人黑皮素4受体F261S突变基因的克隆和功能验证

目的　研究黑皮素 4受体(MC_4R)基因的新突变F261S是否造成了MC4R蛋白功能改变。方法　用携带F261S纯合突变的先证者及正常人的基因组DNA,PCR扩增突变型及野生型MC4R基因全长,克隆到topo -TA真核表达质粒载体,测序鉴定后转染人胚肾 293细胞。用浓度为 1×10-11 ~1×10-5 mmol/L的α -黑色素细胞刺激素(α- MSH)与表达的MC4R蛋白结合后,用双荧光素酶报告基因测试系统检测胞内cAMP,萤火虫荧光 /海洋腔肠荧光二者强度之比体现了cAMP浓度。结果　α- MSH浓度在 1×10-9 ~1×10-8 mmol/L时野生型胞内双荧光强度比值显著高于突变型细胞(P<0 .05),在 1×10-7 ~1×10-5 mmol/L时差异更为显著 (P<0 .01)。结论　F261S突变使MC_4R介导的信号转导能力下降,此突变与中国人早发性肥胖有关。     

肾上腺髓质素及尾加压素Ⅱ在先天性心脏病肺动脉高压中作用的研究

目的探讨先天性心脏病(CHD)合并肺动脉高压(PH)患者手术前后血浆肾上腺髓质素(ADM)及尾加压素Ⅱ(UⅡ)变化的临床意义。方法将52例患者按肺动脉收缩压分为3组:无PH组(<30 mm Hg)17例,轻度PH组(30~49 mm Hg)18例,中重度PH组(≥50 mm Hg)17例。测定3组术前、术后即刻及术后7 d ADM及UⅡ含量,并比较手术前后的变化;分析两者及其与肺动脉压(PAP)间的相互关系。结果(1)3组患者肺动脉压(PAP)与血浆ADM浓度呈正相关(术前r=0.8012,P<0.01;术后即刻r=0.6325,P<0.01;术后7 dr=0.7126,P<0.01)。(2)3组患者UⅡ浓度则与PAP无相关性(均P>0.05)。(3)无PH组术前ADM浓度为33 pg/m l±5 pg/m l、术后即刻为29 pg/m l±4 pg/m l、术后7 d为20 pg/m l±3 pg/m l;轻度PH组术前ADM浓度为44 pg/m l±8 pg/m l、术后即刻40 pg/m l±6 pg/m l、术后7 d为34 pg/m l±4 pg/m l;中重度PH组术前ADM浓度为60 pg/m l±10 pg/m l、术后即刻58 pg/m l±8 pg/m l、术后7 d为38 pg/m l±4 pg/m l。各组术后ADM浓度呈下降趋势,但只有术后7 d与术前比较差异有统计学意义(无PH组q=5.41,P<0.01;轻度PH组q=4.76,P<0.01;中重度PH组q=6.32,P<0.01)。(4)无PH组术前UⅡ浓度为2.2 pmol/L±0.5pmol/L、术后即刻为2.2 pmol/L±0.44 pmol/L、术后7 d为2.2 pmol/L±0.6 pmol/L;轻度PH组术前UⅡ浓度为2.7 pmol/L±0.6 pmol/L、术后即刻2.6 pmol/L±0.6 pmol/L、术后7 d为2.6 pmol/L±0.5pmol/L;中重度PH组术前UⅡ浓度为2.9 pmol/L±0.6 pmol/L、术后即刻2.6 pmol/L±0.7 pmol/L、术后7 d为2.8 pmol/L±0.4 pmol/L。3组患者手术前后UⅡ浓度差异无统计学意义(均P>0.05)。结论(1)ADM在PH形成和血管重建中发挥重要的作用。(2)UⅡ与PAP无相关性,但是不能排除UⅡ在PH形成和血管重建中有重要的作用。(3)血浆ADM水平可作为判断PH严重程度的指标之一。     

肾上腺髓质素及其受体在增生性玻璃体视网膜病变前膜中的表达

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)及其受体(ADMR)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)前膜中的表达。方法 标本取自2001年7-11月在我院眼科研究所确诊为孔源性视网膜脱离合并PVR行玻璃体手术的10例连续病例,PVR均为C级以上,采用原位杂交法对术中所取标本的ADM和ADMR mRNA表达情况进行观察。结果10例增生性玻璃体视网膜病变前膜中有7例ADM和ADMR mRNA阳性。阳性细胞内分布不均匀,部分细胞以胞质阳性为主,部分细胞的阳性主要出现在胞核。结论 ADM和ADMR在PVR前膜中表达,PVR的发病过程中有ADM和ADMR的参与。(中华眼科杂志,2004,4D：317-320)     

先天性心脏病血浆肾上腺髓质素的测定及临床意义

目的 探讨血浆肾上腺髓质素(ADM)的变化对先天性心脏病病理生理的影响.方法 2005年1月至2007年11月筛选在山东大学第二医院儿内科住院的59例先心病患儿,在心导管检查术中测定血流动力学指数及采血备测,依据血流动力学特征分为高肺血流非肺动脉高压组、高肺血流并肺动脉高压组、紫绀组,平均肺动脉压(mPAP)20mmHg(1mmHg=0.133kPa)为肺动脉高压的标准.选6名正常健康儿童作为对照组.采用特异性放射免疫法检测血浆ADM的水平.结果 先心病惠儿股静脉中的血浆ADM水平较股动脉明显增高(P<0.05);与对照组相比,高肺血流并肺动脑高压组及紫绀组中的ADM明显增高,均P<0.01;股静脉血浆ADM与主动脉平均压,主动脉血氧饱和度及混合静脉血氧饱和度均呈显著负相关;而与肺血管阻力有显著正相关.结论 ADM的变化同肺动脉阻力和缺氧有密切关系,推测ADM水平的升高可能有助于减轻肺动脉阻力和改善缺氧.     

