实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT—PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明：单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C’末端保守的CDR3氨基酸基序（motif）。结论：单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原。     

长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究

目的 观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用.方法 选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染p...     

慢性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白重链片段及其突变状态的研究

目的 探讨我国慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者免疫球蛋白重链可变区基因(IgVH)突变状态、基因偏颇性及其预后价值.方法 应用多重PCR法检测CLL患者表达型IgVH片段使用情况及突变状态,并与患者生存和预后进行相关性分析.结果 ①共检测初诊CLL患者85例,80例(94.1%)成功测序.②IgVH片段的使用存在明显的偏颇性,其中常见的为VH3家族(32例,40.0%)、VH4家族(24例,30.O%),而VH5、VH6和VH7家族少见.VH4-39是最常见的VH基因片段.而J4和D3分别是JH家族和DH家族中使用频率最高的片段.③IgVH突变型56例(70.0%),非突变型24例(30.O%).其中VH3家族突变率为90.7%(29例),VH4家族突变率为62.5%(15例).④突变组与未突变组患者无进展生存时间(82个月和17个月,P=0.000)和总生存时间(90个月和41个月,P=0.009)差异均有统计学意义.⑤CLL患者IgVH CDR3区序列具重现性,2例VH片段为VH1-69的患者其CDR3序列与文献报道序列有很高的同源性.VH片段为VH1-18、VH3-7、VH3-23的患者中分别有2例CDR3序列完全相同.结论 不同地区间CLL患者IgVH基因家族使用情况和突变状态存在一定差异,IgVH CDR3区序列具重现性,推测相对有限的抗原参与了CLL的发病.     

冻干血小板对大鼠难愈合创伤模型的实验治疗

血小板含有20多种生长因子,对于创伤尤其是难愈性创伤具有治疗作用。本研究以糖尿病SD大鼠为基础,建立了一种难愈合创口模型,用于评价冻干血小板对难愈性创伤修复的治疗作用。采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)65mg/kg对大鼠腹腔注射制备糖尿病模型。取正常大鼠10只,糖尿病大鼠20只,将其分为正常对照组(NDR)、糖尿病对照组(DR)和冰冻干燥血小板治疗组(TLP);在各组大鼠背部造成直径2cm圆形创面,分别于第l、3、5、7、12天进行创面照相和透明膜描计法计算创面愈合速度。结果显示,注射STZ72小时后糖尿病组血糖明显高于16.7mmol/L。1周后糖尿病大鼠体重与正常对照组比较明显减轻(p<0.05)。糖尿病对照组创口的愈合速度在各个时间点均低于正常对照组创口(p<0.05),冰冻干燥血小板治疗组创口愈合速度显著快于糖尿病对照组。第12天时,正常对照组和治疗组创口再上皮化率分别达到88.1%和81.8%,而糖尿病组只有62.8%。结论 :以链脲佐菌素建立的糖尿病大鼠能成功制备难愈合创口模型,冰冻干燥血小板对该难愈性创伤模型具有治疗作用。     

柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物

目的 建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链( MTXPG)的方法.方法 采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈( V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样...     

CRISPR/Cas系统在分子检测中的应用

近年来,成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律短回文重复序列相关蛋白(CRISPR/Cas)系统凭借其简单、高效的基因编辑能力,已被广泛应用于生物、医学等多个研究领域。随着CRISPR技术的快速发展,CRISPR/Cas系统已被开发为一种快速、便携、低成本、高灵敏度的分子检测工具,在病原体检测、耐药性分析、单核苷酸多态性(SNP)分型、肿瘤基因突变检测等方面取得重大突破。文章就不同Cas蛋白在分子检测中的最新研究进展进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为从事相关领域的科研工作者提供参考与帮助。     

二甲硅油散和链酶蛋白酶颗粒联合应用在胃镜检查中的价值评估

目的:分析二甲硅油散和链酶蛋白酶颗粒联合应用在胃镜检查中的价值。方法:选择2018年1月—2019年1月在我院行胃镜检查的900例患者作为研究对象,按照随机数表法分为两组,对照组450例,检查前口服二甲硅油散,观察组450例,检查前口服二甲硅油散与链霉蛋白酶颗粒进行消化道准备。比较两组患者的胃镜检查视野清晰度、检查时间及微小病变检测结果。结果:观察组胃窦、胃体上部、胃体下部、胃底四个部位的视野清晰度评分及出血点、溃疡、红斑微小病灶检出率均显著高于对照组(P<0.05),检查时间显著低于对照组(P<0.05),糜烂、凹陷与息肉性增生微小病灶检出率无明显差异(P>0.05)。结论:胃镜检查前口服二甲硅油散与链酶蛋白酶颗粒进行消化道准备,缩短检查时间,值得推广。     

B-NHL患者骨髓和外周血细胞克隆性IgH基因重排的检测及临床意义

为探讨骨髓(BM)和外周血(PB)细胞克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)分期、疗效及预后判断方面的价值,采用半巢式PCR,对治疗前B-NHL患者BM 46例和PB 38例及治疗缓解后的BM和PB 10例进行了该标志的检测.对照组为非肿瘤或非B细胞来源肿瘤患者的BM或PB共33例.结果显示在B-NHL组,治疗前形态学有瘤细胞侵犯的3例BM及2例PB,克隆性IgHCDR3重排阳性;在形态学未见异常的BM和PB中克隆性IgH重排阳性率分别为65.1%及44.4%,与B-NHL分期及有无全身症状无关.10例病理组织克隆性IgH重排阳性的病人,7例缓解后BM和PB重排转为阴性,处于持续完全缓解状态;2例行自体外周血干细胞移植后BM或PB重排持续阳性者复发;1例移植后10个月BM克隆性IgH重排阳性,仍处于完全缓解.对照组33例中仅1例克隆性IgH重排阳性,本方法的特异性为97%.研究提示,PCR法能早期诊断BM及PB的瘤细胞浸润.临床缓解期BM或PB克隆性IgH重排阳性预示可能近期复发,阴性者可能持续缓解,个别IgH阳性者仍长期生存,其机理有待进一步研究.     

血清FABP、cTnT联合检测在急性心肌梗塞诊断中的应用

目的探讨血清脂肪酸结合蛋白(FABP)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)联合检测在急性心肌梗塞(AMI)诊断中的作用。方法26例AMI患者、40例骨骼肌损伤及40例健康者采用酶免疫一步法检测血清FABP、cTnT,竞争抑制法检测CK-MB。结果AMI患者早期(1h～25h)FABP增高,随后(3h～2w)cTnT增高。同时测定FABP和cTnT最少一项增高,其阳性率为100%(26/26),诊断窗口时间明显高于其它各种组合检测。结论血清FABP、cTnT联合检测在AMI诊断中具有重要意义。