Preparation of RBP4 interfering vector and its impact on ERK signaling pathway in human liver LO2 cell line

目的 制备人视黄醇结合蛋白4(RBP4)分子RNAi载体,检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响.方法 分别构建针对RBP4基因表达框5′端和3′端的干涉载体及真核表达载体,经测序和酶切鉴定后将载体转染LO2,RT-PCR和Western blot法确定其干涉RBP4表达的效率,选择干涉较高的载体用于后续实验;Western blot检测ERK1/2的表达及磷酸化水平的改变,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残留量.结果 构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序鉴定结果正确,并有明显的高表达或干涉效果.Western blot结果表明ERK1/2的表达量无明显变化,RBP4高表达组其磷酸化显著下降,RBP4干涉组其磷酸化显著上升.胰岛素刺激后RBP4高表达组的葡萄糖摄取明显下降,RBP4干涉组的葡萄糖摄取明显增加.结论 成功制备RBP4基因的干涉载体并应用于LO2细胞中ERK1/2通路的研究,为后续RBP4的进一步功能研究奠定基础.     

血清视黄醇结合蛋白4对非酒精性脂肪性肝炎的诊断价值

目的探讨血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的临床诊断价值。方法选择经肝活检证实的NASH（42例）、单纯性脂肪肝（28例）和健康体检者（20例）,采用ELISA法检测血清RBP4水平。以肝组织病理学检查结果为金标准,应用受试者工作特征曲线（ROC）评价血清RBP4对NASH的诊断价值。结果 NASH患者血清RBP4水平为37.11±7.68mg/L,明显高于单纯性脂肪肝患者（22.83±6.33mg/L,P〈0.01）和对照人群（19.38±5.46mg/L,P〈0.01）;RBP4诊断NASH的AUC为0.804,灵敏度和特异度分别为79.6%和76.6%。结论NASH患者血清RBP4水平明显升高,可作为诊断NASH的敏感指标之一。     

冠心病患者血清视黄醇结合蛋白4与高敏C反应蛋白的相关性分析

目的 测定冠心病患者血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）和高敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,分析两者与冠心病的相关性.方法 将90例冠心病患者分为急性心肌梗死组30例,不稳定性心绞痛组30例,稳定性心绞痛组30例,另选择30例冠状动脉造影结果正常者为对照组.采用酶联免疫吸附法测定受试者血清RBP4水平,采用增强免疫透射比浊法测定血清hs-CRP水平.结果 急性心肌梗死和不稳定性心绞痛组患者血清RBP4、hs-CRP水平高于稳定性心绞痛组和对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,稳定性心绞痛组血清hs-CRP水平与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,而稳定性心绞痛组患者血清RBP4水平与对照组比较差异尤统计学意义.单支、双支、三支病变组患者血清RBP4、hs-cRP水平均高于对照组（P〈0.05）,但单支、双支与三支病变组之间比较差异均无统计学意义.经Pearson＇s相关分析,冠心病患者血清RBP4与hs-CRP的浓度呈显著正相关（r=0.469,P〈0.01）.结论 血清RBP4、hs-CRP与冠心病存在一定的相关性,可能与斑块稳定性有关,可作为预测斑块稳定性的血清标志物,但其并不能反映冠状动脉狭窄程度及范围.     

肝病患者血清视黄醇结合蛋白的检测及意义

目的探讨血清视黄醇结合蛋白（RBP）水平对肝病评估及预后的意义。方法对223例肝病患者及20例正常对照组采用HITACHI7170全自动生化分析仪运用免疫透射比浊法测定SRBP,进行对比分析。结果各型肝病组血清RBP含量与对照组比较均降低（P〈0．05）,尤其是肝硬化失代偿期、重症肝炎、急性肝炎无黄疸期和慢性肝炎重度期血清RBP含量降低极为显著（P〈0．01）,随病情好转,RBP含量有所上升。肝病患者RBP与前白蛋白PA呈正相关（r=0．83,P〈0．01）。结论血清RBP的水平与肝功能的损害相关,随肝病的加重逐渐下降,可作为评估肝脏损害程度指标之一,对肝病诊治具有指导意义。     

检测尿微量蛋白和尿酶对早期肾损伤的诊断意义

目的：探讨尿标本中视黄醇结合蛋白（RBP）、Br微球蛋白（BrMG）、微量白蛋白（mALB）及r-谷氨酰转肽酶（r-GT）检测在糖尿病肾病（DN）早期诊断中的作用。方法：用免疫比浊法检测尿RBP、BrMG及m—ALB,酶偶联法测定尿rGT、尿肌酐（Cr）。结果：正常对照组中尿RBP／Cr、β2-MG／Cr、r-GT／Cr及m—ALB／Cr的含量分别为（2．32±0．85）mg/mmol、（71．1±27．9）ug/mmol、（5．67±2．47）U／mmol、（1．85±0．31）mg/mmol。在糖尿病无肾病组中其微量白蛋白的含量与正常对照组相近（P〉0．05）,而RBP／Cr、β2-MG／Cr、r—GT／Cr的含量与正常对照组相比差异有显著性（P〈0．05）。在糖尿病初期肾病组和临床肾病组尿RBP／Cr、β2-MG／Cr、r-GT,Cr及m—ALB／Cr的含量均明显高于正常对照组（P〈0．01）。结论：联合检测尿RBP、β2-MG、r—GT及m—ALB是诊断DN早期损伤快捷、可靠的实验室指标。     

