肾上腺髓质素前体N端20肽在不同高血压病中的水平变化

目的：观察原发性高血压（EH）与肾实质性高血压（RH）患者肾上腺髓质素前体N端20肽（PAMP）的水平变化,探讨PAMP的降压机制。方法：用放免法测定EH与RH患者的血浆RAMP、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）水平并计算它们之间的相关关系。结果：EH与RH患者PAMP、NE、E均较正常人明显增高,PAMP、平均动脉压（MAP）与NE有明显相关性。结论：EH及RH患者PAMP增高可能是机体维持自稳态的一种保护性代偿机制,EH与RH代尝程度有所不同。PAMP降压作用与拮抗NE、E有关。     

Digital radiography with a large-scale electronic flat-panel detector vs. screen-film radiography: observer preference in clinical skeletal diagnostics

The imaging performance of a recently developed digital flat-panel detector system was compared with conventional screen-film imaging in an observer preference study. In total, 34 image pairs of various regions of the skeleton were obtained in 24 patients; 30 image pairs were included in the study. The conventional images were acquired with 250- and 400-speed screen-film combinations, using the standard technique of our department. Within hours, the digital images were obtained using identical exposure parameters. The digital system employed a large-area (43x43 cm) flat-panel detector based on amorphous silicon (Trixell Pixium 4600), integrated in a Bucky table. Six radiologists independently evaluated the image pairs with respect to image latitude, soft tissue rendition, rendition of the periosteal and enosteal border of cortical bone, rendition of cancellous bone and the visibility of potentially present pathological changes, using a subjective five-point scale. The digital images were rated significantly (p=0.001) better than the screen-film images with respect to soft tissue rendition and image latitude. Also the rendition of the cancellous bone and the periosteal and enosteal border of the cortical bone was rated significantly (p=0.05) better for the flat-panel detector. The visibility of pathological lesions was equivalent; only large-area sclerotic lesions (n=2) were seen superiorly on screen-film images. The new digital flat-panel detector based on amorphous silicon appears to be at least equivalent to conventional screen-film combinations for skeletal examinations, and in most respects even superior.     

不同烧结温度对双相钙磷陶瓷颗粒材料介孔结构及其成骨性能的影响

目的通过体内外实验检测不同烧结温度下制备的不同介孔直径双相钙磷陶瓷（biphasic calcium phosphate，BCP）颗粒材料成骨能力差异，为筛选具备更好临床应用参数的 BCP 材料提供依据。方法将羟基磷灰石（hydroxyapatite，HA）及 β-磷酸三钙（β-tricalcium phosphate，β-TCP）以 8∶2 比例混合后，分别在 1 050、1 150 及 1 250℃ 下烧制 3 h 制备 3 种 BCP 材料（分别设为材料1、2、3），比表面积测试法（Brunauer-Emmett-Teller test，BET）测量材料的颗粒内部孔隙率及介孔直径、体积、面积，X 线衍射（X-ray diffraction，XRD）评估材料组成成份，扫描电镜观察材料微观表面形态。体外将第 3 代 SD 大鼠 BMSCs 与各材料共培养 7 d（分别设为 A、B、C 组），扫描电镜观察细胞黏附情况，鬼笔环肽染色观察 BMSCs 贴附于材料表面后的形态，细胞计数试剂盒 8 法检测细胞增殖活性。体内建立比格犬异位成骨模型：取 9 只比格犬，于每只犬双侧竖脊肌内制作 9 个肌袋，将肌袋随机分为 3 组（每组 3 个/只），A、B、C 组分别置入材料 1、2、3。术后 1、2、3 个月分别麻醉 3 只比格犬取材行 HE、Masson 及番红固绿染色，计算 BCP 间隙中的成骨面积比；行实时荧光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）检测成骨相关基因 ALP、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）、骨钙素（osteocalcin，OC）的表达。结果BET 检测示随烧结温度增加，颗粒内部孔隙率无明显变化，但介孔直径、体积及面积逐渐减小；XRD 检测示 3 种材料均可见 HA 及 β-TCP 两种 X 线衍射波；扫描电镜观察示 3 种材料表面有广泛分布的微孔，孔间有空隙相连。体外实验示 BMSCs 在 3 种材料表面黏附、增殖，B、C 组材料的细胞生物相容性优于 A 组。体内实验结果示，术后 2 个月开始 3 种材料颗粒孔隙内即可见明显的骨样组织沉积。各组成骨面积比随时间延长均增加，术后 2、3 个月 A 组成骨面积比显著高于 B、C 组，1 个月时显著高于 B 组（P<0.05）。qRT-PCR 检测示，A 组成骨相关基因表达在 2 个月时出现峰值，B、C 组各成骨相关基因表达随时间延长逐渐增加。术后 1 个月 A 组 ALP 和 OPN mRNA 相对表达量显著高于 B、C 组，术后 2 个月 A 组 OC mRNA 相对表达量显著高于 B、C 组，术后 3 个月 B、C 组 ALP mRNA 相对表达量及 B 组 OPN mRNA 相对表达量显著高于 A 组（P<0.05）；其余各时间点各组间比较各基因 mRNA 相对表达量差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论不同烧结温度下制备的 BCP 材料，其介孔直径随温度增加而减小。不同介孔直径的 BCP 材料异位成骨能力存在差异，其中直径为 12.57 nm 的 BCP 材料能更早激活成骨基因，具备更强的成骨能力。介孔直径可作为一个优化 BCP 材料成骨能力的指标。     

