来曲唑中残留溶剂四氯化碳顶空μ-ECD检测方法的建立和验证

目的建立用气相色谱外标法分析来曲唑中残留溶剂四氯化碳的方法。方法采用SE-30色谱柱,50℃～150℃程序升温,微电子捕获检测器检测。结果四氯化碳能与其他组分很好的分离,分离度(α)>2.0,且峰型对称。四氯化碳浓度在0.000 516～0.020 64μg.mL 1内,r=0.999 9,呈现良好的线性关系,检测限为0.01μg.g 1。采用的顶空进样的样品处理方法回收率高且对色谱柱及检测器的污染小。结论测定方法操作简便、快速、准确性高、重复性好,可作为本品的质量控制方法。     

高危型人类乳头瘤病毒的检测在宫颈癌筛查中的应用

目的探讨高危型人类乳头瘤病毒（HPV）检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法收集328例门诊就诊患者的资料,同时做宫颈组织活检及杂交捕获二代实验检测高危型HPV,以宫颈组织活检结果为标准,分析高危型HPV的检测结果。结果宫颈组织活检结果分别为宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及浸润癌的高危型HPV感染率分别为20．9％、57．6％、90．6％、96．5％和100％;CINⅡ级以上病变患者高危型HPV平均感染率为94．3％,与宫颈炎感染率20．9％相比,差异有统计学意义。结论CIN病变程度越严重,高危型HPV感染率越高;高危型HPV感染在宫颈癌早期病变的筛查中具有风险提示作用。     

基因芯片联合激光捕获显微切割技术在脊髓背根神经节基因表达研究中的应用

目的探索联合激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)与基因芯片技术在大鼠脊髓背根神经节的感觉神经元基因表达研究中的可行性。方法取大鼠L4、L5、L6节段脊髓背根神经节,用LCM技术获取神经细胞,提取总RNA,甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA质量,检测纯度和产量,并以实时RT-PCR方法进行验证。结果总RNA的完整性较好,经单轮T7线性扩增后得到足量的aRNA,可用于实时RT-PCR研究和进一步基因芯片杂交实验。结论结合有效的RNA保护方法和线性扩增,LCM可以分离出纯净的背根神经节的感觉神经元,满足下游基因芯片研究的要求。     

嘌呤霉素抗性基因捕获载体的构建及在细胞中的功能验证

目的 构建具有嘌呤霉素抗性基因捕获载体,扩大基因捕获载体的应用范围.方法 用经改造的捕获载体(gene trapping vector)稳定转染HepG2.2.15肝癌细胞系,经嘌呤霉素筛选,制作单克隆细胞株.用PCR方法验证该载体的在细胞染色体中的整合,ELISA方法证明捕获载体捕获基因后的细胞的功能改变.结果 嘌呤霉素抗性基因捕获载体整合在HepG2.2.15肝癌细胞的染色体上,并能影响细胞HBsAg和HBeAg的分泌.结论 新构建的嘌呤霉素抗性基因捕获载体能在具有G418抗性的细胞中捕获有意义的目的 基因.     

结石捕获取出器在输尿管镜钬激光治疗上段输尿管结石中的应用

目的:探讨NTrap结石捕获取出器在输尿管镜钬激光治疗输尿管上段结石的临床应用价值.方法:24例输尿管上段结石采用NTrap结石捕获取出器配合输尿管镜钬激光碎石治疗.结果:单次成功率87.5%(21/24).结石退回肾盂3例,2例术后经ESWL治疗,1例改行PCNL治疗.术中无输尿管穿孔等并发症,结石排除率100%.无输尿管狭窄发生.结论:NTrap结石捕获取出器配合输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石,可降低结石回落肾盂的几率,提高了输尿管上段结石的碎石成功率,是一种安全、有效的方法值得推广.     

