基于组学的多房棘球绦虫分泌蛋白预测与分析

目的 预测多房棘球绦虫的分泌蛋白组,分析分泌蛋白及其信号肽特征,为发展多房棘球蚴病的诊断和治疗方法奠定基础. 方法 采用SignalP4.1对多房棘球绦虫全基因组蛋白序列信号肽进行预测,并依次采用生物信息学软件TMHMM v2.0、Phobius、Big-PIpredictor及TargetP1.1筛选去除假阳性的预测蛋白.随后采用Excel统计信号肽和分泌蛋白的氨基酸序列特征,SPSS19.0对分泌蛋白及非分泌蛋白的氨基酸含量进行科尔莫哥罗夫-斯米尔诺夫检验(kolmogorov-smirnov test,K-S test)和t检验.最后利用京都基因和基因组百科全书自动注释工具(KEGG Automatic Annotation Sever,KAAS)进行分泌蛋白的注释和分析. 结果 在多房棘球绦虫10～780条全基因组序列所编码的蛋白中,共发现875条含有信号肽的蛋白序列,其中307条属于膜结合蛋白;38条含糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定位点;12条定位于线粒体.最终获得了含518条序列的多房棘球绦虫分泌蛋白组.SPSS统计分泌蛋白的信号肽长度集中于11～53个氨基酸,其中疏水性氨基酸含量占61％;且分泌蛋白的氨基酸含量(38～7 809个)显著小于(t=0.203,P＜0.01)非分泌蛋白氨基酸的含量(11～11 194个);KAAS分析显示获得注释的分泌蛋白主要出现在人类疾病、新陈代谢过程、环境信息处理、有机系统、细胞过程和遗传信息处理通路上,其中有6条序列已知和寄生虫感染直接相关. 结论 本研究获得了518条蛋白序列多房棘球绦虫分泌蛋白组,为后续的诊断、疫苗和药物靶点等相关研究提供了生物信息学数据.     

转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究

目的 研究转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用,观察药物作用后细胞凋亡情况.方法 采用MTT法检测青蒿琥酯单用或与转铁蛋白合用对鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制作用,DAPI染色观察CNE2细胞凋亡,流式细胞术分析细胞凋亡率变化.结果 青蒿琥酯对CNE2细胞的IC50值为116 μg/mL,青蒿琥酯合用转铁蛋白后IC50值降为17.4μg/mL,DAPI染色显示青蒿琥酯合用转铁蛋白作用CNE2细胞24h后,细胞出现明显凋亡现象,流式细胞分析结果显示,与对照组相比,青蒿琥酯合用转铁蛋白组作用24h后,细胞出现明显凋亡现象,而平行进行的青蒿琥酯100μg/mL,组相同作用时间没有出现凋亡.结论 转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性有较强增效作用,转铁蛋白与青蒿琥酯合用加速了青蒿酯诱导的细胞凋亡,是转铁蛋白增强青蒿琥酯作用的重要机制之一.     

中医药学发展及精气神在五脏基础上的分立统一

精气神是生命三大要素,精气神是五脏系统的功能保障,而五脏系统是精气神发挥作用的场所和载体。精气神的分立是人形成的基础。精气神在五脏基础上立论,可以更好的阐述中医药学的优势。将五脏系统精气神化,才能真正与现代科学协调并吸收为己用,并走向整体化。精气神辨证可以将证立体功能定位,找到更适合的治疗方法。     

人高迁移率族蛋白组A1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建和鉴定人高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法:针对已经筛选确定的HMGA1基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体(含U6启动子和绿色荧光蛋白)连接产生LV-sh HMGA1慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-sh HMGA1慢病毒载体、pHelper 1.0和pHelper 2.0等3种质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建LV-shHMGA1的慢病毒载体,病毒滴度达5×107TU/ml。结论:人HMGA1基因RNA干扰慢病毒载体的成功构建为进一步应用RNAi技术研究HMGA1基因的功能打下了基础。     

卵巢癌顺铂敏感株C0C1与其耐药亚株C0C1/DDP间的差异蛋白组学分析

随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展及完善，从蛋白质这一全新的角度探讨卵巢癌的顺铂耐药机制已成为可能。本研究采用差异凝胶电泳（difference gel electrophoresis，DIGE）技术比较分析了卵巢癌顺铂敏感株（C0C1）及耐药株（C0C1／DDP）的差异蛋白，期待找到与顺铂耐药相关的关键分子。     