Alternative splicing isoforms of hippostasin (PRSS20/KLK11) in prostate cancer cell lines

BACKGROUND: Hippostasin is a kallikrein-like protease (PRSS20/KLK11), which is expressed preferentially in the hippocampus and prostate. We have reported that alternative splicing variants of human hippostasin are regulated in a tissue-specific manner. Brain-type hippostasin consists of 250 amino acids including a typical signal sequence, and is expressed in the brain and prostate. The prostate-type hippostasin, which has 32 extra amino acids at the N-terminal end, is expressed only in the prostate. METHODS: We analyzed the expression and localization of hippostasin in normal prostate tissue, BPH tissue, and prostate cancer cell lines. We performed northern blotting, in situ hybridization, immunohistochemistry, and RT-PCR. RESULTS: Hippostasin mRNA is expressed preferentially in the normal prostate and weakly in the testis. It was detected in prostate secretory epithelium. Hippostasin protein was localized in the prostate secretory epithelium, and western blotting showed that hippostasin was present in semen. All tested prostate cancer cell lines, including PSA-negative cell lines, expressed hippostasin. Interestingly, all the prostate cancer cell lines expressed only brain-type but not prostate-type hippostasin, while normal prostate and BPH expressed both types of hippostasin CONCLUSIONS: Our results suggest the possibility that hippostasin may be a useful marker by which prostate cancer and BPH can be distinguished.     

膀胱癌CK20及Ki-67的表达及相关性

目的 探讨角蛋白20(CK20)和Ki-67在膀胱癌中的表达与膀胱癌的侵袭、转移及预后的关系.方法 用免疫组织化学SP法检测154例膀胱癌组织中CK20和Ki-67的表达.结果 CK20在103例肿瘤组织中有表达,阳性率为66.9%.CK20的表达和膀胱癌的T分期及远处转移呈正相关(P<0.05).Ki-67在126例肿瘤组织中有阳性表达,阳性率为81.8%.Ki-67在膀胱癌组织的表达与肿瘤病理分级、T分期、远处转移呈正相关(P<0.05).Spearman等级相关分析表明两者明显相关(P<0.05).结论 CK20及Ki-67可能参与了膀胱癌的侵袭与转移,CK20与Ki-67可作为预后判断因子,结合病理分级和临床分期分析能提高对膀胱癌患者预后判断的准确性.     

VEGF-C在直肠癌中的表达与临床病理特征的关系

目的 研究VEGF-C在直肠癌中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系.方法 对2007年12月至2008年8月行直肠癌手术治疗的82例中低位直肠癌患者的肿瘤组织标本和各站淋巴结,用免疫组化方法检测VEGF-C在直肠癌组织中以及CK20在直肠癌D3站淋巴结中表达的情况,结合系膜淋巴结的病理结果,阐述VEGF-C在直肠癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系.统计方法采用X~2检验.结果直肠癌中VEGF-C的表达在肿瘤分期各组中差异有统计学意义(X~2=8.529,P<0.05),在无淋巴结转移组和系膜0淋巴结转移组中差异有统计学意义(X~2=4.712,P<0.05),在患者性别与年龄对比中差异无统计学意义(X~2=0.227,P>0.05;X~2=0.037,P>0.05),无淋巴结转移组与系膜淋巴结转移组的VEGF-C表达差异有统计学意义(X~2=4.712,P<0.05),而系膜淋巴结转移组与D3淋巴结转移组的表达差异无统计学意义(X~2=0.017,P>0.05).结论 VEGF-C的表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关,但与患者的性别和年龄无关;VEGF-C的表达在促进直肠癌发生区域淋巴结转移的同时,也可能促进D3淋巴结微转移.     

