输液泵在改良人源多肽抗生素LL-37表达量的应用和探析

目的改良毕赤酵母发酵条件,提高人源多肽抗生素LL-37表达量。方法用无油气体压缩机供氧,电脑输液泵控速给养料的方法,对毕赤酵母发酵进行改良。结果改良方法提高了毕赤酵母表达量约1.65倍。结论无油气体压缩机对发酵中氧气的供给、电脑输液泵控速给养料的改良方法,提高了LL-37的表达量。     

肽抗生素hPAB-β在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

目的 构建表达人源肽抗生素hPAB-β的重组毕赤酵母,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法 用PCR及引物延伸法得到天然及优化的hPAB-β序列,克隆入pPIC9K质粒,转化DH5α大肠埃希菌,用酶切和核苷酸测序鉴定.重组质粒经SalⅠ酶线性化,整合入毕赤酵母GS115中,在DNA,mRNA及蛋白水平鉴定阳性重组子.结果 构建的含天然及优化序列的重组质粒酶切均可得到相应大小的插入片段,与预期相符,测序结果表明序列和阅读框均正确.线性化的重组质粒转入GS115后,得到7个不同的高拷贝阳性转化子,均能表达重组肽并具有良好的抑菌活性.结论 本研究成功构建含天然及优化hPAB-β序列的重组毕赤酵母工程菌,能够用于肽抗生素hPAB-β的制备.     

食品和公共场所从业人员接种不同剂量国产重组酵母乙肝疫苗效果分析

[目的]评价饮食和公共场所从业人员接种2种不同剂量重组酵母乙肝疫苗的免疫效果。[方法]2004～2010年,应用2种国产重组乙肝疫苗对在某部常规体检的饮食和公共场所从业人员(Ⅰ组和Ⅱ组)按照0、1、6的免疫程序进行接种,全程接种后1个月、1年检测血清抗-HBs。[结果]合计调查5 886人,全程接种重组(酵母)乙肝疫苗1月后抗-HBs阳转率,Ⅰ组为86.07%、Ⅱ组为95.28%(P<0.01);全程接种重组(酵母)乙肝疫苗1年后,抗-HBs阳转率Ⅰ组为78.90%、Ⅱ组为89.67%(P<0.01)。接种1个月后,抗体滴度Ⅰ组为225±1.25mIU/ml、Ⅱ组为390±1.37mIU/ml(P<0.01);接种1年后,抗体滴度Ⅰ组为126±1.18mIU/ml、Ⅱ组为224±1.08mIU/ml(P<0.01)。[结论]对饮食和公共场所从业人员按0、1、6个月接种程序,每次分别接种20μg重组酵母乙肝疫苗可以取得较好的效果。     

大学生重组酵母乙肝疫苗免疫效果观察

乙型肝炎(乙肝)是一种严重危害人类健康的传染病。现认为应用乙肝疫苗是预防并最终控制乙肝的唯一有效的手段[1],但是按照当今通用的0、l、6个月免疫程序接种乙肝疫苗后,仍有部分人群的抗-HBs为阴性或达不到保护的阈值(<10mlU/ml),而发生乙型炎病毒(HBV)感染。无或低应答的发生     

西吡氯铵含漱液与西帕依固龈液联合使用对口腔假丝酵母感染治疗的研究

目的研究含漱西吡氯铵对口腔假丝酵母感染患者的治疗效果和西吡氯铵与西帕依固龈液联合使用对口腔假丝酵母菌感染患者的治疗效果。方法选取2014年12月-2016年12月在医院接受治疗的口腔假丝酵母感染患者225例,分为试验组113例和对照组112例,试验组采用西吡氯铵与西帕依固龈液联合使用,对照组采用含漱西吡氯铵;观察两组患者治疗前后临床症状的改善情况、红斑黏膜和口腔疼痛评分的改善情况及患者经治疗后的疗效。结果治疗后,两组患者口腔真菌清除效果,差异无统计学意义;治疗后,试验组红斑黏膜评分和口腔疼痛评分分别为(0.45±0.12)分和(0.44±0.17)分低于对照组(0.91±0.19)分和(0.95±0.21)分,两组红斑黏膜评分和口腔疼痛评分比治疗前降低(P均0.05)。两组菌落数均减少,但差异无统计学意义;两组患者口腔真菌清除效果,差异无统计学意义。结论西吡氯铵与西帕依固龈液联合使用在一定程度可有效清除口腔假丝酵母,改善患者临床症状,缓解患者痛苦。     

