早期激素性股骨头缺血性坏死的实验研究

取成年健康英国罗斯鸡１５只，随机分为２组，Ｂ组为对照组，Ａ组注射大剂量甲基氢化泼尼松。结果显示，Ａ组鸡股骨头软骨下骨髓造血细胞减少，脂肪细胞肥大，骨髓水肿及空骨陷窝明显增多。对照组股骨头未见异常，提示股骨头坏死由缺血所致。     

Proliferation of exogenously injected primordial germcells （PGCs） into busulfan-treated chicken embryos

Aim: This study was designed to investigate the effect of busulfan treatment on the proliferation of chicken primordialgerm cells (Fgcs) in vivo, focusing on the preferential settlement of PGCs onto the germinal ridges of chicken em-bryos. Methods: Bustdfan (250 rig/egg) was injected into the egg white of freshly oviposited fertilized eggs, whichwere then incubated. Embryonic developnent and viability were examined, and exogenous PGCs collected from embry-onic blood vessels were injected into the germinal crescent region of recipient enthryos. The nttmber of PGCs residedonto germinal ridges of the right and left sides were compared. Results: Bustdfan had a slight harmful effect on theembryo viabihty and the PGCs proliferation. The number of PGCs resided onto the left side of germinal ridges wasslightly higher as compared with the right side. Conclusion: Busulfan suppressed the viability of embryos and the pro-liferation of endogenous PGCs in the recipient embryos. However, the number of exogenous PGCs proliferated washigher in embryos treated with busnlfan than those without busulfan. Data also suggest the possibihty of a preferentialresidence of PCCs toward the left side of the germinal crescent region as compared with the right, which may be due toa more advanced functional development of the left gonad than the right. (Asian JAndro11999 Dec; 1 : 187 - 190)     

人胃癌鸡胚移植模型的建立及其肿瘤生物学研究

目的 建立人胃癌鸡胚移植模型，为胃癌研究提供一种简便实用的手段。方法 将人胃癌细胞系SGC-7901细胞接种到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上，动态观察移植瘤的形态学及肿瘤生物学特性，分析影响移植瘤成活的因素，并对瘤组织行组织学检查。结果 成功建立了人胃癌鸡胚移植模型，移植瘤组织学结构与人胃癌相似；接种癌细胞数量影响接种成瘤率，癌细胞数量越大，成瘤率越高；移植瘤可诱发大量血管生成并向肿瘤呈放射状集中。结论 将SGC-7901细胞接种到鸡胚上建立鸡胚移植胃癌是可行的，本模型可动态观察胃癌生长，模拟其在体内生长情况，为胃癌研究提供一种简便实用的手段。     

基于荧光共振能量转移技术的快速检测CA16型手足口病病原体新方法的建立及其评价

目的：基于荧光共振能量转移（FRET）技术建立一种柯萨奇病毒A组16型（CA16）手足口病病原体快速检测的新方法,并对检测效果进行评价,使其达到疾病爆发流行期间大样本量检测的要求。方法：采用SDS-PAGE凝胶电脉技术和蛋白浓度定量试剂盒测定CA16鸡卵黄抗体（CA16-IgY）纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测抗体效价及特异性,采用紫外可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（FTIR）和透射电子显微镜（TEM）等方法对所制备的金纳米粒子（AuNPs）及其生物探针（IgY-AuNPs）的尺寸、形貌和性能进行表征;基于FRET技术构建CA16检测体系,通过优化检测体系中IgY-AuNPs浓度、氯化钠（NaCl）用量和荧光恢复时间等指标,对检测方法的灵敏度、特异度和临床样本检测进行评价。结果：CA16-IgY纯度较高,抗体平均蛋白水平为12.15 mg·L^-1,抗体效价高达1：128 000,特异性良好;AuNPs及IgY-AuNPs的UV-Vis、FTIR和TEM观察结果,IgY已成功标记至AuNPs表面,提示已通过静电自组装成功制备了可以特异性识别CA16的IgY-AuNPs。基于FRET技术构建CA16检测体系,体系经优化后,确定IgY-AuNPs的最佳浓度为0.52×10^-3g·L^-1,NaCl的最佳用量为40 μL,荧光恢复最佳时间为90 min,建立的检测方法的标准曲线为I_525nm=15.452IgC-9.746,R²=0.993 2,检测限为1×10⁴ PFU·mL^-1,与临床检测金标准实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法比较,一致率可达93.75%。结论：成功建立了CA16型手足口病病原体的快速检测新方法,可用于实验室和临床检测。     

