免提核酸的高通量DNA检测技术

目的介绍一种基于捕获的高通量DNA检测技术,无需核酸提取,适用于不同样品的各种应用,以提供遗传分析有力的技术手段。方法全血、唾液、干血斑和口腔拭子等样品裂解后释放DNA,经热变性后,通过与一系列特异探针杂交使靶DNA被捕获至96孔板;洗去未结合探针后,直接利用特异性引物进行荧光定量扩增(qPCR),或用酶连接连续排列的杂交探针,形成两端为特定序列的单链DNA模板,最后用通用引物进行qPCR分析;以全血中P16基因为靶标评估免提核酸技术的DNA检测效果,并将其应用于全血、血清及干血片样品中寄生虫DNA的检测,评估其灵敏度和特异性,同时评估了不同储藏方法下唾液及口腔拭子DNA检测的稳定性。结果成功应用于全血、干血斑、唾液、口腔拭子等多种样品的DNA检测;无需核酸提取,唾液及拭子样品在室温及4℃下保存15 d后检测仍具有较高的稳定性;该方法对疟原虫的检测下限低至0.06个疟原虫/μL,较传统镜检具有更高的灵敏度,可准确检测到被感染样品中的寄生虫DNA。结论建立了无需核酸提取的高通量DNA检测技术,适用于不同样本类型及靶标检测,为大规模基因筛查分析提供一个灵敏、高效的工具。     

乌鲁木齐地区2560例孕妇TORCH检测分析及临床意义

本文采用抗体捕获ELISA（capture ELISA）法对乌鲁木齐地区2560例孕妇外周血进行抗TORCH-IgM抗体检测。结果检出弓形体病毒阳性率1．09％，风疹病毒阳性率为1．17％，巨细胞病毒阳性率1．87％，单纯疱疹-Ⅱ型病毒阳性率为0．62％。本文就TORCH感染与优生优育的关系做了进一步的阐述，由此得出孕期开展TORCH检测，可及早发现和治疗病毒感染，排除胎儿异常发育，以确保胎儿健康和人口质量的提高。     

氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.     

应用新媒体技术估计上海浦东新区男男性行为者规模的初步研究

目的探讨运用新媒体技术,对浦东新区男男性行为者(MSM)网络人群规模进行估计,了解新媒体软件使用频率、HIV检测及高危行为调查,为艾滋病防制工作提供依据。方法利用同志交友软件获取在浦东新区内的网络MSM人群注册信息,于2019年3月28日和4月11日这两天五个时间点,分别对登陆同志交友软件的MSM展开计数,通过比对登录名和注册信息,确定被计入的MSM,采用捕获-再捕获法计算网络MSM人群规模。同时对在线MSM进行问卷调查。结果浦东新区当地MSM网络人群规模约为13 174(95%CI:9 672～16 676)。多性伴比例占72.5%。经有序多分类logistics分析,年龄、文化程度、是否听过艾滋病的讲座、是否在VCT门诊接受过艾滋病的宣传教育是艾滋病了解程度的影响因素。结论新媒体技术为估计MSM人群规模提供了新的技术手段,MSM人群防范艾滋病风险意识仍需加强,在网络信息化时代,新媒体技术在艾滋病健康宣传教育工作中的作用值得进一步研究。     

捕获再捕获法估计吸毒人群基数的数据模型研究

目的建立捕获-再捕获法估计吸毒人群基数的分析数据模型.方法收集和分析戒毒所登记资料,确定捕获期和捕获间隔期,建立捕获-再捕获法使用的分析数据模型,以估计当地吸毒人群基数.结果获得建立捕获-再捕获法使用的分析数据模型的方法.结论按照统一的方法建立数据分析模型是运用捕获-再捕获法对吸毒人群基数进行估计的关键.     

