小鼠胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞的定向分化

目的:血管重建手术在多数情况下以自体血管作为替代品,但来源有限.胚胎干细胞具有发育全能性,目前其定向诱导机制尚不明确.通过选择适当的诱导剂,探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势.方法:实验于2006-08/2007-02在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成.①动物及细胞系:清洁级孕12.5d昆明小白鼠1只,由南昌大学医学院动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ编号为SCRC-1018,由American Type Culture Collection提供.②实验方法:取孕12.5 d鼠胚胎,去除头部、内脏及四肢,将组织块剪碎,胰酶消化,分离培养胚胎成纤维细胞,传至3-5代时史换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基,24 h后收集培养液,加入2.0mmol/L L-谷氨酰胺,1×非必需氨基酸,0.1 mmol/L β-巯基乙醇,1000 U/mL白血病抑制因子,此即为条件培养基.常规复苏小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ,以1 × 106密度接种,传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞,加入条件培养基5 mL,经过悬滴一悬浮培养,构建拟胚体分化模型.设立3组,各组均置于明胶包被的T25培养瓶中,每瓶加入50个拟胚体,使其均匀分布于培养瓶底.诱导组7～10 d加入10-9 mol/L全反式维甲酸和3 μ g/L转化生长因子β1,10～21 d加入20μg/L血小板源性生长因子.血清对照组仅加入去生长因子胎牛血清,全反式维甲酸组仅加入全反式维甲酸.诱导21 d的拟胚体,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ联合消化为单个细胞,再加入20μg/L血小板源性生长因子继续诱导7 d.③实验评估:应用RT-PCR法检测诱导细胞血管平滑肌肌动蛋白、血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达.通过免疫细胞化学技术检测血管平滑肌肌动蛋白的表达来鉴定细胞性质.结果:①胚胎干细胞牛长及拟胚体诱导分化:胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体,经过不同生长因子的分阶段联合诱导,拟胚体贴壁后球体略摊开,周围出现大量的梭形细胞.②RT-PCR检测:拟胚体血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因均呈强阳性表达.③免疫细胞化学检测:荧光显微镜下,罗丹明染色细胞浆呈红色荧光,并可见肌丝结构;DAPI染色细胞核呈蓝色荧光.诱导组血管平滑肌肌动蛋白阳性率明显高于血清对照组、全反式维甲酸组(P＜0.05).结论:胚胎干细胞经维甲酸、转化生长因子β1以及血小板源性生长因子分阶段联合诱导后,可分化为血管平滑肌细胞且纯度较高.随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决,胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞.     

多媒体在护理学实验教学中应用的研究

护理学实验教学是护理学教育中的核心内容之一,与理论教学密不可分.多媒体技术以其自身独特的优越性,渗透到护理学实验教学的方方面面.笔者开展多媒体实验课教学3年来,既有成效,也有可供借鉴的经验教训.     

不同来源胰腺干细胞分化为胰岛样细胞团比较研究

目的 比较不同来源的胰腺干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞团的可行性及效率.方法 分别取孕16天胎鼠胰腺(A组,5只)、糖尿病大鼠胰腺(B组,5只)、正常大鼠胰腺(C组,5只)经体外分离纯化获得巢蛋白(nestin)阳性胰腺干细胞,免疫荧光组化法比较各组干细胞中PDX-1的表达情况;添加各种诱导分化因子,观察胰岛样细胞团出现的时间并行双硫腙染色鉴定.结果 各组均可分离纯化出Nestin阳性胰腺于细胞,免疫荧光组化显示A组PDX-1阳性的细胞数(50%)多于B组(45%)及C组(42%),经诱导分化各组胰腺干细胞均可分化成胰岛样细胞团,并经双硫腙染色鉴定证实为分化胰岛,但各组细胞团形成时间不同,以A组分化为胰岛样细胞团所需时间较短(10±3)天,而B组及C组所需时间较长,分别为15±2天及16±3天,各组分化时间存在统计学差异(P＜0.05).结论 不同来源的胰腺干细胞均可分化为胰岛样细胞团,以胎鼠胰腺干细胞定向分化为胰岛样细胞团的效率最高.     

