溶菌霉等10种标准蛋白质在高效离子交换色谱上的复性研究

目的研究变性蛋白质在高效离子交换色谱(high performance ion exchange chromatography,HPIEC)上的保留行为及复性效率.方法分别用盐酸胍(GuHCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将溶菌酶(Lys)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为氯化钠的条件下,用HPIEC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率.结果10种变性蛋白质中的4种在HPIEC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好.结论用HPIEC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果,为HPIEC用于蛋白质复性的实际应用奠定了基础.     

晚期氧化蛋白产物的分离纯化和鉴定

目的分离纯化以人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)为原料生成的晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP),即AOPP-HSA,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的AOPP-HSA的方法.方法采用HSA-HOCl孵育法体外制备AOPP-HSA粗纯品,经凝胶层析和离子交换高压液相层析(high performance liquid chromatography,HPLC)两步层析分离纯化其中的AOPP-HSA,并经紫外和荧光光谱、SDS-PAGE、单核细胞TNF-α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性.结果分离的蛋白质纯度达99.4%,分子质量为700×103,是含有双酪氨酸的蛋白交联聚合物,能够显著刺激单核细胞TNF-α的分泌.结论采用上述两步层析方法能够由粗纯品中成功分离出高纯度并具生物活性的AOPP-HSA,为AOPP的进一步研究奠定了基础.     

川贝母总生物碱纯化工艺研究

目的:确定川贝母主要活性部位总生物碱的纯化条件,为其开发利用和产业化生产提供理论依据。方法:以解析液中的总生物碱含量为指标,分别考察H103型大孔吸附树脂和001x7型离子交换树脂对川贝母提取物的最佳吸附及洗脱条件。结果:经H103型大孔吸附树脂纯化后,所得产物的纯度和收率分别为44.3%和0.71%。而经001x7型离子交换树脂纯化后,所得产物的纯度和收率分别为61.4%和1.24%。因此001x7型离子交换树脂对川贝母总生物碱的纯化效果最好,其最佳纯化条件：上样液pH值为2,上样体积为0.75 BV,水洗体积为8 BV,用含5%氯化钠的60%乙醇洗脱,洗脱剂用量为10BV。结论:两种纯化工艺都具有简便、快速、准确等优点,都可用于川贝母总生物碱的富集纯化。但001x7型离子交换树脂对川贝母总生物碱纯化效果更好。     

离子交换树脂纯化黄连生物碱的工艺研究

目的 优选离子交换树脂纯化黄连生物碱的工艺条件。方法 以表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量为指标,考察D113型、D001型、D151型、110型、732型阳离子交换树脂纯化黄连生物碱的效果及优选最佳树脂纯化工艺条件。结果 D151型离子交换树脂比其他树脂具有较优的吸附及洗脱参数;最佳纯化条件为:样品溶液浓度(以生药计)为0.1 g·mL-1、pH＝9,流速为3 Bv/h,洗脱剂为40 %乙醇酸性溶液(含10 %醋酸),用量7 Bv,洗脱温度35 ℃。结论 黄连提取液过D151型离子交换树脂柱前后各成分转移率均在95 %以上,纯化效果好,适用于黄连生物碱的精制纯化。     

盐酸替利定在Amberlite IRP-69上的静态离子交换特性

背景：离子交换树脂分子结构中含有可电离活化的基团,可以与离子性药物交换,使得药物进入其骨架而掩盖不良嗅味。目的：观察盐酸替利定在Amberlite IRP-69上的离子交换平衡特性、热力学及动力学特征。方法;采用静态离子交换法制备盐酸替利定树脂复合物,并进行离子交换平衡特性及动力学特征检测。结果与结论：在293,303,313K3个温度下及研究的浓度范围内,离子交换吸附等温方程、Freundlich方程和Langmuir方程都能够对盐酸替利定在Amberlite IRP-69上的离子交换行为进行很好的拟合。在290,298K下,其离子交换动力学特征基本符合一级动力学方程。盐酸替利定在Amberlite IRP-69上的离子交换热力学参数ΔH〉0及ΔS〉0,表明该离子交换反应为吸热反应,温度升高有利于反应正向进行,且该反应是熵增加的反应;离子交换自由能变ΔG〈0,说明该离子交换反应能够自发进行。初始质量浓度为5g/L的盐酸替利定在Amberlite IRP-69上的平衡交换吸附量为751.88g/L。提示在室温下,可利用一定浓度的盐酸替利定溶液,加入一定量的Amberlite IRP-69作为载体,持续搅拌2h制备药物树脂复合物,进而研制相关制剂。     