HPV检测与细胞学检测在宫颈病变诊断中的应用

目的：评价高危型人乳头状瘤病毒（HPV）DNA检测联合宫颈液基细胞学检查在宫颈病变筛查中的价值。方法：采用宫颈超薄液基细胞学（TCT）检测及第二代杂交捕获试验（HC－2）对1036例患者进行宫颈机会筛查,以宫颈组织病理学检查结果作为确诊的标准。结果：细胞学检查发现正常575例;良性反应性改变281例;不典型鳞状细胞72侧;低度鳞状上皮内病变55例;高度鳞状上皮内病变53例。HR—HPV感染376例,阳性率36．29％;经组织病理检查确诊宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ72例,CINⅡ61例,CINⅢ65例。宫颈癌11例。高危型HPV—DNA在宫颈病变组与正常组比较有显著性差异。液基细胞学检测CIN的灵敏度63．16％,特异度94．19％,阳性预测值73．3％,阴性预测值91．0％;高危型HPV—DNA检测CIN的灵敏度85．17％,特异度75．69％,阳性预测值47．0％,阴性预测值95．28％。高危型HPV—DNA检测联合细胞学检测筛查CIN的灵敏度94．73％,特异度97．21％,阳性预测值89．59％,阴性预测值98．65％。结论：高危型HPV—DNA检测在宫颈癌的筛查中有很高的敏感度和阴性预测值,高危型HPV—DNA检测联合液基细胞学检查提高了筛查CIN的敏感性及特异性。     

宫颈高度上皮内瘤变术后HPV清除相关因素

目的 了解高度宫颈上皮内瘤样病变高频电刀环切术后高危型人乳头瘤病毒清除的近期效果及其相关因素,以期指导高频电刀环切术切除的范围.方法 139例高度宫颈上皮内瘤样病变妇女通过高频电刀环切术锥切治疗后,采用第2代杂交捕获人乳头瘤病毒DNA测试和薄层液基细胞学随访,随访期限为18个月,随访期间预测人乳头瘤病毒清除的因素,依临床病理和生物学数据进行单变量和多变量统计分析.结果 术后人乳头瘤病毒持续阳性病例和阴转病例中切缘宫颈上皮内瘤样病变残留病变分别为57.9%(11/19)和17.5%(21/120)(χ2=12.833,P=0.000),切缘宫颈上皮内瘤样病变残留对人乳头瘤病毒持续阳性的危险度为3.308.随访结束时人乳头瘤病毒持续阳性19例,其中切缘存在人乳头瘤病毒感染改变19例,占100.0%;人乳头瘤病毒转阴120例,其中切缘存在人乳头瘤病毒感染改变75例,占62.5%(χ2=10.536,P=0.001),相对危险度为1.6.Kaplan-Meier分析中最终病理诊断的级别、切缘宫颈上皮内瘤样病变残留和切缘人乳头瘤病毒感染改变、病变是否向宫颈管内延伸及高频电刀环切术刀的半径均为人乳头瘤病毒清除有意义的预测因素.在χ2检验中除以上因素外,年龄也是有意义的预测因素.多参数比例风险模型分析中人乳头瘤病毒清除的独立预后因素有最终病理诊断级别和切缘人乳头瘤病毒感染改变.结论 高频电刀环切术是女性生殖道高危人乳头瘤病毒清除的有效治疗方法 ;病变的级别、切缘人乳头瘤病毒感染改变是高危人乳头瘤病毒清除的独立预后因素.这些因素对指导高频电刀环切术的范围具有一定意义.     