3T3-L1前脂肪细胞中烟碱样乙酰胆碱受体α7对脂肪因子肾上腺髓质素mRNA表达的影响

目的研究3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有胆碱能系统物质mRNA的表达,及烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)α7功能状态对脂肪因子肾上腺髓质素(AM)mRNA表达的影响,初步阐明脂肪细胞中非神经胆碱能系统与肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢性疾病的关系。方法以3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和nAChR α7三种胆碱能系统主要组分的mRNA表达;对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞分别予不同水平的广谱nAChR激动剂尼古丁、特异性nAChR α7激动剂氯化胆碱及特异性nAChRα7拮抗剂甲基牛扁亭碱处理12、24、36h,并设立相应处理时间的空白对照组,应用RT-PCR方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA的表达。结果1.RT-PCR方法证实在3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中均有AChE、ChAT、AChR α7的mRNA表达。2.给予不同剂量的尼古丁和氯化胆碱,干预作用不同时间,3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达水平与相应的空白对照组比较均呈剂量依赖性升高(P<0.05或P<0.01),但随干预作用时间延长,这种剂量依赖性上调效应减弱。二种激动剂以氯化胆碱的剂量依赖性上调效应更明显。而相同剂量下不同作用时间的处理组间无统计学差异(Pa>0.05)。3.拮抗剂甲基牛扁亭碱对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达则呈明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中存在非神经元型胆碱能系统,其中nAChR α7调节脂肪因子AM mRNA的表达,脂肪组织中非神经元型胆碱能系统的重要组分nAChR α7可能在肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢相关疾病的病理生理过程中发挥重要作用。     

妊娠高血压综合征患者血浆与羊水和脐静脉血肾上腺髓质素含量变化

目的:探讨ADM在妊娠高血压综合征(妊高征)患者血浆、羊水和脐静脉血中的变化。方法:对50例正常孕妇和59例妊高征患者血浆进行ADM(1-52)测定,并对其中46例正常孕妇和50例妊高征患者取羊水和脐静脉血进行ADM(1-52)测定。结果:妊高征患者血浆ADM(1-52)值(57.39±16.23)ng/L、羊水(57.09±13.39)ng/L和脐静脉血(61.33±18.75)ng/L,均显著高于正常妊娠妇女血浆(18.59±4.79)ng/L、羊水(20.65±8.75)ng/L和脐静脉血(17.34±6.85)ng/L(P均<0.001)。结论:妊高征患者血浆ADM水平高于正常妊娠妇女,提示妊高征患者ADM的代偿性升高具有保护机体、防止血压进一步升高,防止病情恶化。羊水和脐静脉血中保持高水平的ADM,提示胎儿胎盘可能参与ADM的合成和分泌。     

黑皮素4受体基因多态性与青少年肥胖的相关性研究

目的探讨黑皮素4受体(MC4R)基因V103I多态性与青少年肥胖、血脂的相关性,为控制肥胖提供理论依据。方法选择北京市东城区919名14~17岁初中生进行身体测量、血脂测定和V103I多态性检测。结果青少年各项血脂指标均表现为肥胖组>超重组>体重正常组(P<0.05),肥胖与血脂存在一定相关性;V103I等位基因突变率(G>A)为3.9%;体重正常、超重和肥胖组之间基因型构成和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);男性超重组GG基因型的腰臀比(WHR)略低于GA/AA基因型(P<0.05);血脂指标TC,TG,LDL-C异常者与正常者相比,基因型构成和等位基因频率差异无统计学意义。结论中国青少年MC4R基因V103I多态性突变率与白种人接近,该多态性可能与男性超重有关,但与血脂异常没有显著关联。     

黑皮质素受体4激动剂研究进展

分布在中枢神经系统的黑皮质素受体4（melanocortin receptor 4,MC4R）具有控制食欲、调节体脂平衡以及改变性行为等作用，其激动剂可用于肥胖和性功能障碍的治疗。本文综述了MC4R肽类和非肽类激动剂的研究进展。     

肾上腺髓质素真核表达质粒的构建及其在大鼠近端肾小管上皮细胞中的表达

目的构建大鼠肾上腺髓质素(ADM)真核表达质粒,观察其在大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达。方法提取大鼠肾上腺组织总RNA,RT-PCR扩增ADM全长cDNA;将扩增产物连接于pMT-18T载体,双酶切及测序鉴定重组质粒。用限制性内切酶BamHⅠ/EcoRⅠ分别对pMT-18T-ADM和真核表达质粒pcDNA3.1双酶切;将目的基因定向克隆到pcDNA3.1载体上;对重组质粒进行双酶切鉴定。将重组质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,RT-PCR检测ADM表达。结果特异扩增出ADM片段,大小为585 bp;片段成功插入pcDNA3.1载体中。RT-PCR方法证明NRK-52E中存在ADM高表达。结论成功构建大鼠ADM真核表达质粒,并将其成功转染NRK-52E。     

大鼠脊髓损伤后肾上腺髓质素的mRNA表达

目的;观察大鼠正常及损伤脊髓组织中肾上腺髓质素ｍＲＮＡ的表达。方法;采用原位组织化学杂交技术,对正常及损伤脊髓组织中ＡＭ ｒＲＮＡ的表达进行组织定位,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：正常大鼠脊髓组织即有大量ＡＭｍＲＮＡ表达。损伤后３０ｍｉｎ表达量增加,８ｈ达高峰,２４ｈ后逐渐减少,７２ｈ低于正常组。