人地中海贫血基因β654的克隆与序列分析

[目的]克隆人地中海贫血基因β654,并进行序列分析,为下游转基因小鼠模型的建立奠定工作基础。[方法]以PCR法扩增获得人β654基因,将其克隆入卸除了人β基因的质粒pBGT51中,酶切、反应点杂交及测 法鉴定重组质粒。[结果]所构建的重组质粒中含人β654基因,其引入方向正确,序列分析结果正确。[结论]构建所得的重组擀粒可用于下游的传基因工作。     

起始密码下游序列与16srRNA3′端序列的匹配性对基因表达效率的影响

目的 :研究起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配关系对基因表达效率的影响。方法 :我们一方面对人IL_2、人IL_8、人IL_6 ,人GM_CSF、人G_CSF、人IL_1ra、人IL_9等全长cDNA序列及 5′末端局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列进行匹配性进行分析 ,寻找序列匹配性与表达效率间的关系 ;另一方面 ,对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′端序列进行沉默突变 ,增强其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列间的匹配性 ,并克隆入pKpL4表达型质粒载体 ,通过大肠杆菌进行表达 ,实验验证序列匹配性与基因表达效率的关系。结果 :分析发现起始密码下游局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482核酸匹配性越好 ,则目的蛋白表达效率越高 ;目的基因编码区内与 16srRNA 3′ +146 9——— +1482间的最大匹配区域越靠近 5′末端 ,目的蛋白表达效率越高。通过对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′末端序列进行沉默突变 ,改善其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列的匹配性后 ,目的蛋白的表达量均呈不同程度地提高。结论 :提高起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配性 ,可增强目的基因的表达效率。     

陕西株庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV )RNA NS3区 cDNA(4248nt～4465nt)的扩增、克隆和序列分析

目的　了解陕西株庚型肝炎病毒 (HGV,RNA/ GBV-C)的核苷酸序列特点 .方法　从陕西省西安市两位非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎患者的血清中 ,应用反转录及套式 PCR技术 ,从血清中提取 RNA,经特异性的反转录引物 P4反转录成c DNA,以此为模板分别用 P3,P4及 P1 ,P2 两对引物进行PCR扩增 ,扩增到 2 18bp的 HGV RNA NS3区部分基因 ,将其克隆入 Pin Point TMXal- T载体 ,挑选阳性克隆并进行了序列分析 .结果　 SG2 与 HGV的核苷酸同源性分别为 85 .6 4%与84.48% ;与 GBV- C的核苷酸同源性为 86 .2 1%与 84.48% ,其二者之间同源性为 97.13% ;二者与 HGV的氨基酸同源性分别为 98.2 8%和 93.10 % ,与 GBV- C的氨基酸同源性也为98.2 8% ,93.10 % ,二者之间的氨基酸同源性达 94.83% .结论　庚型肝炎病毒 NS3区核苷酸同源性较高 ,同义突变率也较高 ,可能是一个对其生存环境较为适应的病毒 .     

人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆

用新鲜的人绒毛膜组织提取总RNA,并通过逆转录反应合成cDNA第一链,利用人工合成的一对寡核苷酸引物,采用PCR技术特异性地扩增人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG—β)cDNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为500bp,与预计的片段长度相符,将此片段刊用T—A载体克隆至PCRⅡ质粒上并进行全序列分析,结果显示克隆片段包含hCG—βcDNA5’端和3’端的非编码区及完整的编码区。     

重组人蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２曾称酪蛋白激酶２（ｃａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅ２）是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的在真核细胞中普遍存在的ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶［１］。在进化过程中ＣＫ２的各亚基均表现出高度保守性,属于一种看家酶。该酶在许多...     

抗辐射菌DNA结合蛋白的氨基酸序列分析

目的　对抗辐射菌Ｄ．ｒａｄｉｏｕｄｕｒａｎｓ 的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ） 进行Ｎ－ 末端氨基酸（ＡＡ） 序列分析,探讨其抗辐射分子学组成的特性。方法　采用地高辛（ＤＩＧ） 标记染色体ＤＮＡ 作为探针,ＳｏｕｔｈＷｅｓｔｅｒｎ 印迹法检测ＤＢＰ,在Ｎ－ 端ＡＡ 自动序列仪上分析ＡＡ序列。结果　野生型抗辐射菌存有８ 种ＤＢＰ的特性蛋白（分子量分别为１２２、９３、３３、２９、１６、１５、１４ 和１２ｋｄ）;ＡＡ 序列分析发现其中９３ｋｄ 和３３ｋｄ 可能为新的蛋白质;两种新ＤＢＰ 的表达水平随不同培养基和培养时间而变化。结论　抗辐射菌的ＤＢＰ,尤其是９３ｋｄ 和３３ｋｄ 的ＤＢＰ与其辐射耐受性可能有密切关系     

吉林双阳梅花鹿核蛋白体蛋白L27 cDNA的克隆

目的 为了开发我国珍稀动物——吉林双阳梅花鹿的基因资源，在分子水平上揭示鹿药材的药理作用。方法 构建了梅花鹿脾脏细胞cDNA质粒文库，克隆了一些看家基因并进行了序列分析。结果 其中的一个序列在核酸及推导的氨基酸序列水平上与编码人、犬、大鼠、小鼠核蛋白体蛋白L27(ribosomal protein L27)cDNA序列和对应的氨基酸序列高度同源，并具有完整的开放阅读框架(ORF)。结论 发现了双阳梅花鹿核蛋白体蛋白L27全长cDNA序列，此序列已经在(Genbank中登录，登录号为：AF373231。     

mRNA差异显示法筛选和克隆胃癌相关基因

目的 :筛选和克隆胃印戒细胞癌与正常胃黏膜细胞差异表达基因片段。方法 :采用mRNA差异显示法 (mRNAdifferentialdisplayPCR ,DD PCR) ,对比胃印戒细胞癌组织与正常胃黏膜组织mRNA的表达差异 ,克隆胃印戒细胞癌差异片段 ,经过RNA的斑点杂交、测序以及序列分析和同源性比较。结果 :胃印戒细胞癌与正常胃黏膜中存在明显的基因表达差异 ,发现与胃癌相关的差异表达条带 16条 ,其中 7条为缺失表达条带 ,9条为过度表达条带。对其中 4条差异表达条带进行克隆、测序 ,经序列分析及同源性比较和RNA的斑点杂交 ,表明确认其中 1条为GenBank/BLAST中尚未收录的片段。结论 :胃印戒细胞癌的mRNA差异显示证明 ,该EST序列可能在胃癌的发生发展中具有一定作用