β-神经生长因子缓释系统对原代培养鸡胚背根神经节轴突生长的影响

目的 制备β神经生长因子(nerve growth factor,NGF)缓释系统,评价其及其组份对体外培养鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)轴突生长的生物学效应.方法 构建含β-NGF 50、100、250μL的缓释系统分别与DRG共同培养,DRG常规培养作为对照组,了解各浓度组DRG的轴突生长;分别利用缓释系统各组份与DRG培养,观察各组轴突生长情况.实验分成6组:对照组(DRG+纤维蛋白原),A组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽+肝素钠+100 μg/Lβ-NGF),B组(DRG+纤维蛋白原+肝素钠+100μg/Lβ-NCF),C组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽+100μg/Lβ-NGF),D组(DRG+纤维蛋白原+100μg/Lβ-NGF),E组(DRG+纤维蛋白原+肝素结合肽十肝素钠).结果 50、100和250μg/Lβ-NGF缓释系统轴突生长是对照组的1.31(P>0.05)、3.78(P<0.01)和3.05(P<0.01)倍;100μg/L组较2.50μg/L组DRG轴突生长明显(P<0.05).实验组A、B、C、D和E组的DRG轴突生长分别是对照组的3.75、1.15、1.12、1.10和1.09倍,与对照组比较仅A组差异有统计学意义(P<0.01).结论 β-NGF缓释系统中释放的β-NGF具有生物活性,可明显促进DRG轴突生长.     

鸡枞菌的培养条件研究

研究鸡枞菌营养要求,实现鸡枞菌的人工栽培.采用液体振荡培养法,研究鸡枞菌菌丝体对不同矿物质、维生素、氨基酸等营养物质的需要.结果表明,鸡枞菌菌丝体在葡萄糖为碳源,氨基酸为氮源时,最适C/N为12～14:1.在分别以谷氨酸、天门冬氨酸和精氨酸为氮源时,鸡枞菌菌丝体的生长最好,其生物量最高,鸡枞菌菌丝体对Ca2 的需要量最大,其次是K1 和Mn2 .对VB1、VB2、VB3,VB5、VC、VM的需要量在3.5mg/L时鸡枞菌菌丝体生物量最高,对VB6、VB12的需要量在2.0～2.5 mg/L时,其菌丝体生物量最高.     

鸡破骨细胞分化因子（chODF)编码基因克隆与序列分析

目的克隆鸡破骨细胞分化因子(chODF)基因,并对其进行序列测定和分析。方法根据GeneBank报道的预测的鸡ODF基因(GeneBank登录号,XM425625)序列,设计引物。从鸡胚额骨分离培养的成骨细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,用SOE-PCR的方法扩增鸡ODF基因全序列。将获得的预期大小的PCR产物插入pMD18-T克隆载体,转化E.coli感受态细胞,提取质粒,进行双酶切鉴定,对含有目的片段的克隆进行序列测定。结果从成骨细胞中成功地克隆鸡ODF基因片段,其结果与GeneBank上报道的预测序列具有很高的相似性,达到99.3%,与人、小鼠、犬的一致性分别为55.4%、52%和55.7%,提示该基因在进化过程的保守。ODF基因全长1203bp,其阅读框起始于第一个氨基酸,终止于最后一个氨基酸,无信号肽,共编码400个氨基酸。结论ODF作为惟一能够直接诱导破骨细胞分化和功能的细胞因子,对它的深入研究可为探讨骨质疏松等代谢性骨病的发病机制及预防、治疗开辟出广阔的领域。     

