中性粒细胞凋亡在系统性红斑狼疮发病机制的研究进展

【摘要】 系统性红斑狼疮是临床表现复杂、发病率较高的自身免疫性疾病。本病基本特征是自身抗原耐受性降低及自身抗体的产生。由于中性粒细胞死亡途径的改变,包括凋亡、继发坏死(SNECs)、中性粒细胞胞外捕获网（NETs）形成,凋亡细胞清除受损、含核DNA的NETs降解不全,继发坏死细胞（SNECs）释放出自身抗原。而修饰后的自身抗原经由滤泡树突状细胞（FDC）提呈给自身反应性B细胞,导致自身免疫耐受突破和自身抗体产生。自身抗体和未被清除的细胞碎片形成的免疫复合物（IC）沉积在循环组织,合并机体清除IC过程中产生的大量促炎因子导致系统性红斑狼疮（SLE）持续不断的炎症反应和组织损伤。本文就中性粒细胞凋亡形成、凋亡清除及清除受损在SLE发病机制中的研究进展做一综述。     

全外显子及靶向文库捕获测序在多囊肾病基因诊断中的应用比较

目的比较全外显子和靶向文库捕获高通量测序对多囊肾病相关基因的检测效率。方法对6份多囊肾病标本(包括一份低比例嵌合变异标本)分别进行全外显子捕获或靶目标捕获2种方法建立文库,Illumina Hi Seq 2000仪器连续双向测序。结果以PKD1、PKD2和PKHD1 3个基因作为目标序列,靶向捕获法平均测序深度为190倍,5倍以上测序深度占全部有效序列的85.59%,靶区域覆盖度95%以上,但PKD1第一外显子仍有200~300 bp区域不能覆盖;全外显子捕获法平均测序深度为28.34倍,5倍以上测序深度占全部有效序列的55.35%,目标区域覆盖度较低,PKD1外显子覆盖度小于40%。结论靶向文库捕获测序法具有较髙的敏感性、准确性,更适合PKD基因变异的检测,但高通量测序技术对PKD1基因检测仍有不足之处。     

气相色谱法测定茉莉花中9种有机氯农药的残留量

目的建立了茉莉花中9种有机氯农药残留量的气相色谱分析方法。方法样品经过超声提取及磺化处理,采用HP-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm)分离样品,GC-ECD测定有机氯农药的残留量。结果 9种有机氯农药在1~100μg·L~(-1)内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数大于0.9995;平均回收率为87.50%~107.2%;最低检出限在2.9~9.2 ng·g~(-1)。结论该方法适用于茉莉花中有机氯农药残留的测定。     

一例巨轴索神经病患者中发现GAN基因两种新型致病突变北大核心CSCD

目的寻找1例疑似巨轴索神经病患者的致病突变位点,为疾病诊断提供科学资料。方法应用目标序列捕获测序技术对患者进行遗传筛查,找到巨轴突蛋白基因（Gigaxonin,GAIN）的可疑致病突变位点,并提取患者父母的外周血DNA,进行Sanger测序验证。同时对200名正常人的400个GAN基因进行Sanger测序。此外,应用生物信息学软件Polyphen对突变巨轴突蛋白进行了功能预测。结果在患者GAN基因中鉴定出2种新型突变：c．778G〉T（p．Glu260Ter）和c．277G〉A（p．Gly93Arg）,为复合杂合突变;Sanger测序证实c．778G〉T（p．Glu260Ter）突变源于父方,c．277G〉A（P．Gly93Arg）突变则与母亲相同。在200名正常人GAN基因中未检测到同样的突变,排除其为多态性。生物信息学分析预测这两种新型GAN突变均可引发巨轴突蛋白功能异常。结论研究鉴定出了患者GAN的两种新型突变,它们均可能引起巨轴突蛋白结构和功能的异常,从而导致疾病的发生,为日后类似疾病的诊断提供了依据。     

