毕赤酵母工程菌高密度发酵肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的研究

目的研究重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)巴斯德毕赤酵母工程菌发酵工艺。方法首先用摇瓶对工程菌的甲醇诱导周期、甲醇浓度、pH进行研究 ,在此基础上 ,采用 5L发酵罐补料培养进行中试研究。结果人可溶性TRAIL巴斯德毕赤酵母菌在pH 6 .0、甲醇诱导浓度 1%的条件下诱导 96h ,目标蛋白质浓度最高 ,可达 72 .8mg/L。 5L发酵罐培养放大 ,可以达到 184mg/L。结论此发酵工艺可以较好地提高人可溶性TRAIL工程菌的分泌表达。     

重组人白介素18的发酵、纯化及功能鉴定

目的:利用构建的重组菌株Pichia pastoris X-33/hlL-18,在3.7L发酵罐中表达重组人自介素18(hIL-18),探讨其大规模发酵及纯化工艺.方法:复苏工程菌X-33/hIL-18于BMGY培养基,在其A600鲫达到6左右时转入发酵罐进行高密度发酵.发酵液经过滤浓缩柱、疏水层析和阴离子交换层析分离纯化.结果:工程菌在3.7 L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH 6.0,溶氧值(DO)20%～30%,温度28℃,甲醇诱导48 h重组hIL-18的表达产量为202 mg/L,发酵液经纯化后纯度可达97%以上,并初步证明重组hIL-18能协同IL-2诱导PBMCs分泌IFN-γ和协同IL-2增强NK细胞的杀伤活性.结论:利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的重组hIL-18,为进一步研究其活性和功能奠定基础.     

成人接种重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗后效果观察

目的观察重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗在成人中的免疫效果。方法对HBsAg、抗HBs、抗HBc三项指标全部为阴性、且未接种过乙肝疫苗的162名16岁以上人群,按照0、1、6的免疫程序接种10μg重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗,于全程免疫1个月后采血,测定血清中抗HBs水平。结果接种重组(酿酒酵母)乙肝疫苗的99人,抗HBs阳转率为94.95%,几何平均浓度为331.08mIU/mL;接种重组(汉逊酵母)乙肝疫苗的63人,抗HBs阳转率为98.41%,几何平均浓度为270.79mIU/mL。两组间抗HBs阳转率和几何平均浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。接种两种疫苗均未观察到明显的不良反应。结论重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗均具有良好的安全性和免疫原性。     

鞣酸蛋白酵母散治疗婴幼儿秋季腹泻疗效观察

目的评价鞣酸蛋白酵母散治疗婴幼儿秋季腹泻的疗效和安全性。方法82例秋季腹泻患儿随机分成治疗组和对照组,两组均采用相同的抗病毒及对症治疗。治疗组46例加服鞣酸蛋白酵母散,对照组36例加服思密达散剂,观察两组疗效。结果治疗组和对照组显效率分别为73．9％和27．8％．总有效率分别为93．5％和75．0％。且治疗组在平均治愈时间上明显短于对照组。结论鞣酸蛋白酵母散治疗秋季腹泻有效、安全,并可缩短病程,提高有效率。     

氨基酸和酵母膏对谷胱甘肽发酵的影响

研究了氨基酸和酵母膏对酵母发酵生产谷胱甘肽（ＧＳＨ）的影响。结果表明，多种氨基酸能促进酵母的生长，对ＧＳＨ的生物合成却没有明显促进作用，而半胱氨酸则表现为在抑制酵母生长的同时显著提高胞内ＧＳＨ含量。半胱氨酸初始浓度为５ｍｍｏｌ／Ｌ时ＧＳＨ比产生速率最大，为３．７ｍｇ·ｇｃｅｌ－１·ｈ－１。酵母膏对酵母的生长和ＧＳＨ的合成均有显著的促进作用。若不添加酵母膏，则３％糖浓度下胞内ＧＳＨ含量只有１％糖浓度下的５０％；而若在３％和１％糖浓度下分别添加０．６％的酵母膏，前者胞内ＧＳＨ含量比不加酵母膏的对照提高了一倍左右；３％糖浓度（补糖操作）发酵液中ＧＳＨ总量（９２．５ｍｇ／Ｌ）比１％糖浓度的ＧＳＨ总量高４８％。     