中国不可分群脑膜炎奈瑟菌的分子分型分析

目的了解我国血清不可分群(non-serogroupable,NG)脑膜炎奈瑟菌分子分型特征。方法选取我国2005-2011年分离的104株血清不可分群脑膜炎奈瑟菌作为研究对象,采用多位点序列分型(MLST)和聚合酶链反应(PCR)基因分群(A、B、C、W、E、X、Y、Z、H、I、L、K、cnl)方法,检测其ST序列群及基因群。结果 104株不可分群脑膜炎奈瑟菌中,基因群分布为荚膜基因缺失菌株(capsule null locus,cnl)(36株)、B群(20株)、C群(14株)、W群(9株)、E群(9株)、X群(3株)和Y群(3株),余下10株未鉴定出基因群;未发现其他基因群菌株。MLST分型将104株NG菌株分为45种ST型,其中14种为新的ST型;17种ST型可归为7个序列群(65株);cnl菌株全属于ST-198序列群,B群和C群菌株以ST-4821为优势序列群,W群以ST-11和ST-174序列群为主。结论我国NG脑膜炎奈瑟菌具有基因多态性,其中ST-198序列群全部为cnl菌株。     

铜绿假单胞菌医院感染分离株耐药基因谱及亲缘性分析

采用PCR方法检测铜绿假单胞菌(Pa)医院感染分离株中耐药基因谱,并对检测结果作聚类分析以了解其亲缘性.发现TEM、OXA、PER、GES的阳性率分别为51.4%、42.8%、31.4%、22.9%,而SHV、VEB、CTX-MⅠ、IMP、VIM基因均阴性.oprD2缺失率为60%;qacE△1基因阳性率为94.3%.认为35株多重耐药的医院感染Pa可分为两群,在医院感染控制工作中应该引起高度的重视.     

义齿修复工作模型超硬石膏用量分类初探

目的:通过测量义齿修复工作模型重量,计算各模型所含超硬石膏粉的用量,再按其粉用量,对义齿修复工作模型进行统计学分类.以期依据分类指导临床灌注模型,控制超硬石膏粉的用量和标准水粉比例,达到提高模型质量、节约材料的目的.方法:随机选取临床小号、中号、大号3种托盘制取的修复工作模型311例,计算出工作模型所需超硬石膏粉的用量,实验数据采用SPSS 13.0软件包进行分析,统计各型号托盘印模所需超硬石膏粉用量的均数值进行分类,并临床试用验证.结果:义齿修复工作模型按其超硬石膏的用量可分为3类,小号模型所需超硬石膏粉≤45g,中号为46～55g,大号为56～65g.验证样本均在超硬石膏粉用量分类范围之内.结论:义齿修复工作模型所需超硬石膏粉用量与托盘大小、牙弓大小基本对应,依此作为工作模型的分类指标和用量标准较为合理,用于临床可以适当计量超硬石膏粉用量和按标准水粉比例灌注工作模型,提高模型质量,节约材料.     

虎潜丸加减治疗骨质疏松症30例疗效观察

骨质疏松症系由多种原因引起的一组骨病,其特点是单位体积内骨量减少,骨皮质变薄,骨小梁数目及大小均减少,髓腔增宽,骨荷载功能减弱,从而产生腰背、四肢疼痛,脊柱畸形,骨脆性增加,最终可导致骨折,多见于中老年人.目前全球骨质疏松患者约达2亿人,骨质疏松症已成为世界性关注的严重社会问题,在我国也已将它列为三大重点攻关研究的老年疾病之一[1].骨质疏松症按病因可分为原发性和继发性两大类,中医认为原发性骨质疏松的病因主要是脾肾两虚所致,而补肾为主佐以健脾为防治原发性骨质疏松的有益途径.笔者近年来用虎潜丸加减,治疗骨质疏松属中医肾虚型患者30例,取得满意疗效.     

卵巢癌问答(四)

(接上期) 12.卵巢肿瘤可分为哪几类 由于卵巢本身遗传和解剖的特点,全身各个部位的肿瘤都可以在卵巢上发生,具有高度分化潜能的卵巢可以发生胚胎发育过程中3个胚层来源的肿瘤.     

浅谈“阴阳”二元学说对先秦时期人们性认识的影响

朴素的"阴阳"二元学说认为宇宙间一切事物都可以概括为阴和阳两类,任何一种事物内部又可分为阴和阳两个方面,阴阳是相互对立的,但又是相互制约、互根互用、消长平衡和相互转化的,是对立的统一.先秦时期人们对性的认识也深受"阴阳"二元学说的影响.为此本文从(1)男女交合是符合阴阳天道的"至理";(2)男女交合能促进阴阳互根互用;(3)男女交合要注重阴阳的消长平衡三个方面,阐述了"阴阳"二元学说对先秦人们性认识的影响.     

挫伤性前房出血的护理

挫伤性前房出血是一种较常见的眼外伤症状表现,也是眼科主要的急症之一.临床上患者主要表现为眼球疼痛和视力减退.如果护理不当,则少数患者可因继发性青光眼或角膜血染而导致失明.根据出血的发生时间,挫伤性前房出血可分原发性出血和继发性出血两种类型.