应用捕获-再捕获法估计5岁以下儿童死亡漏报率及死亡率

目的探索用捕获-再捕获方法(CRM)估计5岁以下儿童死亡漏报率和死亡率,评价卫生部门收集5岁以下儿童死亡资料的准确程度.方法利用内蒙古喀喇沁旗卫生和计生两部门1997～2000年的5岁以下儿童死亡登记资料通过核对、入户核查,用CRM估计儿童死亡率.结果用CRM估计研究地区1997～2000年5岁以下儿童死亡数为399人,卫生部门的漏报率为24.8%,并且存在死亡儿童年龄越低死亡漏报率越高的现象;卫生部门1997～2000年报表登记的5岁以下儿童平均死亡率为22.97‰,估计5岁以下儿童死亡率为30.55‰,高于将两部门资料合并得到的儿童死亡率28.56‰.结论可以利用卫生和计生部门现有的信息依靠CRM校正因漏报而造成的数值误差,获得较准确的儿童死亡率.但在使用时必须注意其使用的前提条件,不能盲目地套用公式.     

捕获空调通风系统送风中嗜肺军团菌的方法

自上个世纪70年代末在美国费城爆发军团病以来，军团菌的研究发展很快。早期的流行病学调查揭示多数军团菌病均与宾馆、工厂、医院配备空调通风系统或加湿器有关，空调通风系统的军团菌检出率，据报道达80％～90％。军团菌在空调通风系统中的灰尘和冷却塔或加湿器产生的水雾中栖息、生长繁殖，直至达到一定数量通过产生含菌气溶胶在空调通风系统中传播，导致军团病的爆发。     

信号肽捕获系统及其在寄生虫学领域的应用

分泌性蛋白是生物体各组织细胞间传递信息的主要途径。因此,分离和鉴定编码分泌性蛋白的基因将会对整个生命科学的发展起到促进作用。信号肽捕获系统是一种近年发展起来的分离和鉴定编码分泌性蛋白基因的新方法,利用分泌性蛋白在N末端都含有信号肽这一特性,来特异性克隆编码这些蛋白的基因。本文主要对信号肽捕获系统的发展及其在寄生虫学领域的应用作一概述。     

调味品中氯丙醇气相色谱法测定

毒理学研究表明，氯丙醇对人体的肝、肾、生殖系统、神经系统有一定损害，且有潜在的致癌性。目前调味品中氯丙醇（3-MCPD、1，3-DCP）严格控制限量，规定3-MCPD〈1mg／L、1，3-DCP〈50μg／L。本采用电子捕获检测器（GCECD），同时快速测定1，3-DCP和2，3-DCP。该方法前处理通过蒸馏、萃取、氮气吹扫，有效对样品提取和净化，方法干扰少，线性范围1，3-DCP和2，3-DCP均为0．05～25．0μg／ml；最低检出限为0．025μg／ml；回收率为93．1％～111％；重复性RSD〈10％；显示出良好的准确度和精密度，有较强的适用性。     

激光捕获显微切割结合RNA线性扩增技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

目的当对有间质细胞混杂的膀胱移行上皮细胞与膀胱移行细胞癌进行基因差异表达分析时,激光捕获显微切割技术(lasercap-turemicrodissection,LCM)是不可缺少的,然而从LCM所得的细胞中获取足够RNA量相当困难。本文首次将LCM与RNA线性扩增结合用于膀胱癌相关基因研究,目的是确定一条切实可行的技术路线,将膀胱移行上皮细胞从膀胱粘膜中分离出来,将膀胱癌细胞从肿瘤间质细胞中分离出来,并对其进行RNA体外线性扩增,以备进一步研究。方法采用LCM技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取RNA,并对微量RNA进行体外线性扩增。然后用RT-PCR验证扩增前、后RNA中β-actin基因表达水平。结果对照实验I证实经LCM后RNA完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下LCMshooting次数与可获得RNA量间对应关系。从膀胱粘膜种捕获膀胱移行上皮细胞25万shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞20万shootings。产物RNA扩增后获得片段大小为0.5-2.5kh的aRNA,且β-actin基因表达表达完整。结论LCM结合RNA体外线性扩增技术能成功地获取较为单一的研究目的细胞,扩增后RNA完整性较好,能用于进一步研究中。