二代测序技术在脓毒症病原学诊断中的应用价值

目的 探讨二代测序技术(NGS)在脓毒症病原体检测中的运用价值。方法 采用回顾性分析研究,收集2018年1月至2022年1月某三级甲等教学医院收治的82例疑似脓毒症患者的临床资料,采集血标本进行血培养、NGS和聚合酶链反应(PCR)检测,比较3种方法的临床应用价值。结果 血培养、NGS和PCR所需检测时间分别为(5.61±1.22)、(1.32±0.26)和(1.52±0.31)d。82例患者中,诊断为脓毒症62例,非脓毒症患者20例;脓毒症组中有35例未治愈,明显高于非脓毒症组4例(P<0.05)。61例NGS阳性标本中,检测出病原体主要包括鲍曼不动杆菌10例、肺炎克雷伯杆菌14例、金黄色葡萄球菌4例、巨细胞病毒(CMV)22例、人类疱疹病毒(EBV)13例、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)13例、耶氏肺孢子菌8例和烟曲霉5例。12例患者血培养阳性,共计检出13种病原体,包括肺炎克雷伯杆菌3例、铜绿假单胞菌杆菌2例,大肠杆菌2例、鲍曼不动杆菌、伯克霍尔德菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、溶血葡萄球菌和白色念珠菌各1例。NGS检测阳性率为74.39%,明显高于血培养的14.63%,差异...     

新生儿短串联重复基因座三带型分析

目的 对一例疑似串联重复基因座出现三带型的新生儿进行分析,明确其准确的基因分型并对其特点进行分析.方法 采集新生儿足底血,初次检验采用华夏TM白金PCR扩增试剂盒进行STR基因座检测分型,随后采用GoldeneyeTMDNA身份鉴定系统25A试剂盒进行复检.同时采用单基因座PCR扩增结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分型技术分离单...     

磁共振成像多序列扫描鉴别乳腺小肿块性质的价值

目的 探讨磁共振成像（MRI）多序列扫描鉴别乳腺小肿块性质的价值。方法 选取我院收治的经病理检查确诊的85例乳腺小肿块患者为对象,均进行乳腺MRI检查,分析MRI平扫序列以及动态增强扫描（DCE-MRI）序列在乳腺小肿块病变良恶性鉴别中的价值。结果 85例患者共90个乳腺小肿块病灶,病理检查显示恶性病灶56个,良性病灶34例。乳腺小肿块良恶性病变的MRI平扫序列信号特点无显著差异（P>0.05）。DCE-MRI序列扫描显示,乳腺小肿块恶性病变的边缘、内部强化、TIC类型与良性病变比较,差异显著（P <0.05）。DCE-MRI诊断乳腺小肿块恶性病变的敏感度为91.07%,特异度为88.24%,阳性预测值为92.73%,阴性预测值为79.31%,准确度为92.22%。结论 DCE-MRI序列可提高乳腺小肿块病变的检出率,在鉴别肿块性质方面价值较高。     

利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R在大肠埃希菌中的表达与优化

目的 建立利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R基因工程表达体系,为推进利拉鲁肽生物类似药的产业化开发奠定基础.方法 优化密码子并通过重叠PCR扩增获得GLP-1(7-37)K34R编码基因(glp1a),构建glp1a与GST、Ub、SUMO 3种标签蛋白在大肠埃希菌中融合表达,分别从诱导时机、诱导温度、诱导时...     

反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒

目的构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体。方法在正义和反义引物两端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体。脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响。结果成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右。结论采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法。     

深圳市育龄女性FMR1基因CGG重复序列的多态性分析

目的 通过对深圳市育龄女性进行脆性X智力低下1(FMR1)基因筛查,了解本市育龄女性FMR1基因(CGG)重复序列分布特征。方法 采集100名育龄女性的外周血,提取基因组DNA,应用三引物PCR及毛细管电泳技术检测全血样本中FMR1基因CGG重复序列,并对检测结果进行统计分析。结果 在78名具有自然流产史(15名)、复发性流产史(42名)和其他不良生育史(21名)的育龄女性中,FMR1等位基因1及等位基因2 CGG重复序列分布情况均无差异(P>0.05)。100名育龄女性FMR1基因CGG重复数范围为21～44,最常见CGG重复数为30和29,未检出突变基因携带者。结论 不同地区、种族女性FMR1前突变基因携带率存在一定差异,但同一种族在不同地区携带率无差异。     

云南常见药用红景天的分子鉴定研究

目的:分析大花红景天Rhodiolacrenulata与长鞭红景天R.fastigiata、云南红景天R.yunnanensis等云南常见药用红景天及景天属的长丝景天Sedumbergeri的核糖体内转录间隔区(ITS)基因序列,为药用红景天分子鉴定提供依据。方法:用PCR产物直接测序法测定其核糖体内转录间隔区序列并作同源性分析。结果:构建了大花红景天11个地方居群、长鞭红景天9个地方居群、云南红景天1个地方居群及长丝景天1个地方居群的ITS基因片段序列数据库。序列比较的结果表明红景天属样品的ITS序列与长丝景天有显著差别;红景天属内各种序列差异虽小,却存在显著而稳定的差别,能准确鉴定出各种药用红景天植物。结论:根据rRNAITS区碱基序列差异,能准确鉴别大花红景天及其近源植物及药材。     

多标签决策树分类在数字医学图像分类中的应用

数字医学图像的分类是数字医学图像挖掘的一个重要内容。传统的医学图像分类一般将图片内容明确归入某一类中,而由于医学图像本身的复杂性,这样分类显然不能满足实际需要。多标签数据的普遍存在性和重要性近些年来逐渐得到关注。它承认真实世界对象的多义性,允许样本同时属于多个类别。对多标签决策树分类算法在医学图像分类中的应用进行了设计,并进行了实验验证。     

REP-PCR技术在光滑假丝酵母菌基因分型中的应用价值

目的评估重复序列PCR(REP-PCR)技术在光滑假丝酵母菌基因分型中的作用。方法收集深部真菌感染患者体内分离的光滑假丝酵母菌34株,以API 20C AUX酵母菌鉴定板条鉴定菌种及生化表型。采用REP-PCR对34株光滑假丝酵母菌进行基因分型:提取真菌基因组DNA,以Care-2重复元件设计引物,PCR扩增产物电泳后运用NTSYS软件进行聚类分析,聚类树状图相似系数(SI)≥97%且无明显条带差异定为同一基因型,SI≥97%且仅相差一条条带定为亚型。比较REP-PCR分型与多位点序列分型(MLST)的辨别力指数(DP),分析具有不同生化表型光滑假丝酵母菌的REP-PCR基因分型情况。结果 REP-PCR基因分型结果显示:34株光滑假丝酵母菌分为17个基因型,其中A型8株,B型6株,C、D型各3株,E型2株,F～Q型各1株,未发现亚型。REP-PCR和MLST基因分型的DP(95%CI)分别为0.911(0.770～0.980)和0.369(0.220～0.560),两者比较差异有统计学意义(χ2=21.68,P0.01)。34株光滑假丝酵母菌有两种生化表型,生化表型代码分别为2000040(32株)和6000040(2株),生化表型代码为60000402的2株经REP-PCR分型结果分别为D型和K型(SI=0.43)。结论 REP-PCR对光滑假丝酵母菌基因分型的辨别力较强且操作简便,适用于临床实验室对光滑假丝酵母菌的流行病学研究。