注射型藻酸钙/BMP复合材料的制备及成骨性能研究

研究藻酸钙（CaAG）／BMP-2复合材料的成骨性能，并观察骨髓基质细胞（BMSC）的加入对成骨性能的影响。采用藻酸钠、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和氯化钙（CaCl2）混合制备藻酸钙／BMP复合材料，以加有骨髓基质细胞的该材料为对照，进行体外观察和肌袋试验，通过用X射线、ALP染色、Von Kossa染色、HE染色、新生骨计量等方法，研究其诱导成骨活性。CaAG-BMP组和CaAG-BMP—BMSC组均在4～6周形成新生骨组织，两组标本均为编织骨形态．X线检查、AKP染色、Von Kossa染色、HE染色提示成骨过程相似。两组在新生骨计量上无显著性差异。藻酸钙／BMP复合材料可在肌肉环境下有效形成一定体积的新生骨组织；应用骨骼肌异位诱导成骨原理，该复合材料在成骨过程中无需加入外源性的种子细胞。     

王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的 克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin).方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因,由675个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸.经分析,这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白,等电点为4.86,相对分子质量(Mr)约为14.2×103.此序列已被GenBank收录,登录号为EF173599.重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功克隆和表达了王棕花粉profilin,为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础.     

RAB5A蛋白的研究进展

RAB5A为RAB家族成员之一，主管囊泡融合和囊泡再循环。自1994年RAB5被发现以来，人们逐渐认识到RAB5在细胞物质运输中起重要作用。而于1999年以后，关于RAB5A的研究有大量报道，不但对其功能有了更深入的了解，而且对它的突变体和异构体均有一定的探讨。本文对RAB5A蛋白的结构、效应因子、功能和突变体等方面作一综述。     

HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH在难治性肺炎支原体肺炎患儿中的表达及相关性研究

目的研究高迁移率族蛋白B1(High mobility group B1,HMGB1)、粒细胞巨噬细胞刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenas,LDH)在难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)患儿中的表达及相关性。方法选择2019年1月—2021年12月杭州市第九人民医院收治的90例RMPP患儿作为RMPP组、120例普通型肺炎支原体肺炎(generalMycoplasma pneumoniae pneumonia,GMPP)患儿作为GMPP组,另取同期体检的100例健康儿童作为对照组,检测血清HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH的水平,分析不同组间血清HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH水平以及HMGB1、GM-CSF、CRP与LDH的相关性,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH指标对RMPP的诊断价值。结果RMPP组、GMPP组、对照组三组血红蛋白、血小板计数、白蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05);RMPP组的血清HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH水平高于GMPP组和对照组(P<0.05);RMPP组的血清HMGB1、GM-CSF、CRP水平与LDH水平呈正相关(相关系数分别为0.461、0.394、0.509,P<0.05);血清HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH对RMPP具有预测价值(P<0.05),其临界值分别为76.74 ng/ml、8.31 ng/ml、24.35mg/ml、247.60 U/L。结论血清HMGB1、GM-CSF、CRP、LDH增多与RMPP的发病密切相关,临床上作为预测RMPP的血清标志物有一定参考价值。     

COPD合并肺结核患者TNF-α和IFN-γ与sIL-2R及CRP的表达

目的 分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺结核(PTB)患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、C-反应蛋白(CRP)的表达。方法 选取2016年3月-2019年3月重庆市梁平区人民医院呼吸与危重症医学科收治的COPD急性期合并PTB活动期(A组)、COPD急性期合并PTB恢复期(B组)、COPD稳定期合并PTB活动期(C组)、COPD稳定期合并PTB恢复期(D组)、单纯COPD稳定期组、单纯PTB恢复期组、单纯COPD急性期组、单纯PTB活动期组患者各25例及同期25名常规体检者作为对照组,比较各组血清TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP水平,并对数据进行统计分析。结果 各病例组TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP均高于对照组(P<0.05);单纯COPD稳定期组、单纯COPD急性期组、单纯PTB恢复期组、单纯PTB活动期组、D组、B组、C组、A组血清TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP依次升高(P<0.05);病情好转者血清TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP均较治疗前降低(P<0.05);TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP预测病情恶化AUC为0.706、0.718、0.768、0.807。结论 PTB合并COPD患者血清TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP明显异常,TNF-α、IFN-γ、sIL-2R、CRP均与疾病严重程度有关,对病情恶化具有较高预测价值。     

健脾补肾中药方对结直肠癌裸鼠移植瘤模型Klotho及铜死亡相关蛋白的研究

目的：探讨健脾补肾法对结直肠癌裸鼠移植瘤模型Klotho及铜死亡相关蛋白FDX1及LIAS的影响。方法：将16只裸鼠皮下移植瘤模型分为对照组和中药组,每组各8只,对照组用0.4 ml0.9%氯化钠注射液灌胃,中药组用0.4 ml健脾补肾类中药颗粒灌胃。2组裸鼠培育14 d后,免疫组化检测肿瘤组织Klotho及铜死亡相关蛋白FDX1、LIAS的表达情况。结果：2组造模后致瘤率均达100%,中药组裸鼠精神及活跃程度较好;2组灌胃14 d后各死亡1只。2组裸鼠肿瘤的质量及体积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中药组裸鼠肿瘤组织中Klotho蛋白、FDX1蛋白阳性表达显著高于对照组(P<0.05);2组裸鼠肿瘤组织中LIAS蛋白表达均呈阴性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：健脾补肾法可上调结直肠癌裸鼠移植瘤模型抑癌基因Klotho蛋白及铜死亡相关蛋白FDX1的表达。     

