甘蔗渣纤维素固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

匀浆状甘蔗渣纤维素用NaOH活化后，顺次经过高碘酸钠、尿素、甲醛处理，成为高反应性固定化酶载体，可用于木瓜黄蛋白酶的固定化，其酶蛋白的结合量与甲醛处理时间、酶固定时间、溶液酶浓度等有关，甲醛处理最适时间为14h，酶固定8h后，载体结合酶量趋向稳定；溶液酶最佳浓度范围为1－2．0mg/ml粗酶，固定化酶活力回收达34．5％，半衰期35天，固定化酶和溶液酶的Km值（底物酪蛋白，w/v,%)分别为0．12％和0．26％；固定化酶和溶液酶的最适PH分别为PH8．0和PH8．5，二者的最适温度均为60－70℃。固定化酶和溶液酶一样有底物抑制现象，固定化酶在6mol/L脲中处理6h活力趋向稳定，其活力为原有活力的46．75，用固定化酶处理啤酒，啤酒浊度下降了2－9．25倍，蛋白质含量下降了78．8％，冷藏120天，处理啤酒无冷混浊现象发生，同时啤酒原有风味和其它理化指标保持不变。     

高原鼢鼠肉木瓜蛋白酶酶解物对小鼠免疫功能的影响

目的研究高原鼢鼠肉蛋白的木瓜蛋白酶酶解物生理活性功能,对酶解物进行了免疫活性实验。方法通过MTT法和中性红比色法测定其对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、网状内皮系统吞噬功能、NK细胞杀伤毒性,鼠抗体生成脾细胞数(IgM-PFC)的影响。结果酶解物高、中剂量与对照相比有显著差异,而其中以高剂量组的活性最明显,能够显著提高小鼠淋巴细胞的增殖能力;激活小鼠网状内皮系统,增强吞噬功能;增强NK细胞活性;增加小鼠脾脏的抗体生成细胞数。结论高原鼢鼠肉蛋白的木瓜蛋白酶酶解物能明显提高正常小鼠细胞免疫、体液免疫及NK细胞杀伤毒性的能力。     

海带多糖的脱蛋白研究

海带多糖是海带中重要的生物活性成分,不仅具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、提高免疫力的特殊医疗保健功能,而且在抗病毒、抗菌、抗疲劳方面起了重要的作用[1-3].由于我国海带资源非常丰富,海带多糖的研究受到人们的普遍关注.多糖的提取方法很多,但在提取过程中都有蛋白质伴随产生,所以除去蛋白质是多糖提取纯化的一个关键步骤.     

木瓜,吃出营养

木瓜，生吃更营养 木瓜素有“百益之果”“水果之王”“万寿瓜”等美称。其含90％的水分，5％～6％的糖，少量的酒石酸、枸橼酸、苹果酸、木瓜苷、木瓜碱等。虽然木瓜的吃法很多，但相对而言，生吃、做水果沙拉、榨木瓜汁、凉拌青木瓜等，比熟食更有营养。生木瓜搭配肉类一起吃，其含有的木瓜蛋白酶则是良好的蛋白质分解酶，可以帮助人体分解肉类蛋白质，促进消化。     

木瓜撞奶

"木瓜撞奶"这款甜品与传统广式甜品"姜撞奶"有异曲同工之妙。这款布丁甜品无需吉利丁、鱼胶粉、琼脂等凝固剂,是利用木瓜中的木瓜蛋白酶和牛奶中的蛋白质发生化学作用凝固而成。木瓜中含有一定的天然果糖,可以减少甜品额     

木瓜蛋白酶水解对β-酪蛋白膜的形态和黏弹性的影响

目的：评价木瓜蛋白酶水解对牛β-酪蛋白（β-CN）膜表面形态和黏弹性的影响。方法：将β-CN通过自组装固定于芯片表面,采用消散因子石英晶体微天平（quartz crystal microbalance with dissipation,QCM-D）测量β-CN膜能量消散因子（△D）和频率（△F）和黏弹性变化。β-CN膜水解前后的表面形态变化通过原子力显微镜（atomic force microscopy,AFM）表征。结果：伴随着酶浓度提高,残余的β-CN膜的黏弹性增加（P＜0．05）。AFM图像显示水解后残余的β-CN膜的厚度和粗糙度均降低。结论：木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白β-CN膜的反应具有浓度依赖性特征;水解反应使膜变得较薄而光滑,且更加紧凑和较硬。     

