细菌抗噬菌体感染分子机制

细菌与噬菌体间是一种寄生关系,一方面细菌抵抗噬菌体感染,另一方面噬菌体也产生抗宿主菌防御的改变。本文从细菌的被动免疫、主动防御方面综述了多种细菌抵抗噬菌体的分子机制。这其中既包括细菌生物膜的物理阻隔作用,也包括吸附抑制、注入阻滞、限制修饰系统、流产感染等机制,还包括新近发现的细菌的适应性免疫-CRISPR-Cas系统以及噬菌体排除系统。细菌与噬菌体间的竞争,不仅是自身选择压力的结果,也是彼此共进化的动力。     

COMP特异性单抗15A11的表位特征研究北大核心CSCD

目的:鉴定RA相关自身抗原COMP的一株特异性单克隆抗体15A11的表位特征。方法:选用随机十二肽噬菌体库对m Ab 15A11进行三轮筛选,随机挑取40个单噬菌斑,提取DNA,测序;ELISA检测每个噬菌体克隆与m Ab 15A11结合的特异性;通过Clustal W2对特异性结合的噬菌体展示的十二肽和COMP进行氨基酸序列比对,Py MOL分析一致氨基酸所在肽链的二级结构及表位氨基酸之间的距离,初步确定m Ab 15A11的表位;变性和非变性Western blot、EDTA螯合Ca2+后ELISA分析以及合成多肽的ELISA实验进一步确定表位序列。结果:得到的40个测序噬菌体中,共有5个噬菌体克隆,ELISA确定克隆1和克隆2与m Ab 15A11特异性结合,其他克隆均为非特异性结合的噬菌体;氨基酸序列比对,在COMP上未发现与克隆1和克隆2噬菌体相同的连续氨基酸序列,提示m Ab 15A11的抗原表位可能为非线性表位;Py MOL分析表位氨基酸在COMP上的定位及距离,显示构象表位的合理性;变性Western blot分析为阴性,而非变性Western blot条件下为阳性;EDTA螯合Ca2+破坏COMP的构象后不能与m Ab 15A11结合,而未经处理的与m Ab 15A11结合,均说明m Ab 15A11表位是构象表位;合成多肽与m Ab 15A11的ELISA结果进一步确定了m Ab 15A11的构象表位序列。结论:鉴定了m Ab 15A11的表位是构象表位序列,且确定了该构象表位的氨基酸组成,为研究COMP抗体与抗原反应机制具有重要理论价值,并对类风湿性关节炎的检测有重要应用意义。     

噬菌体法检测结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的：利用噬菌体法进行结核分枝杆菌检测,对链霉素、异烟肼、利福平药物敏感性测定,来分析其实验方法的灵敏度、特异性及药物敏感性同比例法的符合率,指导临床诊断和合理用药治疗。方法利用噬菌体法进行结核分枝杆菌的检测,链霉素（S）、异烟肼（H）和利福平（R）药物敏感性测定,以比例法为对照,来分析噬菌体法的灵敏度、特异性及符合率。结果噬菌体法药物敏感测定结核分枝杆菌同比例法的符合率为90.2%,分别为S 92.6%、R 91.1%、H 88.6%;噬菌体法直接检测肺结核患者痰样本结核分枝杆菌,涂阳培阳、涂阴培阳、涂阴培阴样本检出率分别为96.2%、80.0%、26.2%。结论噬菌体法可快速检测肺结核患者痰样本中结核分枝杆菌,检出率明显高于涂片法,敏感性、特异性较高;噬菌体法对临床分离株进行药物敏感性测定,与比例法比较符合率较高,报告时间只需3 d,且无需特殊仪器、费用低,对临床早期诊断与治疗具有重要意义。     

噬菌体展示技术的应用及研究进展

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面,利用外源蛋白或多肽与筛选靶标的特异性亲和作用,通过吸附、洗脱、扩增的重复过程,将含有特异性外源蛋白的噬菌体从表达有各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来,并得到大量富集,而后进行基因序列测定.1985年,Smith通过基因工程手段将外源蛋白质与噬菌体的次要外壳蛋白pⅢ形成融合蛋白展示于噬菌体颗粒表面,可保持相对独立的空间构象和生物活性,而不影响重组噬菌体对宿主菌的感染能力.与其他表达系统相比噬菌体展示技术具有显著的优点：可将基因型和表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起,是一种高效的筛选系统.最近几年, 噬菌体展示技术发展迅猛,在细胞信号转导、基因表达调控、人源单克隆抗体的制备、药物筛选和疫苗研制以及疾病诊断、治疗等研究领域得到广泛的应用.本文将概述用于筛选多肽噬菌体展示库所表达的外源蛋白的各种靶分子,并介绍此项技术在各个领域的应用.     

3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用

2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本。为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法（RGICA）、鼠疫反向间接血凝试验（RIHA）和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性。在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,     

一株肠道产毒性大肠艾希菌与志贺菌属血清交叉凝集的报告

[目的]报告一株来自食源性疾病患者肛拭的菌株,该菌株与两种诊断血清发生交叉凝集。[方法]采用GB／T4789．5,6,31—2003国标法进行检验。[结果]该菌株生化反应符合大肠艾希菌,血清学凝集试验证实为肠道产毒性大肠艾希菌O25：K19（L）;但同时与志贺菌属多价、单价血清发生凝集。[结论]肠道产毒性大肠艾希菌与志贺菌属抗原有交叉凝集,判定时应引起注意。     

预培养时间对结核分支杆菌噬菌体试验结果的影响

目的:探讨研究预培养环节对分支杆菌噬菌体生物扩增法试验结果的影响。方法:对166例临床诊断为肺结核患者的标本,经液化处理后均进行过夜组(预培养24h)及不过夜组(室温放置6h后)分支杆菌噬菌体生物扩增试验,试验方法按结核分支杆菌噬菌体裂解试剂盒(FAST PlaqueTBTM)操作手册操作,对照分析二者的阳性率和污染率。结果:166例肺结核患者标本,过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为59.0%;非过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为57.8%,二者的阳性率接近,差异无统计学意义(x2=0.496,P>0.05),过夜组污染率为13.9%,明显高于未过夜组的7.2%,二者的差异有统计学意义(x2=3.86,P<0.05)。结论:分支杆菌噬菌体生物扩增法试验标本处理后室温放置6h比预培养1d效果好,可以提前一天报告结果,建议临床推广应用。     

鼠疫噬菌体国家参考品的研制

目的采用鼠疫噬菌体国家参考品研制鼠疫鉴别及鼠疫活疫苗纯菌检查。方法制备鼠疫噬菌体参考品,建立噬菌体效价质量标准,对参考品进行协作验证,并对参考品进行稳定性分析。结果研制的鼠疫噬菌体国家参考品,其效价质量标准应不低于10^-7,该参考品在-20℃条件下具有较好的稳定性,在37℃条件下稳定性较差。结论研制的鼠疫噬菌体国家参考品已被国家有关部门正式批准,可用于鼠疫鉴别诊断及鼠疫活疫苗纯菌检验。