布拉酵母菌散剂治疗小儿消化不良性腹泻疗效观察

目的观察为消化不良性腹泻患儿应用布拉酵母菌散剂治疗的效果,探讨布拉酵母菌散剂的应用价值。方法将100例消化不良性腹泻患儿按随机数字表法分成两组,给予两组患者常规治疗,包括口服密斯达、静脉滴注利巴韦林等,除常规治疗外,为实验组应用布拉酵母菌散剂治疗,观察两组治疗效果。结果实验组脱水纠正、止吐、退热、大便次数恢复正常、大便性状恢复正常的时间分别为（1．21＋0．56）、（1．60＋0．59）、（2．35＋1．05）、（3．85＋0．98）、（4．36＋1．21）d,均短于对照组．且两组差异具有统计意义（P〈0．05）;比较两组临床治疗有效率,实验组明显高于对照组（92．0％VS76．0％,P〈0．05）。差异有统计学意义。结论与对照组相比,实验组消化不良性腹泻患儿的治疗效果更佳,布拉酵母菌散剂具有较高的临床应用价值,值得关注。     

具有抗癌活性的有机锗化合物研究进展

锗以化合物的形式存在于自然界中,大致可分为无机态和有机态两大类:1.无机锗:属于电子材料的一种,只能外用贴敷,用于消炎.人的肠道对无机锗的吸收效果差,吸收过多会引起中毒,因此应避免服用.2.有机锗:又分(1)合成有机锗:羟乙基锗倍半氧化物,即Ge-132.螺锗、呋喃锗衍生物等一类抗病毒、抗炎、抗癌有机锗,是具有广泛药理作用的化合物,但服用过多易引起缺钙.(2)天然有机锗:由天然植物中提取,或直接食用,对人体无任何毒副作用.(3)生物有机锗:是将锗化合物植入生物体内,如酵母、细菌、大型真菌、蔬菜等.     

长效人白细胞介素4拮抗剂的研究

目的：研制保留白细胞介素4受体（IL-4R）结合能力,但不具有激活下游信号活性的人白细胞介素4（IL-4）突变体M5,并通过抗体Fc融合延长其体内半衰期,为变态反应病药物研发提供基础。方法全基因合成人IL-4突变体M5,将其克隆到pBV220表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达M5蛋白。同时构建嵌合基因M5-IgG1 Fc,并克隆到pPICZαA载体中,电转化糖基工程毕赤酵母GJK01,经甲醇诱导,分泌表达M5-IgG1 Fc融合蛋白。利用CTLL-2／IL-4R细胞测定纯化所得M5蛋白、M5-IgG1 Fc融合蛋白的IL-4拮抗活性,最后利用ELISA试剂盒检测比较两者在小鼠体内的清除速度。结果由大肠杆菌DH5α表达的M5蛋白和糖基工程酵母GJK01表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白都具有IL-4拮抗活性,它们在CTLL-2／IL-4R细胞上拮抗IL-4（5．6×10-2 nmol／ml）的EC50分别为（0．31±0．05）和（0．77±0．03）nmol／ml。小鼠体内M5蛋白在注射后0．5 h时达峰,其在血液中的含量为5．8×10－2 nmol／ml,而在2 h时血药浓度已下降为峰值的2．8％,在8 h时低于ELISA试剂盒的检测限。 M5-IgG1 Fc融合蛋白在注射后0．5 h时血液中浓度也达到峰值,为4．7×10－2 nmol／ml,120 h时其血药浓度下降为峰值的4．3％,而168 h时低于ELISA试剂盒的检测限。结论 M5蛋白具有IL-4拮抗作用。由糖基工程酵母表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白不仅具有IL-4拮抗活性,而且在小鼠体内具有较长的半衰期,为下一步将其研发为治疗变态反应病的药物提供了理论基础。     

人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定

目的研究人纤溶酶原kringle区缺失突变体（PLGAK）的毕赤酵母（Pichia pastoris）表达、产物纯化及理化性质鉴定。方法采用7．5L发酵罐对工程菌PLG△K／GS115进行高密度培养、甲醇诱导表达,培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥。等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测PLG△K等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403分别测定PLG△K激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性。结果7．5L高密度发酵可获得约为400mg／L培液的表达量,经三步纯化后制备的PLG△K纯度大于96％。理化分析显示PLG△K的等电点为7．5～7．8,分子量：27．787kD,比活性：23．6U／mg。结论初步建立了PLG△K的酵母高密度发酵及纯化工艺,所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近,具备放大生产和应用的潜力。