“21世纪迈向精准医学高峰论坛”征文通知(第一轮)

进入21世纪,预测医学、预防医学、个体化医学、参与医学等4P医学成为当今干预医学的基础。20世纪前,人类惯于症兆为基础的见证医学(Intuition Medicine)模式,当今是基于症候群为主的循证医学(Evidence-based Medicine)模式,正迈向未来以数据为基础的精准医学(Precision Medicine)模式跨越,将实现人类健康的5P医学(Predictive Medicine,Preventive Medicine,Personalized Medicine,Participate Medicine,Precision Medicine)。精准医学主要依据个人基因信息,综合蛋白组、代谢组等     

高龋患者与无龋健康人口内变形链球菌蛋白表达差异的初步分析

目的:利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对来自高龋患者和无龋健康人口内变形链球菌临床株的蛋白组进行初步比较,分析二者蛋白表达的差异,以期进一步明确该菌菌株间致龋性存在差异的原因.方法:采用SDS-PAGE技术,比较分离自高龋患者的变形链球菌593号菌株和无龋健康人的变形链球菌18号菌株的菌体和菌外可溶性蛋白表达的差异.结果:菌体可溶性蛋白电泳图中见593号菌株在75 KDa左右存在特异表达的蛋白条带,且二者在85、60、50、40 KDa左右蛋白表达量上存在差异;菌外可溶性蛋白电泳图中见593号菌株在75、40 KDa左右有特异表达的蛋白条带,而18号菌株在50KDa左右有特异表达的蛋白条带,二者在60 KDa左右蛋白表达量上存在差异.结论:两菌株的菌体和菌外可溶性蛋白电泳图谱中均可见各自特异表达的蛋白条带,且部分相同位置的蛋白条带在蛋白表达量上也存在差异,表明两菌株的蛋白组存在明显差异,该差异可能是导致其致龋力差异的原因之一.     

结膜吸吮线虫基因组中分泌蛋白的规模预测及分析

目的 在对结膜吸吮线虫基因组数据进行注释的基础上对其中分泌蛋白进行规模预测及分析。方法 联合应用 SignalP、TMHMM、MEME、Protcomp、big-PI Predictor和 SecretomeP 等多种生物信息学软件进行分析,完成了结膜吸吮线虫分泌蛋白组的预测,对其进行 GO 功能富集、KEGG 通路分析、结构域统计以及具有抗原性分泌蛋白预测等分析。结果 结膜吸吮线虫含有约 259个分泌蛋白,其长度多集中在 100-700 aa ;GO 功能分析发现这些分泌蛋白多富集在分泌途径及宿主互作中;KEGG 分析显示分泌蛋白在药物及谷胱甘肽代谢中发挥着重要作用;候选分泌蛋白的结构域分析发现存在最多为糖水解酶结构域;大规模筛选预测到 126 个分泌蛋白具有B细胞表位抗原性的功能。结论 结膜吸吮线虫分泌蛋白多为小型蛋白,推测这些蛋白可能参与糖代谢、抗氧化活性,协助虫体的入侵及其在宿主体内的寄生。     

慢病毒介导ＲＮＡ干扰抑制脑胶质瘤细胞ＨＭＧＡ１表达对洛铂化疗敏感性的影响

目的：建立逆转录病毒介导入高迁移率族蛋白组Ａ１（ＨＭＧＡ１）基因ＲＮＡ干扰体外表达体系,并观察洛铂对脑胶质瘤细胞株ＳＨＧ-４４化疗敏感性的影响。方法：制备ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ慢病毒载体,ＰＣＲ筛选阳性克隆,测序鉴定;转染脑胶质瘤细胞株ＳＨＧ-４４后,ＲＴ-ＰＣＲ检测其对细胞ＨＭＧＡ１基因表达的影响;ＭＴＴ和克隆集落实验检测洛铂对阳性组和阴性组细胞生长、增殖的影响。结果：ＰＣＲ和测序证实,成功构建ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ的慢病毒载体;ＲＴ-ＰＣＲ证实阳性组细胞存在ＨＭＧＡ１基因表达下调;分别用不同浓度的洛铂处理两组细胞２４ｈ后,ＭＴＴ法和克隆集落实验显示阳性组细胞生长抑制率较阴性组细胞明显降低。结论：ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ能特异性下调脑胶质瘤细胞ＳＨＧ-４４中ＨＭＧＡ１的表达并抑制了其对洛铂的敏感性。