影响PCR-RFLP的相关因素

限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction, PCR-RFLP)是一种模拟体内DNA复制过程的体外酶促合成特异性核苷酸片段技术,又称无细胞分子克隆技术.它以待扩增的两条DNA链为模板,由一对人工合成的寡核苷酸作为介导,通过DNA聚合酶反应,在体外进行特异DNA序列扩增.扩增后,将PCR产物直接酶切、电泳、显色,即可对目的基因进行分类分型.现将我做PCR-RFLP的体会简要陈述如下.     

冰糖草总黄酮含量测定及显色方法优化

目的:建立用紫外-可见分光光度法测定冰糖草总黄酮含量的方法.方法:对显色剂的种类、浓度与用量进行考察,采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色反应体系,测定冰糖草中总黄酮含量.结果:以芦丁为对照品,测定波长为506 nm,在4.8～96.2 mg·L-1线性关系良好(r =0.999 3),平均回收率为103.71％ (RSD 2.68％,n=6).结论:该方法简便、快捷、准确,可作为冰糖草总黄酮含量测定的方法.     

紫外-可见分光光度法测定肾蕨中多糖含量的实验性研究

目的 建立用紫外-可见分光光度法测定紧蕨多糖含量的方法.方法 采用苯酚-硫酸法显色反应体系,对显色剂的浓度与用量进行考察,测定肾蕨中多糖的含量.结果 以D-无水葡萄糖为对照品,测定波长为489 nm,在1.9 ～22.8μg· ml-1范围内线性关系良好(r=0.9990),平均回收率为102.29％ (RSD=1.29％,n=6).结论 该方法简便、快捷、准确,可作为肾蕨多糖含量测定的方法.     

快速老化鼠耳蜗的cDNA微阵列分析

目的通过比较年轻与年老的快速老化鼠（SAM）耳蜗中基因表达水平，筛选并分析可能的与老年性耳聋相关的基因。方法将分别从年轻和年老的SAM耳蜗中提取的总RNA合成cDNA，并与载有1101个鼠基因的基因芯片进行杂交，杂交信号通过cyanine-3荧光显色，并使用微机对其图像进行分析。结果虽然多数的基因在老年耳蜗中的表达并没有明显的变化，但是我们发现有3个基因的表达较年轻耳蜗中有明显的增加，他们分别是Brainfactor-1，Single—minded-2和胸腺素beta-4。结论通过生物芯片技术，我们展示了老年鼠耳蜗中基因表达的情况，并发现三种mRNA的过表达有可能与老年性耳聋相关。这一研究为探讨老年性耳聋的分子生物学机制提供了基础。     

口腔真菌感染的临床调查及干预体会

<正>随着免疫抑制剂、广谱抗生素、激素的使用,真菌感染在临床感染中占了很大的比例,近几年对临床真菌感染的报道很多,同时对抗菌药物的敏感实验结果也进行了调查,但对口腔真菌感染的详细调查报道较少,本文对我院口腔真菌感染的患者进行了调查,结果报告如下。1材料和方法1.1材料患者口腔真菌感染患者全部来自我院2012-2013年口腔科收治的患者,真菌培养全部阳性。菌株患者临床分离菌株,白色假丝酵母菌标准菌株     

泌尿生殖道支原体液体显色培养法与固体培养法的比较

目的以固体培养法为标准，探讨液体显色培养法培养支原体的敏感性、特异性和一致性。方法采用培养鉴定药敏一体化液体显色培养基和固体A7琼脂培养基平行检测155例泌尿生殖道标本的支原体。结果液体显色培养法培养的敏感性为96．5％，特异性为79．7％，一致性Kappa=0．7737，U=11．4767，P〈0．001，两种方法具有好的一致性。男性标本与女性标本比较，敏感性差异无统计学意义（Х^2=0．1298，P〉0．05），特异性差异有统计学意义（Х^2=5．4197，P〈0．025）。结论液体显色培养法可用于支原体培养初筛，结合固体培养法可以提高支原体培养的准确性。     

B族链球菌显色培养法评估及药物敏感性分析

目的 评估B族链球菌(group B streptococcus,GBS)显色培养法的诊断价值,为临床诊断提供依据.方法 收集380例孕34?37周孕妇阴道分泌物样本进行GBS培养,以传统培养24 h为比对法,记录显色培养法(6h、12h、24h)生长情况,评价其不同生长时间的灵敏度和特异性,并与比对法进行Kappa一...     

手术/创伤后外周静脉血内毒素的研究

目的探讨健康成人和创伤病人外周静脉血内毒素水平及其与创伤的关系。方法采用偶氮显色鲎试验检测５０例健康成人及５１例不同手术／创伤病人外周静脉血的内毒素。结果（１）此法检测内毒素可达微量（１０－２Ｅｕ／ｍｌ,ｎ＝５）,重复性较好（ＣＶ＝２．２９％,ｎ＝５）。（２）本法测得健康成人外周静脉血内毒素＜０．０３３Ｅｕ／ｍｌ,与国际水准一致。（３）病人术后３天内毒素升高（Ｐ＜０．０１）。（４）病人外周静脉血内毒素与创伤程度呈正相关,Ｒ２＝０．６６７。结论本法测定血微量内毒素是可行的。外周静脉内毒素水平随创伤程度增加而增加。     

糖尿病患者龟头念珠菌定植及菌种分析

目的 探讨糖尿病患者龟头念珠菌定植及其菌种构成,为预防和治疗念珠菌性包皮龟头炎提供诊治依据.方法 对162例糖尿病患者及160例健康体检者行龟头皮屑念珠菌培养,并用科玛嘉显色培养基进行菌种分型.结果 糖尿病患者组龟头念珠菌检出率(41.4%)明显高于对照组(15.6%)(P＜0.01),且白念珠菌构成比(77.6%)显著高于对照组(56.0%)(P＜0.01);糖尿病患者中有症状组念珠菌检出率(67.2%)明显高于无症状组(23.2%)(P＜0.01),其白念珠菌构成比(86.7%)也显著高于无症状组(59.1%)(P＜0.01).结论 糖尿病可显著增加念珠菌在龟头定植和致病的风险,其主要致病菌种仍为白念珠菌,其次为光滑念珠菌,后者在无症状感染者中占有较高比例.     

重度慢性乙型病毒性肝炎患者血中内毒素水平的变化及其临床意义

目的研究重度慢性乙型病毒性肝炎患者血中内毒素水平的变化及其临床意义。方法采用显色基质鲎实验法测定30例正常人和30例重度慢性乙型肝炎患者中血清内毒素水平,并进行比较。结果重度慢性乙型肝炎患者的血清内毒素水平正常人组为（0．071±0．022）EU／ml,肝炎组为（0．186±0．051）EU／ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。结论重度慢性乙型肝炎患者血清内毒水平明显升高,内毒素在重度慢性乙型肝炎的发生、发展过程中发挥重要的病理生理作用。