小鼠巨细胞病毒即刻早期基因M122酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测

目的构建小鼠巨细胞病毒(MCMV)即刻早期基因M122的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M122,并检测其自激活作用及对酵母AH109菌株有无毒性作用,用于筛选小鼠胚胎脑cDNA文库。方法采用反转录(RT)-PCR的方法扩增MCMV的M122基因片段,并将其插入到pMD18-Tsimple vector,构建重组质粒pMD18-T-M122。用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将重组质粒酶切鉴定,并测序。测序正确的pMD18-T-M122重组质粒和载体pGBKT7-BD分别用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,凝胶回收M122基因片段及pGBKT7-BD载体片段。将回收的M122基因片段和pGBKT7-BD载体片段,用T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建诱饵质粒pGBKT7-M122。对pGBKTT-M122进行酶切鉴定,测序。将测序正确的pGBKT7-M122转化AH109酵母感受态细胞,转化菌液涂布于营养缺陷培养基SD/-Trp平板和SD/-Trp/X-α-Gal平板。空载体质粒pGBKT7-BD和阳性质粒pCL作为对照亦被转入AH109酵母感受态细胞,转化菌液分别涂布于SD/-Trp平板和SD/...     

白色念珠菌ERG11突变基因在毕氏酵母中的表达

目的 将含有点突变的白色念珠菌编码基因ERG11克隆至毕氏酵母中进行表达,判断其在白色念珠菌对氟康唑敏感性中的作用.方法 将含有点突变的白色念珠菌编码基因ERG11与pPIC3.5K载体重组,构建pPIC3.5K/Ca1.6k重组体,经Top10F'鉴定和筛选,电转入毕氏酵母GS115中,经过诱导表达出现目的 蛋白后,进行药物敏感性试验,确定点突变与耐药的关系.结果 含Y132H突变转化菌株和含Q474K突变的转化菌株对氟康唑的MIC分别上升16倍和8倍,证实其突变与耐药有关.结论 氟康唑耐药可发生于白色念珠菌编码基因ERG11的Y132H与Q474K点突变中.     

利用酵母双杂交系统筛选NKD1结合蛋白质

目的:酵母双杂交技术筛选结肠癌细胞中与裸角质层同源蛋白1(naked cuticle homolog 1,NKD1)相互结合的蛋白质,从而进一步了解NKD1.方法:以结肠癌细胞SW480的cDNA为模板,克隆NKD1基因,并将其成功构建在pGBKT7诱饵载体上.利用酵母双杂交技术从结肠癌SW480细胞文库进行筛选.结果...     

阴道酵母样真菌感染的3种实验室检测方法比较

目的采用3种方法平行检测阴道酵母样真菌感染，比较它们的优缺点，寻求最佳检测方法。方法对患有阴道炎病人的阴道分泌物同时用改良盐水湿片法、超高倍显微诊断仪（MCMDI）法扣酵母样真菌培养法进行检测，然后作统计分析。结果共检测420例阴道炎病人标本，改良盐水湿片法、MCMDI法扣培养法的阴道酵母样真菌检出阳性率分别为22．38％（94／420）、39．52％（166／420）争40．00％（168／420），后两法栓出总符合率达97．62％。结论改良盐水湿片法、MCMDI法都能快速检测酵母样真菌，但前者比后者阳性率低，容易漏诊；MCMDI法跟培养法的阳性率差不多，可用作早期快速诊断，而培养法虽然阳性率高，且可鉴定到菌种扣做药敏试验，给临床用药提供参考，但耗时长（平均3～5d），不利于快速诊断扣早期治疗。     

HBIG联合国产、进口重组乙型肝炎疫苗阻断乙型肝炎母婴传播的效果观察

目的了解乙肝免疫球旦白（HBIG）分别联合相同剂量国产、进口重组（酵母）乙肝疫苗阻断乙肝病毒（HBV）母婴传播的效果。方法用HBIG分别联合国产、进口乙肝疫苗10μg／0．5mL免疫乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒膜抗原（HBeAg）双阳性或只有HBsAg阳性母亲的新生儿共130例,采用0、1、6个月接种程序,测定乙肝病毒表面抗体（抗-HBS）滴度及HBsAg。结果国产组新生儿HBsAg阳性率为1．49％,保护率为98．14％;进口组新生儿HBsAg阳性率4．76％,保护率为94．05％。两组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HBIG联合国产、进口10μg乙型肝炎重组（酵母）疫苗阻断乙肝母婴传播的效果同样良好。