高压液相离子交换层析法与微粒色谱法测定糖化血红蛋白的比对

目的 对两种方法测定糖化血红蛋白的实验结果进行比对.方法 用离子交换高效液相色谱(HPLC)法、微粒色谱法测定糖化血红蛋白(HbA1c),并对实验结果进行比较、偏倚分析、离群点检验、线性回归分析、预期偏倚计算.结果 微粒色谱法测定均值为7.13,HPLC法的测定均值为7.36,两种方法结果相对偏差仅为-3.1%.线性回归方程Y=1.0232X-0.250 2.糖化血红蛋白的可接受偏倚在预期偏倚可信区间之内.结论 微粒色谱法与HPLC法结果具有可比性,微粒色谱法可作为常规方法用于临床.     

DS5和DCA2000糖化血红蛋白仪检测糖化血红蛋白的比较

目的:对DS5低压阳离子交换色谱法联合梯度规避法和DCA2000免疫法两种糖化血红蛋白分析仪的不同分析方法进行方法学评价。方法:用低压阳离子交换色谱法联合梯度规避法(X)和免疫法(Y)测定糖化血红蛋白,进行回收率、精密度、干扰因素、相关性及参考范围的分析。结果:两种方法的平均回收率均在95%～104%以内,批内、批间的平均变异系数(CV)均<5%;10.2 mmol/L三酰甘油、8.0 mmol/L胆固醇、10.1%HbF对两种仪器均无干扰,684 umol/L总胆红素对DS5的层析柱有破坏作用,对DCA2000无干扰;两者结果密切相关,相关系数r=0.9957(P<0.01),n=50,直线回归方程Y=1.09X+0.1%;DS5测定糖化血红蛋白结果较DCA2000偏低;DS5和DCA2000两者参考范围分别为4.0%~6.0%和4.3%~6.5%。结论:DCA2000测定结果比DS5偏高。     

抗体Fc片段的离子交换法制备和印渍法鉴定

免疫球蛋白经羧甲基纤维素(CM22)柱交换,并用增加盐浓度分段洗脱,可分得4个蛋白峰。其中,用0.1M醋酸钠缓冲液洗脱出的3个蛋白峰具Fc性质,而用0.225M醋酸钠缓冲液洗脱的蛋白质不与葡萄球菌A蛋白(SPA)相结合。将具Fc性质的组分合并,由木瓜蛋白酶消化后,各蛋白质片段再经CM22柱分段洗脱,得到5个蛋白峰。分离出的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移至滤膜上。膜上各蛋白质用SPA-HRP探针作酶分析,从而鉴定IgG的Fc片段。实验提示,0.225M醋酸钠缓冲液洗脱出的蛋白蜂是抗体Fc片段。     

圆斑蝰蛇泰国亚种（Vipera russelli siamensis）蛇毒凝血X因子激活剂的纯化及部分特性研究

目的从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血Ⅹ因子(FⅩ)激活剂并研究其部分特性. 方法采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化,以血液凝固时间及发色底物(S-2222)进行活性鉴定和温度、pH值、蛋白酶抑制剂对活性的影响,SDS-PAGE进行分子量、等电点及纯度测定,苯酚-硫酸法及间苯二酚-盐酸法测定糖含量. 结果所得促凝组分Ⅳ1能特异性地活化牛FⅩ,从而水解S-2222酰胺键.SDS-PAGE呈现单一蛋白带,分子量为61.1±1.5 kD(还原),60.4±1.9 kD(非还原).等电点为pH＝8.00±0.06.含中性己糖12.4%±0.5%,唾液酸0.12%±0.02%.在50 ℃以下稳定,最适pH为7.0～8.2.可被金属蛋白酶抑制剂EDTA-Na2完全抑制,二硫苏糖醇(DTT)及L-半胱氨酸部分抑制,不受胰蛋白酶抑制剂抑肽酶抑制. 结论从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒分离纯化的FⅩ激活剂是一种碱性糖蛋白,属于Ca2+依赖性的金属蛋白酶.     

离子交换法提取α－酮基－L－古龙酸的研究

用离子交换法对发酵液中维生素Ｃ中间体α－酮基－Ｌ－古龙酸（ＫＧＡ）的提取工艺进行了研究。系统筛选、研究了四种大孔弱碱性阴离子交换树脂对ＫＧＡ的静态和动态吸附性能以及影响因素，并对洗脱条件进行了探索。实验结果表明，Ｅ５树脂对发酵液中ＫＧＡ的提炼是切实可行的。