间日疟原虫MSP1 C端编码基因的克隆及序列分析

目的 克隆间日疟原虫MSPl C端编码基因，并进行序列测定和分析。方法 根据间日疟原虫MSPl C端编码基因设计1对引物，采用PCR技术从深圳间日疟患者血样(编号为PvSZl)的核酸提取物中扩增出MSPl C端编码基因，回收纯化后，与T载体连接构建重组子pMD／MSPl，并转化大肠杆菌JMl09。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后，双脱氧链末端终止法双向测定序列并分析。结果 从间日疟血样提取的DNA中扩增出1119bp的基因片段，所构建的pMD／MSPl阳性克隆重组子经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的间日疟原虫PvSZl C端基因序列与国外Sal-1株比较，碱基数相同，未发现碱基缺失，相同的核苷酸占96．7％，序列中第542位碱基变化为同义突变(GTC→GTT，均编码缬氨酸)，第375～542区间的碱基变化数占整个序列变化碱基总数的92．9％(34／37)。所推测的氨基酸序列与Sal-1株比较，同源性为92．5％。结论 成功克隆了间日疟原虫PvSZl株MSP1 C端编码基因，该基因存不同间日疟原虫地弹株间相对保守，所克隆基因序列的第375～542核苷酸区域为高频变化区。     

2012年石家庄地区急性呼吸道感染病例人偏肺病毒的分子流行病学特征

目的通过分析石家庄地区急性呼吸道感染病例中人偏肺病毒（human metapneumovirus,hMPV）的感染情况、临床特点和基因特征,掌握石家庄地区hMPV流行特点。方法采集2012年1~12月,河北省儿童医院和石家庄市人民医院两所医院门诊呼吸道感染病例标本297份,收集相关临床资料,采用多重RT-PCR方法检测包括hMPV在内的15种呼吸道病毒核酸。hMPV阳性标本通过RT-PCR扩增M基因片段,并进行核酸测序。用Mega 6软件比对序列和绘制系统进化树。结果从297份标本中检出阳性标本130份,总阳性率为43.77%,其中hMPV阳性标本5份,核酸阳性率为1.68%。患者年龄为2个月~57岁。1例病例混合感染鼻病毒和副流感病毒。临床诊断为上呼吸道感染和支气管肺炎。3株间核苷酸同源性为92.0%~99.9%。基因进化分析显示石家庄Hebei2012-1为A2b基因型,Hebei2012-2和Hebei2012-3属于B1基因型。结论石家庄地区hMPV流行基因型别为A2b和B1型。     

寄生虫副肌球蛋白的分子免疫学研究进展

副肌球蛋白存在于无脊椎动物,由同源二聚体构成.副肌球蛋白具有多方面的生理作用,是一个重要的显性抗原,具有调节免疫反应的特性.近来,对副肌球蛋白的分子生物学特点和免疫学作用做了较广泛深入的研究.该文将从其分布,作用及分子特征,疫苗的研究,T、B淋巴细胞表位,参与免疫调节等研究进展进行了综述.     

免疫缺陷性皮肤病

HIV-1型前病毒基因检测芯片的研制及应用,Tetramer和Elispot方法在评价特异性HIV-1细胞免疫反应中的应用和临床意义，广东省女性吸毒中流行的HIV-1基因序列分析，江西省HIV-1基因序列流行特征分析，山东省HIV-1感染分子流行病学研究，     

抗乳腺癌人单抗CM—1重链可变区基因的序列测定与分析

为存留抗乳腺癌人单抗CM－1的可变区编码基因，从CM-1杂交瘤细胞中提出总RNA，经逆转录生成cDNA，PCR后得到一400hP左右的基因扩增片段。用一条内引物直接对PCR产物进行基因序列测定，测得344个碱基序列，与已知人抗体重链可变区的读码框架相符，其对应的氨基酸序列属人抗体可变区“典范结构”的1～3类，从而进一步验证了CM-1单抗的人源性，并为人抗体编码基因的研究提供了新资料，也为制备CM－1小分子抗体作了准备。     