基于cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抗抑郁的作用机制

目的：该研究基于环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路探究柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性不可预见性温和应激(CUMS)法制备的大鼠抑郁模型的干预作用。方法：随机数字表法将60只SD大鼠分为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组和氟西汀组。除正常组外,其他各组进行49 d的CUMS制备大鼠抑郁模型。第29天开始给药,柴胡加龙骨牡蛎汤组低、中、高剂量组分别给予柴胡龙骨牡蛎汤颗粒剂2.89、5.78、11.56 g·kg^-1,氟西汀组给予盐酸氟西汀胶囊2.06 mg·kg^-1。旷场实验和强迫游泳实验观察大鼠行为学表现,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠海马组织5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、cAMP水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织PKA、CREB、BDNF mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织PKA、BDNF蛋白表达水平;免疫组化法(IHC)检测CREB定位表达;...     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）细胞焦亡通路,探讨益气养阴活血方防治糖尿病肾病（DKD）肾脏损伤的可能作用机制。方法 随机将50只雄性SD大鼠分为正常组8只、造模组42只。造模组高糖高脂饮食6周后予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组（8.33 mg·kg^-1）、益气养阴活血方低、高剂量组（11、22 g·kg^-1）。连续灌胃6周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）,肾组织病变程度严重,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各药物组FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,肾组织病变程度得到改善,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,以益气养阴活血方高剂量组效果最佳。结论 益气养阴活血方可通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD大鼠炎症反应,减轻肾脏病理损伤。     

自噬在阿尔茨海默病中的作用及中医药研究进展

近年来伴随社会老龄化程度不断增加,阿尔兹海默病（AD）作为一种神经退行性疾病的发病率不断升高,因为其发病机制十分复杂,目前没有有效的防治方法。细胞中的过度磷酸化的抑制微管相关蛋白（Tau）和β-淀粉样蛋白（Aβ）的堆积形成大量老年斑是AD的主要病理特征。自噬是一种机体内通过清除异常蛋白质来维持机体稳态的的保护机制。研究表明通过调控自噬通路可以影响细胞中的Tau蛋白和Aβ,以达到治疗AD的目的。中医药的作用特点是多途径、多成分、多靶点,对发病机制不明的AD治疗有独特优势。目前中药对AD的防治已初见成效,研究者发现许多单味中药及中药复方可以影响自噬的相关通路来调控自噬活性,从而进一步治疗AD。因此,该文总结了近年来的相关研究,对单味中药的有效成分和中药复方进行分类叙述,讨论不同类别有效成分和复方通过影响自噬相关通路,调控细胞中磷酸化Tau蛋白以及Aβ的生成和清除等并延缓AD进程,为之后中药以影响自噬为切入点来防治AD奠定基础。     

肉桂醛通过PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬促进糖尿病大鼠创面愈合机制

目的 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链尿佐菌素（STZ）及手术制备全层皮肤缺损的方法制备糖尿病大鼠创面模型,观察肉桂醛对糖尿病大鼠创面愈合情况的影响,并基于PTEN诱导假定激酶（PINK）1/帕金森病蛋白（Parkin）信号通路介导的线粒体自噬探讨肉桂醛对糖尿病大鼠创面的治疗机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白组12只,糖尿病组36只,糖尿病组随机分为模型组、肉桂醛组和贝复新组,每组12只,空白组与模型组创面常规消毒后予生理盐水,肉桂醛组创面局部外敷含4 μmol·L^-1肉桂醛的聚乙二醇400（PEG 400）凝胶,贝复新组创面外敷贝复新凝胶,每日换药1次。观察各组创面愈合率,取干预后7、14 d大鼠创面组织,苏木素-伊红（HE）染色观察局部组织病理变化,免疫组化（IHC）检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、胶原纤维的表达情况,免疫荧光（IF）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白和mRNA的表达情况。结果 腹腔注射STZ后,与空白组比较,糖尿病组大鼠随机血糖值显著升高（P<0.01）,均高于16.7 mmol·L^-1,且在造模后一段时间持续保持高血糖状态。与空白组比较,模型组大鼠创面肉芽组织生长、愈合情况较差,创面愈合率显著降低（P<0.01）;干预后7 d,空白组创面已有鳞状上皮覆盖,与空白组比较,模型组大鼠创面仅创缘少量结痂,创面中大量炎细胞浸润,组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）;干预后14 d,空白组创面肉芽组织成熟,愈合良好,与空白组比较,模型组创面炎细胞浸润和红细胞渗出尚未完全消退,组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肉桂醛组和贝复新组大鼠创面愈合情况较好,创面愈合率显著升高（P<0.01）,干预后7 d组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin及LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）,干预后14 d组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论 肉桂醛能促进糖尿病创面愈合,上调创面愈合率,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,增加VEGF、胶原纤维蛋白的水平,其机制可能是通过调节PINK1/Parkin信号通路表达,激活线粒体自噬,抑制炎症反应,增加血管新生和胶原合成,从而达到促进糖尿病大鼠创面愈合的目的。