液基薄层宫颈刷片细胞学检查结合二代杂交捕获法人乳头瘤病毒筛查宫颈癌的前瞻性队列研究

目的探讨液基薄层宫颈刷片细胞学检查（thinprep cytological test,TCT）结合二代杂交捕获法（hybrid capture Ⅱ,HC-Ⅱ）人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）检测,对宫颈癌筛查的价值。方法2003年1月至2005年1月,本院妇科对435例志愿者病例行前瞻性队列研究（本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,取得受试对象的知情同意,并与受试患者签署临床研究知情同意书）,采用液基薄层宫颈刷片细胞学检查方法结合二代杂交捕获法检测人乳头瘤病毒。根据检测结果,将纳入病例分为4组,①HPV呈阴性、TCT呈阴性组[HPV（-）,TCT（-）组];②HPV呈阳性、TCT呈阴性组[HPV（＋）,TCT（-）组];③HPV呈阴性、TCT呈阳性组[HPV（-）,TCT（＋）组];④HPV呈阳性、TCT呈阳性组[HPV（＋）,TCT（＋）组]。不同组别病例按不同间隔时间进行液基薄层宫颈刷片细胞学检查和人乳头瘤病毒二代杂交捕获法复查,必要时行阴道镜、活体病理学检查及宫颈管诊断性刮宫（endocervical curettage,ECC）,随访3年,直到观察病例出现宫颈病变或研究终止。本研究数据采用Logistic回归分析评估、复查宫颈癌细胞学发生的决定因素。结果液基薄层宫颈刷片细胞学检查和二代杂交捕获法检测人乳头瘤病毒的灵敏度、特异度、一致率、阳性预测值、阴性预测值、Knppa值分别为85．9％,96．2％,94．7％,79．7％,97．5％,0．7959和92．2％,80．1％,81．8％,44．4％,98．3％,0．4996。与HPV（-）、TCT（-）组相比,HPV（＋）、TCT（-）组及HPV（-）、TCT（＋）组患宫颈癌癌前病变的风险度增高（RR=45．033,95％CI 17．140～118．313;RR=235．886,95％CI 70．694～487．088）;HPV（＋）、TCT（＋）组患宫颈癌癌前病变的风险度明显增高（RR=464．400,95％CI 105．162～950．806）。结论液基薄层宫颈刷片细胞学检查结合二代杂交捕获法检测人乳头瘤病毒检测的敏感度和特异度比较理想,二者结合能满足筛查早期宫颈癌及癌前病变筛查的需要,是比较适合本地区经济状况的筛查方案。     

糖尿病患者活动性人巨细胞病毒感染监测及临床意义

目的 临测糖尿病患者活动性人巨细胞病毒(HCMV)感染,并探讨其临床意义.方法 在HCMV pp65基因内自行设计一对引物,建立RT-PCR检测727例糖尿病患者及230名健康献血者外周血白细胞HCMVpp65 mRNA转录水平,同时应用抗体捕获酶联免疫法检测HCMV pp65-IgM.结果 糖尿病患者HCMV-IgM及mRNA阳性率分别为11.14%和16.64%,与对照组(0.87%、2.17%)相比均差异有统计学意义(P<0.01);比较不同年龄段HCMV感染率,结果发现发病年龄<30岁的患者中HCMV-mRNA阳性率明显高于其他年龄组,从病程来看,病程<1年的糖尿病患者HCMV-mRNA阳性检出率最高.结论 糖尿病患者易发生活动性的HCMV感染,RT-PCR检测HCMV pp65和抗体捕获HCMV pp65特异性IgM可快速有效地确诊HCMV活动性感染的发生.     

激光捕获显微切割联合SELDI蛋白质芯片筛选肺腺癌早期诊断标志蛋白

目的 探讨应用激光显微切割(LCM)联合表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片(SEL,DI-TOF-MS)及模式识别分类技术-支持向量机(SVM)筛选肺腺癌标志蛋白的可行性.方法 将6例新鲜肺腺癌组织标本及其配对的4例正常肺组织制备8μm厚度冰冻切片,改良HE染色;用LCM技术选择性获取同质腺癌细胞和配对正常肺组织细胞.应用PBSⅡ+型SELDI-TOF-MS分析仪(IMAC芯片)分析腺癌及其配对正常细胞的蛋白质表达谱,比对差异点;应用SVM筛选并验证候选标志蛋白的判别效能.结果 平均每个LCM帽子的激光点数约4000 shots,获得了同质性>95%的肿瘤细胞和正常细胞.比较腺癌和配对正常细胞之间的SELDI谱图,共筛选出84个蛋白峰.将差异最明显的10个蛋白峰作为候选标志蛋白.和正常组织相比,6种蛋白在腺癌中呈低表达,4种蛋白在腺癌中呈高表达.差异有统计学意义(P<0.05).初步筛选出3191 m/z蛋白峰作为腺癌诊断标志蛋白.结论 LCM联合SEIDI蛋白质芯片技术有可能筛选出敏感性高、特异性强的肺腺癌标志蛋白;该技术将为肺腺癌早期诊断研究提供新的强有力的工具.