9例家族性乳腺癌患者BRCAl基因序列突变分析

目的：研究中国汉族家族性乳腺癌（familiar breast cancer，FBC)患者BRCA1的突变情况。方法：选取中国汉族9个乳腺癌家系中各1例乳腺癌患者，1例无肿瘤家族史的正常人，32例散发性乳腺癌患者和33例正常献血者。从外周血淋巴细胞中提取DNA，经PCR扩增后，以变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)初筛BRCA1所有编码外显子及部分内含子的多态性，对异常峰型者直接测序。结果：在9例家族性乳腺癌患者中，1例患者在外显子11上发现一处致病性突变(3870delTGTC)，该突变因缺失4个碱基导致框架移位。1例患者发现尚未见报道的密码子867单个碱基替换导致编码氨基酸的变异(E867R)。8例患者在内含子18(IVS18 65)上检出已知的G→A变异，变异率为88．9％(8／9)。该位点变异在散发性乳腺癌和一般人群中的检出率分别为37．5％(12／32)和33．3％(11／33)。该8例患者同时检出密码子871已知的错义变异(P871L)与内含子9(IVS8—57delT)的变异，且有1例患者在此3处的变异为纯合变异。这8例患者的检测结果提示，IVS18 65G→A、IVS8—57delT与2731C→T这3个位点存在连锁。该连锁情况尚未见报道。2例患者在密码子1436发现已知为多态的改变(S1436S)。1例患者在密码子771检出已知为多态的改变(L771L)。另外在内含子区发现多处变异(IVS2 48C→T，IVS2 133C→T，IVS12 112C→A)。结论：BRCA1突变在中国汉族家族性乳腺癌患者中有其自身特点，其突变热点有别于白人和犹太人。在中国家族性乳腺癌患者中进行BRCA1突变的进一步研究及寻找其它致病基因具有重要意义。     

人疱疹病毒6型感染和儿科临床疾病

人疱疹病毒6型(HHV-6)是在1986年由Salahuddin SZ从艾滋病人和淋巴细胞增生性疾患病人的末梢血单核细胞中分离到的。以后根据这种新发现病毒的病毒学特征，归类于疱疹病毒，称疱疹病毒6型。1988年日本科学家YarrlanishiK证实HHV-6是幼儿急疹的病原，并且HHV-6在原发感染后潜伏于人体，当人体免疫低下时可以再活化。本文简述了HHV-6的病毒学特征、感染的发病机理，概述了幼儿、儿童感染HHV-6的临床方面的研究进展。     

北京地区新近报道的人Boca病毒VP1、VP2蛋白编码区基因序列分析

目的了解北京地区新近报道的人Boca病毒（human bocavirus，HBoV）主要结构蛋白编码区基因的特征。方法选择已经过初步研究证明为HBoV NP1基因检测为阳性的2份临床标本BJ3064、BJ3722。应用针对HBoV VP1蛋白编码区基因的PCR引物进行扩增，对所获得的PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定。将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较分析和种系进化分析。结果从标本BJ3064及BJ3722中扩增得到HBoV VP1蛋白编码区全基因的PCR扩增产物为2016bp，编码671个氨基酸。VP2蛋白是在不改变开放性读码框架（ORF）的情况下，由VP1蛋白编码区内起始合成，并与VP1终止于同一终止密码子，长度为1629bp，编码542个氨基酸。与HBoV原型株ST1、ST2株相比较，BJ3064、BJ3722的VP1及VP2蛋白无论是核苷酸水平还是氨基酸水平的同源性均超过98％，但与同属细小病毒的BPV及MVC相应位置的序列相比较，同源性较低，其中核苷酸序列同源性低于60％，而氨基酸序列同源性低于50％。VP1及VP2蛋白的编码区基因进化分析显示。BJ3064、BJ3722与ST2之间进化关系较ST1更密切。在BJ3064、BJ3722的VP1蛋白中，也存在类似于MVC的保守性磷酸酯酶A2特异性位点的活性基序（HDXXY）及Ca^2＋结合位点。结论已得到HBoV的结构蛋白VP1和VP2的全基因，将为儿科急性呼吸道感染中该病毒的病原作用、地位及其在各年龄组人群中的血清学特征的深入研究打下坚实的基础。     

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。