiac tissue injury, oxidative stress, and mitochondrial dysfunction. Similar experiments in H9C2 cardiomyocytes showed that DOX reduced cell viability, increased generation of reactive oxygen species (ROS) and fragmentation of DNA, decreased mitochondrial membrane potential, and induced cardiomyocyte apoptosis. However, all of these adverse effects were suppressed by Did pretreatment. Did increased protein expression of glutamate-L-cysteine ligase catalytic subunit (GCL), heme oxygenase 1 (HO-1), and nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2). Besides, Did also induced activation of PI3K/AKT. Conclusion: These findings indicated Did prevented DOX-induced cardiac injury and apoptosis via activating PI3K/AKT/Nrf2 signaling pathway.     

益气活血方药早期干预对盆腔炎大鼠模型的影响

目的 研究益气活血方药对盆腔炎大鼠模型病理组织学及免疫学的影响.方法 以Wistar雌性大鼠为实验对象,采用机械损伤加混合细菌法建立盆腔炎动物模型,观察各组大鼠组织学改变及血清C3、C4、TNF-α、IL-2的浓度变化.分组方法:空白组--正常饲养;假手术组--损伤内膜,正常饲养;模型组--损伤内膜并注射菌悬液,正常饲养;早期干预组--损伤内膜并注射菌悬液第2天灌胃给药;常规治疗组--损伤内膜并注射菌悬液第15天灌胃给药.给药方法:按体表面积公式计算药量,每日给药一次,药量为3.96 g/kg,均给药14天.指标检查方法:TNF-α、IL-2:ELISA法;C3、C4:免疫比浊法.结果 肉眼观察:早期干预组子宫形态基本正常,结构较清晰,与周围组织未见明显粘连;光镜下观察:早期干预组子宫内膜腺体结构较对照组清晰,间质分布较均匀;其大鼠血清C3、C4、TNF-α值与模型组相比,均有极显著性差异(P<0.01),并与常规治疗组相比亦有显著性差异(P<0.05);早期干预组及常规治疗组的IL-2值与模型组相比,均无显著性差异(P>0.05).结论 益气活血方药早期干预可有效抑制炎性子宫组织水肿及内膜腺体扩张,促进受损组织与细胞的形态结构及其生理功能的恢复,但尚不能明确此方药对盆腔炎大鼠模型IL-2有直接影响.     

基于UFLC-IT-TOF-MS技术的牡荆子中2个木脂素在大鼠体内代谢研究

目的对牡荆子中2个木脂素单体化合物6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-羟甲基-7-甲氧基-3,4-二氢-2-萘醛(VB-1)和vitedoin A(VB-2)在大鼠体内的代谢情况进行研究。方法采用超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱(UFLC-IT-TOF-MS)技术,鉴定大鼠分别ig给予2个木脂素单体化合物后,粪便、尿液、胆汁、血浆中的代谢产物。结果发现并确证了2个木脂素原型及其11个代谢产物在大鼠体内的存在。通过代谢产物鉴定分析了其主要代谢途径,发现在大鼠体内这2个木脂素成分发生了葡萄糖醛酸化、硫酸化、羟化、羟化硫酸化、还原葡萄糖醛酸化和还原硫酸化等代谢反应。结论通过对2个木脂素单体化合物代谢产物的分析,基本阐明了其在体内的代谢过程,为进一步的药理活性及其机制研究提供了依据。     

茶属植物及茶多酚类成分对抗原诱导RBL-2H3细胞过敏反应的抑制作用

目的:研究茶属植物及茶多酚类和嘌呤碱类成分对抗原刺激RBL-2H3细胞脱颗粒及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素4(IL-4)释放的抑制作用。方法:测定β-hexosaminidase的释放以评价脱颗粒反应的指标,酶联免疫吸附法测定TNF-α和IL-4的释放,评价茶中主要成分的抗过敏活性。结果:茶属植物均有抑制RBL-2H3细胞脱颗粒作用,其中花类表现出较叶类更强的抗过敏活性;EGCG对抗原刺激的RBL-2H3细胞即刻相(IC50:234μmol·L-1)和延缓相反应(IL4,IC50:158μmol·L-1),及钙离子载体A23187诱导的脱颗粒反应均有抑制作用(IC50:126μmol·L-1)。结论:茶属植物和EGCG具有明显的抗过敏作用。     

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P0.05,P0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P0.05,P0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。     

北葶苈子化学成分研究

目的研究北葶苈子Lepidium apetalum的化学成分。方法采用硅胶,聚酰胺、反相硅胶C18和Sepha-dex LH-20柱色谱对北葶苈子75%乙醇提取物进行了分离纯化。用质谱、一维及二维核磁等波谱学方法确定了化合物结构。结果从北葶苈子中分离得到11个化合物,分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-[2-O-(6-O-芥子酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-吡喃葡萄糖苷(1)、异鼠李素-3-O-β-D-[2-O-(6-O-芥子酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-吡喃葡萄糖苷(2)、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、异鼠李素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、槲皮素(8)、β-谷甾醇(9)、胡萝卜苷(10)、蔗糖(11)。结论所有化合物均为首次从该种植物中分离得到。其中化合物1为首次从该属植物中分离得到,化合物2为首次从十字花科植物中分离得到。