宫颈鳞癌组织中EphA2基因的表达

目的探讨宫颈鳞癌组织中EphA2的表达.方法应用免疫组化法观察EphA2在206例FIGO Ⅰ a-Ⅳb期的宫颈鳞癌组织中的表达,从中选择20例不同EphA2蛋白表达的病例,应用激光捕获显微切割技术(Laser cap-ture microdissection,LCM)从冰冻组织切片中选切大约50个宫颈鳞癌细胞,应用RT-PCR方法检测EphA2mRNA的表达.结果206例宫颈鳞癌组织中,EphA2蛋白阴性表达23例(11.2%),弱阳性表达94例(45.6%),阳性表达72例(35.0%),强阳性表达17例(8.3%);EphA2蛋白与其mRNA表达水平不完全一致;EphA2蛋白表达与宫颈鳞癌患者的年龄、FIGO分期及淋巴结转移无关,总生存期在EphA2染色强度0～3级之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论EphA2在宫颈鳞癌中的高表达预示患者的生存差.EphA2有望成为抗宫颈癌治疗的新靶点.     

捕获ELISA法用于肾综合征出血热早期诊断的研究

目的 探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）早期诊断方法。方法 用ＭａｃＥＬＩＳＡ、ＩＦＡＴ二种方法同时检测ＨＦＲＳ病人血清４０份;非出血热血清２０份;正常人血清２０份进行对比研究。而且,阳性血清用２－巯基乙醇破坏特异性ＩｇＭ试验,阴性血清加类风湿因子阳性血清干扰试验。结果 用ＭａｃＥＬＩＳＡ法检测ＨＦＲＳ于病程第２日即可出现特异性ＩｇＭ阳性,３～４病日阳性率达８９％;５～７病日阳性率达１００％,而ＩＦＡ     

激光捕获显微切割技术在肿瘤分子病理学中的应用原理及研究进展

组织发生、分化以及病理改变是多基因调控的复杂过程。要在基因水平了解其机制,就必须准确深入地分析特定细胞基因结构和表达的动态变化。为了阐明在肿瘤发生和发展不同阶段如不典型增生、原位癌、浸润癌及转移癌发生时特定细胞内的分子生物学改变,以及前一阶段向后一阶段进展时,其关键的分子生物学改变是什么等重要信息,需要获得单一的同类细胞群。组织是多种细胞群体相互作用的三维空间结构,但以往的各种技术所获得的细胞,其内既有肿瘤细胞,又多少不等地含有一些其他细胞。同时,体外培养的细胞系虽能解决组织异质性问题,但其培养环境与组织内环境有一定差距,因此,无法真实反映在体内复杂环境下生长的肿瘤细胞具有的各种特性。组织细胞异质性已成为肿瘤基因组学研究的一大障碍。而激光捕获显微切割技术（Laser capture microdissection,LCM）是一项在显微镜直视下从组织切片中确定、分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术,它成功解决了细胞异质性问题,是肿瘤基因组学研究的一项革命性技术。     

目标序列捕获测序技术及其在疾病相关基因研究中的作用

目标序列捕获测序是指将感兴趣的基因组区域定制成特异性探针与目标基因组DNA在序列捕获芯片(或溶液)进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后再利用新一代测序技术进行测序,以获得目标基因组序列的研究策略.该项技术具有高度灵活性、特异性及覆盖率,操作便捷等特点,该文就目标序列捕获测序技术的原理及其在疾病相关基因研究中的应用作一简要综述.

Abstract：

Target sequence capture sequencing refers to a sequencing technology that uses the interested genomic region as specific probes, which are attached to chips or beads. The probes then hybridize with free target genomic DNA on sequence capture chip ( or in solution ) to enrich target genomic DNA. The enriched target genomic DNA fragments can then be amplified and studied using the next-generation sequencing technologies. The technology has a high degree of flexibility, specificity and coverage,and easy operation characteristics. The goal of this review is to outline the principle of target sequencing technology and its implication in disease-related gene research.