血清视黄醇结合蛋白4水平与动脉粥样硬化危险因素的相关性分析

血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）是体内负责结合并转运VitA视黄醇类活性代谢物的一类蛋白质。RBP4功能障碍不仅会导致VitA储存、转运、分布及代谢异常,影响上皮和骨组织的生长、分化、增殖等,也是高血压、血脂异常及动脉粥样硬化（AS）的共同危险因素。本文报道186例AS或冠心病（CHD）患者的血清RBP4水平,并结合血压、血脂、血糖、肥胖指数（BMI）和颈动脉内膜中层厚度（IMT）,初步分析RBP4与AS的关系。     

ATRA和9-cis-RA对缺氧缺糖损伤PC12细胞凋亡的影响

目的探讨不同构型视黄酸[全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA);9顺式视黄酸(9-cis-retinoicacid,9-Cis-RA)]对缺氧缺糖损伤的PC12细胞凋亡的影响,且通过何种受体途径作用。方法实验分组为:未刺激组(0μmol/L RA);1、5、10μmol/L,20μmol/L ATRA;1、5、10、20μmol/L9-CisRA。倒置显微镜观察缺氧缺糖损伤前后细胞形态变化,流式细胞术研究经不同浓度ATRA和9-Cis-RA刺激的缺氧缺糖损伤PC12细胞凋亡水平。ELISA监测ATRA和9-Cis-RA处理4 h后PC12细胞的LDH释放水平以了解其细胞膜损伤水平的差异。结果 ATRA组细胞凋亡率在1μmol/L浓度时与未刺激组无显著差异(P>0.05),从5μmol/L起随着浓度的增高凋亡率显著增高(P<0.05),在10、20μmol/L浓度组均显著高于相同浓度的9-Cis-RA组(P<0.05)和未刺激组(P<0.05);而9-Cis-RA在20μmol/L组凋亡率低于未刺激组,但无显著性差异(P>0.05)。乳酸脱氢酶(LDH)释放水平在ATRA刺激组...     

视黄醇结合蛋白在急性肾损伤早期诊断及分期中的意义

目的观察视黄醇结合蛋白（RBP）在急性肾损伤（AKI）患者尿液中的变化,以探讨其在AKI早期诊断及分期中的意义。方法选择AKI患者62例,按照AKI的分期标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期组,同期选择健康体检者（对照组）40例,分别测定各组血清肌酐（Scr）、RBP、肾损伤分子-1（KIM-1）、尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水平。结果AKI各组Scr、RBP、KIM-1、NAG水平均较对照组显著升高（P均〈0．05）。AKIⅢ期组较Ⅰ期、Ⅱ期组Scr、RBP、KIM-1明显升高（P均〈0．05）;Ⅱ期组较Ⅰ期组Scr、RBP、KIM-1明显升高（P均〈0．05）。结论RBP可以作为AKI早期诊断及评价病情严重程度的指标。     

视黄醇结合蛋白4在糖尿病动脉粥样硬化大鼠血清中的表达及意义

目的 观察脂肪细胞因子视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)与晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein product,AOPP)在糖尿病动脉粥样硬化大鼠血清中的表达,探讨RBP4与糖尿病大血管病变的关系.方法 将36只SPF级健康Wistar雄性大鼠随机分为2组(各18只).A组为正常对照组,饲普通饲料.B组为糖尿病动脉粥样硬化组,饲以高脂高糖饲料并予腹腔一次性大剂量注射链脲佐菌素(STZ)及予维生素D3灌胃,建立糖尿病动脉粥样硬化模型.16 w后所有大鼠空腹过夜,应用10%水合氯醛腹腔麻醉后心脏采血离心分离血清,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测血清RBP4水平,紫外分光光度计法测血清AOPP含量.取腹主动脉做HE染色.结果 B组大鼠血清中TG、TC、LDL-C含量均较A组增高,HDL-C降低,RBP4显著增高.AOPP、血浆致动脉硬化指数(AIP)与RBP4呈正相关.腹主动脉HE染色显示B组动脉壁内侧内膜下有大量泡沫细胞聚集,纤维组织增生,部分纤维化和玻璃样变,并见明显钙化.A组无此改变.结论 根据上述结果,我们认为RBP4参与糖尿病的大血管病变,其可能机制是增强血管内膜氧化应激并影响血脂代谢.