人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.     

低氧性肺动脉高压发病机理与防治研究现状

肺原性心脏病是常见病．在我国85％的肺心病由慢性阻塞性肺疾患发展而来，其中肺动脉高压是肺心病的关键发病学环节，而低氧又是形成肺动脉高压的重要因素，因此，阐明低氧性肺动脉高压CHPH)的发病机制及寻找有效的防治方法一直是人们研究的热点之一。     

国内首报染色体新核型46,XY/47,XY,+8病例分析

病例报告 患儿。男,2岁半,因发商迟缓,智了、f骶下姚诊。系0■胎足月颞产,生后轻度窒息,全身矗鱼鳞状黑皮,7—3个月脱掉,6—7个月时患过肺欠,t‘\_不会说话,只会喊爸爸妈妃,营养j}1等. 查体::q 84cm,体讯12.5kg,头同47cm,胸围45cm,方型颅,前后囱已闭,头发稀,鼍棕黄色,发际低,前额突出,耳大而低位,眼距宽,内眦赘皮,左眼上内斜,鼻根宽而不低,鼻孔外翻,青蛙嘴,口角轻上斜,腭弓高,上切牙呈月牙形破损,典型蹼颈,双手小捐内弯,两足2—3趾短,足底有类似猫爪的特殊皮肤纹理.反应差,任性,智力低下.心肺正常,肝肋下3 cm,脾未触及,右侧睾丸下降至阴囊,…     

肾阳虚患者头发微量元素锌、铜变化

本文通过对41例肾阳虚患者不同疾病头发微量元素的分组对比观察,探讨微量元素与"证"和"病"之间的关系。发现肾阳虚患者在不同疾病头发锌含量有相同的改变,比对照组明显降低(P<0.001),显示肾阳虚证与锌的低下有关。克汀病组头发铜含量比对照和骨质增生组均明显降低(P<0.001及0.01),克汀病和骨质增生所产生的病理变化和临床表现与这两种不同疾病对某些微量元素含量的减少或增多以及影响人的正常代谢有关。     

TECo COATRON IV-plus血液凝固仪评价及正常值确定

德国TECo公司COATRON IV-plus血液凝固仪,融传统的血液凝固分析法和现代的发色底物法检测原理于一体,操作简易而功能多样,适应现代临床医学的发展需要。本研究着重对COATRON IV-plus仪器的检测重复性、稳定性、线性、抗生物干扰物质功能进行观察和评价,并与美国ACL-200血液凝固仪血凝指标的检测结果进行相关分析,同时确立了本室该仪器PT、APTT、TT、Fbg的正常参考值。报道如下。     

中西医结合治疗再发性皮炎87例临床分析

1998 - 0 1～ 2 0 0 1- 0 3 ,笔者采用中西医结合方法治疗再发性皮炎 87例 ,取得满意效果。现报告如下1　一般资料本组 87例 ,全部为女性。年龄最大 3 6岁 ,最小 17岁 ,平均 2 7岁。病程最长 6年 ,最短 2周。2　治疗方法2 1　中医治疗内服疏风止痒、养血润肤中药养颜润肤汤。方剂 :当归2 0ｇ ,熟地 2 0ｇ ,川芎 2 0ｇ ,赤芍 2 0ｇ ,桑叶 2 0ｇ ,菊花 2 0ｇ,防风 2 0ｇ ,蝉衣 2 0ｇ ,苦参 15ｇ ,玄参 15ｇ ,天冬 11ｇ,寸冬 15ｇ,加水没药 2指 ,煎取 2 0 0ｍｌ,再加水 3 0 0ｍｌ,煎取 10 0ｍｌ,两煎混合 ,每日 1剂 ,分 2次口服。2 2　西医治…     

残胃癌及残胃再发癌的外科治疗

统计我院自 1984 - 2 0 0 1年共收治残胃癌及残胃再发癌共 17例 ,其中残胃癌 7例 ,残胃再发癌 10例。全部病例均经过胃镜及病理证实 ,现分析如下 :1　临床资料1 1　见下表1.2　主要症状 :残胃癌及残胃再发癌的早期症状不典型 ,临床表现因发生部位的不同而异。主要表现为中上腹部不适、疼痛、吞咽困难、呕吐、呕血、黑便、消瘦、厌食等。1.3　胃镜所见 :多可见粘膜充血、糜烂、溃疡、肿胀及结节等。癌旁粘膜多伴有萎缩性炎性或萎缩增生性炎性改变 ,特别是吻合口处残胃粘膜常见息肉状增生。1.4　病理学检查 :残胃癌中 ,腺癌 4例 ,低分化腺癌2…     

输血反应与临床处理

输血是临床治疗的重要组成部分 ,是改善和维持体内环境平衡的重要措施之一。但是输血可传播某些疾病 ,也可引起不良反应。临床上常见的是输血免疫反应 ,免疫反应有即发反应和迟发反应 ,本文只讨论即发反应 ,即发反应是在输血当时或输血后 2 4小时内发生的反应 ,主要有以下几种。1　发热反应较常见 ,在输血期间或输血后 1～ 2小时内发生。主要表现为寒战、发热、头痛、心慌。引起发热反应的主要原因有 :(1)热原反应 ,血内有致热原 ;(2 )免疫反应 ,与多次输入ＨＬＡ不相合的白细胞、血小板有关 ;(3)溶血性输血反应和细菌污染性输血反应等早期…     

微分电位溶出法连续测定人发中锌铜

锌、铜是人体十分重要的必需微量元素 ,锌对机体免疫系统和防御机能具有重大作用。铜具有酶和激素的生物催化作用 ,为多种金属酶的组成成分。锌、铜的生理功能和营养作用越来越引起人们的重视。用于人发微量元素测定的方法很多 ,而微分电位溶出法灵敏度高 ,分辨率、峰形、重现性好 ,分析过程自动化程度高。而且有仪器装置简单、价格低等优点。1　材料与方法1 1　仪器 :ＤＰＳＡ - 3型微分电位溶出仪 ,山东电讯七厂。甘汞电极、玻碳电极、锥电极、ＷＦＸ -ＩＣ型原子吸收分光光度计 ,北京第二光学仪器厂。1 2　试剂 :锌、铜标准溶液 :将购买…     

神经系统特异性蛋白质在新生儿缺氧缺血性脑病中的诊断价值

目的 评价缺氧缺血性脑病（HIE）新生儿脑脊液（CSF）和血浆中神经元特异性稀醇化酶（NSE）、S-100蛋白（S-100protein,S-100)、髓鞘碱性蛋白（MBP）、肌酸磷酸激酶脑型同工酶（CK-BB）等党课 经系统特异性蛋白质与新生儿HIE程度及预后的关系。方法 新生儿HIE患儿55例,无中枢神经系统疾患的患儿16例作为对照,取CSF和血浆检测上述4种神经系统特异性蛋白质水平。NSE、S-100、MBP用放射免疫试剂盒检测,CK-BB用酶法及琼脂糖电泳法检测,存活出院的患儿定期随访。结果 CSF的NSE、S-100、MBP、CK-BB及血浆NSE、CK-BB均与HIE程度相关,但只有CSF的神经系统特异性蛋白质才能较准确地反映患儿的远期预后,其中敏感性、特异性最高的指标是NSE和S-100。结论 CSF的NSE和S-100是判断HIE患儿脑损伤程度、预测远期预后的可靠指标。