聚合酶链反应检测HBV DNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究

聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞，丁雁本文用套式ＰＣＲ检测３１８例患者血清乙肝病毒ＤＮＡ，同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半，以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法１．血清标本来源门诊及住院病人，...     

原位PCR技术

原位ＰＣＲ是一种通过在单细胞或组织切片上对特异的核酸序列进行原位扩增，检测定位的新技术，本文对其基本的原理、发展简史、基本步骤及应用当中的注意事项进行了综述。     

汉族人群载脂蛋白CII基因二核苷酸串联重复序列(TG)n(AG)m及(AG)m多态性

采用套式聚合酶链反应结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术，并构建载脂蛋白CII（ApoCII)基因二核苷酸串联重复序列（TG）n(AG)m及（AG）m序列等位基因梯阶标准；检测正常汉族人群基因型和等位基因频率分布，检出36种（TG）n(AG)m序列基因型、12种等位基因。等位基因为17、18、26－35，其频率分别为0．061、0．011、0．002、0．002、0．054、0．255、0．372、0．084、0．026、0．039、0．052、0．041。检出7种（AG）m序列基因型、4种等位基因。等位基因为6、7、8、9，其频率分别为0．002、0．152、0．812、0．034。与欧洲白种人比较，ApoCII基因二核苷酸串联重复序列（TG）n(AG)m及（AG）m序列等位基因频率分布均具有明显的种族差异性（P＜0．01，P＜0．01）。     

乙型肝炎患者父子间HBV DNA U5样序列的研究

为了探讨乙型肝炎的遗传传递，我们对乙型肝炎患者３８个家系８２个个体检测了血清游离型和外周血单核细胞内整合型ＨＢＶ ＤＮＡ Ｕ５样序列片段和单链ＤＮＡ构象多态性等实验指标。发现男患者及其发病后出生子女Ｕ５样序列检出率均显著高于其发病前出生子女；Ｕ５样序列检出率在ＨＢＰ和其发病后出生子女呈一致性增高；ＨＢＰ与其发病后出生子女可具有完全一致的单链泳动变位结果。     

荧光定量PCR检测宫颈脱落细胞和组织标本人乳头瘤病毒感染的比较分析

目的探讨利用宫颈标本建立快速、灵敏检测宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)16.18型感染的方法.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,检测165例异常宫颈脱落细胞和宫颈活检组织标本HPV 16.18型感染状况.结果 FQ-PCR检测宫颈细胞标本LSIL 60例,HSIL51例,ASC 40例,鳞状细胞癌13例.HPV16.18型DNA阳性率分别为31%、68%、30%、12/13.活检组织标本:CIN Ⅰ级阳性率42%(38/39),Ⅱ为12/19,Ⅲ级为11/15,鳞癌为74%(23/31).结论 FQ-PCR方法检测宫颈细胞标本HPV16.18型感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,适用于大规模筛查和在临床日常工作中采用.     

应用聚合酶链反应技术检测肝组织中的HBV－DNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对４２例肝活切组织石蜡切片中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行检测，并与乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的免疫组织化学及血清学检测进行比较，ＨＢＶ－ＰＣＲ阳性率为７３．８％，高于组织及血清ＨＢｓＡｇ阳性率（分别为５９．５％和５０．０％）。３例病理形态呈肝炎改变，而血清ＨＢｓＡｇ（─）的肝组织中有２例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，提示ＰＣＲ的高度敏感性和准确性。８３．３％的门脉性肝硬变和８７．５％的肝细胞癌组织中ＨＢＶ－ＰＣＲ呈阳性，进一步证实了上述两病与ＨＢＶ的关系密切。我们还发现肝细胞淤胆患者ＨＢＶ感染率较高，ＨＢＶ－ＤＮＡ及组织ＨＢｓＡｇ阳性比例各为６／９和４／８。     

MUS81基因在喉癌中的突变和表达

目的 探讨MUS81基因突变和表达与喉癌发生发展的相关性.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术结合DNA测序检测分析了42例喉癌患者MUS81基因第9、10外显子的突变;应用半定量逆转录-PCR和Western印迹方法分析MUS81基因在喉癌组织中的表达情况.结果 42例喉癌、癌旁组织标本中,癌旁正常组织均无突变,喉癌组织标本中19例发生突变,占45.2%(19/42),11例喉癌组织第9外显子发现有突变,占26.2%(11/42),8 例喉癌组织第10外显子有突变,占19%(8/42),分析表明具有统计学意义(P<0.01).逆转录-PCR结果表明,42例喉癌中有17例MUS81基因mRNA低表达,占40.48%(17/42).Western印迹方法分析结果表明,42例喉癌中有17例MUS81蛋白质低表达,占40.48%(17/42),经统计学分析肿瘤组与对照组差异有统计学意义(P<0.01).分析表明MUS81基因突变与mRNA和蛋白质低表达有显著相关性(P<0.01).统计结果显示喉癌MUS81基因突变与TNM分期、年龄和淋巴结转移无相关性(P>0.05).MUS81基因低表达与TNM分期、年龄和淋巴结转移无相关性(P>0.05).结论 发现MUS81基因在喉癌组织中有突变发生及表达异常,提示MU81基因突变和表达异常可能是喉癌发生及发展的重要因素之一.     

HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症相关性的研究

目的 证明HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症的发病密切相关。方法 HLA-DR、DQ等位基因检测：PCR-SSP分型。结果 发现在大连地区随机选择的精神分裂症患者的HLA-DQ8基因的频率(9．0％)明显高于正常对照(2．5％)。精神分裂症患者的HLA-DR、DQ等位基因的某些位点与免疫指标的改变有相关性。结论 ①HLA-DQ8基因与精神分裂症有关联，可以认为HLA-DQ8基因可能是精神分裂症的易感基因。②HLA-DR、DQ等位基因的某些组合可能是精神分裂症发病的危险组合模式，对预测精神分裂症的基因易感性具有潜在的应用价值。③精神分裂症的免疫指标的改变与HLA-DR、DQ等位基因的某些位点有相关性，说明精神分裂症与它的免疫指标的变化可能有内在的联系。     

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。