木瓜蛋白酶降解壳聚糖

通过粘度测定、还原端基测定和凝胶层析分子式量分布测定 ,研究了木瓜蛋白酶非专一性降解壳聚糖过程中温度、pH值、反应时间和酶用量等因素对木瓜蛋白酶降解能力的影响 ,探讨了壳聚糖脱乙酰化度和相对分子质量与木瓜蛋白酶降解反应的关系 .结果表明 :木瓜蛋白酶在温度4 0～ 4 5℃、pH 4 .0～ 5 .0和酶用量 0 .5 %～ 10 %范围内 ,对壳聚糖的降解将随酶用量的增加而加快 ,但随脱乙酰度的升高而减慢 ;木瓜蛋白酶适合作用于数均分子式量在 2 0～ 5万的虾壳聚糖 .     

酶催化合成CCK-4三肽片段

目的 探讨酶法合成胃泌激素CCK-4 C-末端片段三肽衍生物Phac-Met-Asp(OMe)-Phe-NH2。方法 以Phac-Met-OCam为起始原料，采用三种蛋白酶，即α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶(α-chymotrypsin，papain，thermolysin)，经过三步酶促反应得到目标三肽化合物；研究了酶催化条件下Met-Asp肽键的形成以及天门冬氨酸双酯中α-酯的酶催化条件下的选择性水解；对酶以及反应介质的选择等酶促合成条件进行了研究。结果 三步酶促反应均可得到较合适的收率(63％～92％)，产物经FAB-MS、FD-MS质谱确认。结论 以α-糜蛋白酶为酶催化剂，在含有1．5％0．05mol／L Tris-HCl缓冲液的乙酸乙酯介质中，Phac-Met-OCam和H-Asp(OMe)2缩合可得到收率大于63％的缩合产物；木瓜蛋白酶催化下可选择性水解Phac-Met-Asp(OMe)2中的α-酯而保留β-酯；嗜热菌蛋白酶能有效地催化Phac-Met-Asp(OMe)-OH与H-Phe-NH2生成肽键。     

COMPARISON OF FOUR METHODS TO GENERATE IMMUNOREACTIVE FRAGMENTS OF A MURINE MONOCLONAL ANTIBODY OC859 AGAINST HUMAN OVARIAN EPITHELIAL CANCER ANTIGEN

In the present study,four different proteases (pepsin,papain,bromelain and ficin) were screened with a murine monoclonal antibody OC859,in order to verify whether different digestion procedures could improve yield and stability of the F(ab‘)2 or Fab fragments.The yields of F(ab‘)2 or Fab fragments from digestion with pepsin,papain,bromelain and ficin were respectively 20.3 /-2.0%,50.5% /-5.0%,74.4 /-2.7% and 82.8 /-10.2% of the theoretical maximum.Immunoreactivity in a noncompetitive solid-phase radioimmunoassay (SPRIA) of the fragments generated by the four proteases were respectively 10 /-5%,36 /-5%,60 /-6% and 75 /-6% of the intact OC859 IgG.These results suggested that the fragmentation of OC859 with ficin gave a higher yield of superior immunoreactive fragments.     

Fas-FasL信号通路在木瓜蛋白酶诱导的小鼠哮喘模型中的作用

Fas-Fas配体(Fas-Fas ligand, Fas-FasL)信号通路在免疫反应中发挥着重要作用,但其在变态反应中的作用鲜有报道。为研究Fas-FasL信号通路在哮喘中的作用,研究者用木瓜蛋白酶建立小鼠急性哮喘模型,并通过流式细胞术检测了WT小鼠与Fas敲除(Fas knockout,Fas KO)小鼠在初始状态及木瓜蛋白酶诱导哮喘时髓系细胞及T淋巴细胞在肺组织中的浸润情况;并通过HE染色和PAS染色分别检测了哮喘模型小鼠肺组织炎症细胞浸润和杯状细胞增殖情况。实验结果显示,在初始状态下Fas KO小鼠与WT小鼠肺组织及肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞等髓系细胞的比例没有明显差别;而在哮喘模型中,Fas KO小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞、杯状细胞的数量均明显减少,CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例明显升高。上述研究结果表明,Fas信号通路能够促进木瓜蛋白酶诱导的哮喘模型小鼠肺组织炎症细胞浸润。研究为探索Fas-FasL信号通路在哮喘模型中的作用提供了新依据。