腹腔注射鸡卵白蛋白对小鼠呼吸道致敏模型的影响

目的 探讨腹腔注射鸡卵白蛋白(ovalbumin, OVA)及OVA联合免疫佐剂对小鼠呼吸道接触OVA引起的致敏作用的影响。方法 将BALB/c小鼠分为空白对照组、阴性对照组(腹腔注射生理盐水)、OVA组(腹腔注射OVA)、OVA+Al(OH)₃组[腹腔注射OVA和Al(OH)₃],每组8只。腹腔注射后第12天,除空白对照组,其余3组小鼠气管滴下OVA,连续3 d,第15天用流式细胞仪测定肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage, BAL)和肺纵膈淋巴结(mediastinal lymph node, MLN)中的免疫细胞(CD45⁺细胞)数目,中性粒细胞(Gr1⁺细胞)、T细胞(CD3⁺细胞)、B细胞(CD19⁺细胞)以及CD4⁺T细胞中调节性T细胞(CD25⁺Foxp3⁺细胞)的百分比。结果 与空白对照组相比,气管滴下OVA后,阴性对照组、OVA组和OVA+Al(OH)<...     

龙葵碱对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型,研究龙葵碱对其血管生成的影响。方法将鸡胚分为对照组和低剂量组、中剂量组、高剂量组（均n＝10）,将培养的人结肠癌细胞系HT‐29细胞株接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上,通过立体显微镜、Image‐proplus6．0图像分析软件及免疫组织化学苏木精‐伊红（HE）染色法,观察移植瘤在CAM上血管生成的特点,及不同龙葵碱剂量对血管生成的影响。结果HT‐29细胞接种到CAM第3～5天,大量血管向瘤体集中,长入或跨越瘤体表面,肿瘤迅速生长。给药后第5天进行拍照,图像分析,定量计算血管新生面积明显低于对照组,且呈剂量依赖性,各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组织化学检测表明不同剂量龙葵碱的微血管密度明显低于对照组,与血管新生面积相一致;ki‐67抗原表达指数逐渐下降,实验组低于对照组,且各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论龙葵碱能明显抑制人结肠癌HT‐29细胞株诱导的血管生成,从而抑制肿瘤的生长,为抗肿瘤血管生成的治疗方面提供了重要依据。     

单色光对鸡视网膜钟基因和钟蛋白昼夜节律表达的影响

禽类具有优越的视觉机能,不仅具有明暗觉,还具有色觉。本实验室前期研究发现,单色光可影响家禽的生长发育、免疫机能和生产性能。视网膜作为禽类生物钟3大中枢振荡器之一,可以感受光照,自发产生分子昼夜节律震荡,与下丘脑和松果体共同调节机体的生物节律。因此,本试验采用红、绿、蓝和白光饲养AA肉鸡,研究单色光对视网膜钟基因昼夜节律表达的影响。结果发现,1不同光色下,鸡视网膜钟基因除Clock外,Bmal1、Bmal2、Cry1、Cry2、Per2和Per3均呈昼夜变化,其中Bmal1、Cry1、Per2和Per3呈昼夜节律性表达,而Bmal2、Clock和Cry2不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使正调控基因Bmal1、Bmal2和Clock表达水平升高;而红光使负调控基因Cry1、Cry2、Per2和Per3表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使Bmal1中值升高,振幅增大,相位提前;红光则使Bmal1中值降低,振幅减小,相位提前;同时,红光使Cry1和Per3中值升高,相位延迟;蓝光使Cry1、Per2和Per3中值降低,振幅减小。2不同光色下,鸡视网膜钟蛋白BMAL1、CLOCK均呈现昼夜变化,其中BMAL1呈现昼夜节律性表达,CLOCK的表达不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使BMAL1和CLOCK表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使BMAL1中值升高,振幅增大,相位提前,红光则使BMAL1中值降低,振幅减小,相位提前。以上结果表明,单色绿光促进鸡视网膜正调控钟基因Bmal1、Bmal2、Clock的表达,使正调控钟蛋白BMAL1和CLOCK水平升高;红光则促进负调控钟基因Cry1、Cry2、Per2、Per3的表达。