立克次氏体传染病

PCR／SSCP在恙虫病东方体基因分型中的应用——刘运喜等(山东济南山东大学公共卫生学院流行病学与卫生统计学研究所250012)；《中国公共卫生》，2004，20(4)：400-402[目的：采用优化聚合酶链反应／单链构象多态性分析(PCR／SSCP)方法分析恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi，Ot)基因型的各项条件。     

重叠区扩增基因拼接法拼接hIL-2信号肽基因和CVB3的VP1基因

目的：将hIL-2信号肽基因拼接到CVB3VP1基因的5’端，以获得分泌型VP1(sVP1)基因。方法：采用重叠区扩增基因拼接法。结果：凝胶电泳见到预期大小DNA条带，经测序表明基因序列与报导的hIL-2信号肽及CVB3 VP1的基因序列一致。结论：成功获得了融合基因sVP1。     

660-bp与MMTV相似的基因序列在人类乳腺癌中的研究

乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤，世界卫生组织估计，全球每年约有120万人发病，50万人死于此疾病。在西欧、北美等发达国家。乳腺癌发病率更居女性恶性肿瘤首位，虽然亚洲是乳腺癌低发区，但我国乳腺癌的发病率也正逐年上升，并且有跃居女性恶性肿瘤首位的趋势。迄今为止，关于乳腺癌的病因尚不清楚，各种危险因素在乳腺癌发病中的作用也仍在探索中。在过去的30余年里。关于病毒与人类乳腺癌关系的研究已取得了初步进展，近年来在人类组织中发现了与小鼠乳腺肿瘤病毒(Mouse Mammary Tumor Virus，简称MMTV)相似的660-bp基因序列。为了更好的认识该基因序列，特将其在人类乳腺癌中的研究情况综述如下。     

SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

①目的 了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法 分别将具有明确致病性的22种冠状病毒(包括6株SARS病毒)S蛋白编码序列和22种冠状病毒全基因序列(包括11株SARS病毒)进行对排并绘制系统发生树，观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置，预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果 在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确，与其在美国国立医学图书馆(NCBI)中的分类相一致。④结论 SARS病毒县需特病毒的一个新的变种，具有呼吸道上皮嗜性。     

用Red系统敲除大肠杆菌O157:H7的ecs4553以及ecs4563基因

目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157:H7的突变体.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5'端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除.结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157:H7突变菌株.结论:为进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.     

人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因的序列分析

本实验室已用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法扩增了人甲状腺过氧化物酶(hTPO)抗原决定簇基因:1702—2622,并对该段基因进行了亚克隆,获得3个重组质粒,分别定名为PESY1011,PESY1012,PESY1013(重组载体为PUC18)。本实验利用聚合酶链式反应-双链DNA(PCR-dsDNA)测序方法对3个重组质粒进行了测序,以确证我们克隆hTPO抗原决定簇基因是成功的。     

人表皮生长因子真核表达载体的鉴定

目的：鉴定人表皮生长因子的真核表达载体。方法：重组体进行限制性酶切及PCR可见目的片段。结果：pCDDA3.1—hEGF真核表达载体已成功构建。结论：已成功构建hEGF真核表达裁体，为进一步研究hEGF的功能奠定了基础。     

临床致病菌整合子检测及耐药基因盒序列分析

目的对临床菌株中的第一类整合子分布及其耐药基因盒的结构特征进行分析。方法应用PCR方法检测33株临床菌株中的第一类整合酶基因intI，并对intI阳性菌株整合的耐药基因进行测序及序列分析。结果33株临床菌株（100％）均为第一类整合酶基因阳性。耐药基因盒特异PCR扩增发现，29株菌得到1913bp的扩增产物，2株得到1664bp的产物，1株得到1009bp的产物，1株得到1913bp和1009bp两种不同产物。序列分析结果表明，1913bp的扩增产物携带基因盒dhfr、orfF和aadA2，1664bp的扩增产物携带基因盒aadA5和dfr17，1009bp的扩增产物携带基因盒aadA2，aadA2和aadA5均为编码对氨基糖苷类抗生素产生耐药的基因盒，dhfr和dfr17均为编码对磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶产生耐药的基因盒；orfF为未知功能的开放阅读框。结论第一类整合子介导的耐药基因广泛存在于临床致病细菌中，提示要加强对耐药基因在细菌种属间水平转移的监测工作。     

大劣按蚊前酚氧化酶基因部分序列的克隆与序列分析

目的 克隆大劣按蚊(Anopheles dirus)前酚氧化酶(Prophenoloxidase，PPO)基因部分序列。方法 根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物，以大劣按蚊总RNA为模板进行RT—PCR扩增，目的片段经TA克隆后测定其核酸序列，然后进行序列查询与比对。结果 大劣按蚊PPO基因(AdPPO)部分序列长598bp，编码199个氨基酸；AdPPO与冈比亚按蚊PPO5基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达84．23％和88．89％。结论 成功克隆出AdPPO部分序列，其与冈比亚按蚊PPO基因序列具有很高同源性。