氯喹通过上调泛素-蛋白酶体相关分子表达抑制LPS活化巨噬细胞的实验研究

目的 观察氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)刺激的巨噬细胞中泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)相关分子A20、TRIM33和USP28表达的影响.方法 应用LPS刺激小鼠Raw264.7细胞,荧光定量PCR检测酸化抑制剂CQ对LPS诱导锌指蛋白A20、泛素连接酶TRIM33和泛素特异性蛋白酶USP28的mRNA表达,Western blot检测CQ对LPS诱导A20和TRIM33的蛋白表达.应用siRNA转染技术沉默A20,荧光定量PCR检测CQ对LPS诱导炎性细胞因子TNF的mRNA表达.结果 与LPS对照组比较,经CQ预处理的Raw264.7细胞中,A20、TRIM33、USP28的mRNA表达均显著上调[(3.197 ±0.013) vs (1.292 ±0.009),(1.627±0.113)vs(0.797±0.083),(1.387±0.144)vs(0.742±0.061),P＜0.05],A20和TRIM33的蛋白表达也同样上调.采用siRNA干扰A20基因表达,则CQ预处理组细胞中LPS诱导的TNF-α mRNA表达显著上调[(7.650 ±0.113) vs (4.145±0.120),P＜0.01].结论 CQ可显著上调LPS活化的巨噬细胞中泛素化相关分子A20、TRIM33和USP28的表达,而干扰A20基因表达可显著上调LPS活化Raw264.7细胞中TNF-α的mRNA表达,提示泛素-蛋白酶体系统及其相关分子参与CQ抑制LPS-TLR4信号通路的活化.     

20（S）-原人参三醇及其ocotillol型差向异构体代谢物的排泄

目的：考察20（S）-原人参三醇（PPT）及其ocotillol型差向异构体代谢物（简称为M1、M2）在尿液、粪便中的排泄情况和两代谢物在胆汁中的排泄情况。方法采用LC-MS/MS法分别测定大鼠尿液、粪便样品和其经葡萄糖醛酸酶水解后PPT、M1和M2的浓度,以及大鼠胆汁样品和其经葡萄糖醛酸酶水解后M1和M2的浓度。结果灌胃给予PPT后72 h,PPT、M1和M2的粪便累积排泄量分别为给药剂量的14.88%、1.34%和0.084%,经酶水解后,其累积排泄量分别为14.77%、1.36%和0.085%,它们基本不经尿排泄;灌胃给予M1或M2后72 h粪便累积排泄量分别为给药剂量的4.41%、47.20%,基本不经尿排泄。灌胃给予M1或M2后36 h胆汁累积排泄量分别为给药剂量的3.01%和0.068%,静注给药M1、M2后36 h,其胆汁累积排泄量分别为给药剂量的8.80%、1.24%。结论灌胃给予PPT后,PPT及其代谢物M1、M2少量经粪便排泄,基本不经尿排泄;M1和M2在大鼠的胆汁排泄具有立体选择性差异。     

AP-2α对基质金属蛋白酶-20作用的研究

目的:通过研究AP-2α转录因子对基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确AP-2α的功能,为研究AP-2α在釉质形成中的作用奠定基础。方法:利用RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统、染色体免疫共沉淀技术等来分析AP-2α与MMP-20启动子区域的转录调控能力。结果:小鼠成釉细胞转染AP-2αsiRNA后,成釉细胞中MMP-20 mRNA的表达水平显著上调。染色体免疫共沉淀结果显示,AP-2α可能通过与MMP-20启动子特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达。双荧光素酶报告基因检测显示预测结合位点突变后,AP-2α对MMP-20启动子的表达水平无显著影响。结论:AP-2α基因沉默可显著上调MMP-20的mRNA表达水平;而AP-2α过表达可显著抑制MMP-20活性。提示AP-2α转录因子与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达水平。