病毒性肝炎的基因治疗进展

基因治疗是对病毒性肝炎防治极有潜力的治疗策略，两个肝炎基因治疗途径相关的基础研究正在进行：第一，基于核酸的抗病毒治疗途径，如通过转基因表达的反义寡核苷酸、反义RNA，核酶以及感染肝细胞核心蛋白负向变异决定簇的表达已被用于阻止病毒复制；第二条有效疫苗的基因治疗途径是通过发展载体来表达病毒抗原、辅助细胞因子及T细胞协同刺激分子。     

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血T细胞受体表达的影响

目的：研究卡介菌多糖核酸(BCG PSN)对尖锐湿疣患者外周血T细胞受体(TCR)表达的影响，探讨BCG PSN对尖锐湿疣可能的免疫调节机制。方法：尖锐湿疣患者18例给予BCG PSN 0.5 mg，im，隔天1次，36 d为1个疗程。治疗前后采用双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测外周血CD＋3及TCRαβ＋T细胞、TCRγδ＋T细胞百分率。结果：在BCG PSN治疗前，尖锐湿疣患者CD＋3 T细胞百分率明显低于正常对照组(P＜0.01)，TCRγδ＋T细胞百分率较正常对照组明显下降(P＜0.01)，TCRαβ＋T细胞百分率与正常对照组差异无显著性(P＞0.05)；而治疗后尖锐湿疣患者CD＋3T细胞百分率高于治疗前(P＜0.01)；TCRαβ＋T细胞、TCRγδ＋T细胞百分率较治疗前升高(P＜0.01)。结论：BCG PSN可能通过调节尖锐湿疣患者外周血TCR的表达，起到治疗尖锐湿疣的作用。     

卡介苗多糖核酸微乳的研究

目的制备卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)微乳。方法采用磷脂为乳化剂,乙醇为助乳化剂,油酸乙酯为油相,用改良三角相图法确定微乳区域,优化BCG-PSN微乳处方组成。结果与结论所制得BCG-PSN微乳澄清透明,性质稳定。     

反义EGFR寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ促VSMC增殖的影响

目的探讨脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸基因转染对血管紧张素Ⅱ促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响．方法用反义表皮生长因子受体寡核苷酸脂质体复合物转染Sprague—Dawley大鼠血管平滑肌细胞，通过RT—PCR、Western—Bloting分别检测转染后EGFRmRNA及蛋白的表达情况，用^3H—Tdr掺入率实验检测经反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染再用血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞的增殖情况，结果反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染大鼠血管平滑肌细胞后，EGFRmRNA及蛋白的表达较正义组及对照组明显减少（P〈0．05）；用血管紧张素Ⅱ刺激后，反义组细胞的^3H—Tdr掺入较正义组及对照组明显降低，经方差分析两者有显著差异（P〈0．05），结论脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染减弱了血管紧张素Ⅱ的促血管平滑肌细胞增殖效应，证明了表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中起重要作用．     

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

PCR技术在赫坎按蚊复合体近缘种鉴别中的应用

目的应用聚合酶链反应（PCR）技术分析湖北省不同地区媒介按蚊的种型.方法采用传统的形态学方法和新建立的基因鉴别技术对现场捕获的按蚊分别进行形态特征鉴别和基因鉴别及比较.结果现场捕获181只按蚊,形态学确认176只为中华按蚊,而PCR鉴定172只为中华按蚊,另4只为八代按蚊;经形态学特征鉴别的5只嗜人按蚊中,PCR鉴别有4只为嗜人按蚊,另1只为八代按蚊.结论采用PCR基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊等近缘种按蚊,较传统的按蚊形态学鉴别方法准确,适用于复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测.     

定量检测丙型肝炎病毒核酸的临床意义

丙型肝炎病毒（HCV）是单股Ⅱ链RNA病毒，是输血后肝炎和散发性非甲非乙肝炎的主要病原，丙肝易演变为慢性或发展为肝硬化或肝癌，其发病机制主要为免疫病理损害。我国丙肝发病率约为1．58％．17．5％，目前诊断HCV感染的实验室指标主要有两个；抗-HCV和HCVRNA。抗-HCV是HCV感染的标志，可维持10年，但不能区分既往感染及现症感染，由于HCV在血清中浓度极低，用一般的血清学方法无法测到，所以采用RT—PCR的方法检测HCVRNA是目前唯一直接检测病毒血症的方法，是确定病人现症感染唯一特异性指标。丙氨酸氨基转移酶（ALT）由肝细胞制造，肝细胞的受损害程度与ALT有直接关系，它是体现肝细胞损害和坏死的特异性强灵敏度高的指标。现对146例高度怀疑丙肝患者的血清进行抗-HCV，HCV—RNA和ALT检测，分析报告如下。     

丙肝的危害不容忽视

由于丙肝早期症状不明显,有的病人发病几年都无任何症状,因此具有很强的隐匿性,很难被发现。加之常规检测中没有丙肝检测的项目,此病也常被不少人忽略。但事实上丙肝比乙肝更可怕。据专家介绍,在日本,丙肝的发病率是最高的,在肝癌患者中有15%～80%查出是丙肝病毒呈阳性的。在我国丙肝的发生率也相当高,大约有50%的丙肝患者会转变为肝硬化,而这些肝硬化病人中又有近50%会发展成为肝癌。而丙肝只有少部分人在急性期会表现为黄疸,即皮肤和眼睛变成黄色,大部分人在发病时是没有任何症状的。专家介绍,丙肝像艾滋病一样,主要通过血液传播,因此吸毒…     

卡介苗多糖核酸与减毒活卡介苗治疗哮喘患儿疗效比较及治疗前后细胞因子的变化

目的探讨卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）与减毒活卡介苗治疗儿童哮喘临床疗效及其对哮喘患儿TH1／TF12调节的差异。方法急性发作期哮喘患儿60例随机分A、B、C3组，每组20例。A组予全球哮喘防治创议（GINA方案）＋BCG-PSN0．5mg／次，肌注，1次偶日，共36次；B组予GINA方案＋减毒活卡介苗0．1mL，皮内注射，仅1次；C组单纯GINA方案治疗。酶联法检测治疗前后血清IgE及外周血单个核细胞（PBMC）诱生的IL-4、IL-5及IFN-γ。结果1．疗效：A组优于B组，B组优于C组（P均〈0．05）。2．治疗组治疗后IFN-γ均高于治疗前，IL-4、IL-5、IgE均低于治疗前。对于调整IL-5，A组优于B组和C组（P〈0．05，0．01）；对于上调IFN-γ及下调IL-4、IgE，A与B组比较无显著差异（P〉0．05）。结论1．BCG—PSN的疗效优于减毒活卡介苗。2．减毒活卡介苗一次性小剂量接种对哮喘儿IL-4、IFN-γ、IgE失衡的调节与BCG-PSN多次肌注效果相当，对IL-5失衡的调节不及BCG—PSN。     

核转录因子NF-κB对大鼠血管球囊损伤后新生内膜形成的作用

目的 探讨核因子κBp65亚基的反义和诱骗性寡核苷酸单独或联合作用对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和细胞基质金属蛋白酶的影响.方法 建立SD大鼠颈动脉球囊损伤模型.随机分为7组,每组分为6个时相点(6 h和1、3、5、7、14 d),每个时相点3只大鼠.结果 球囊损伤后7 d,模型组、正义组、诱骗对照组血管内膜/中膜比达到高峰,较正常组、反义组、诱骗组、反义+诱骗组显著升高(P＜0.05).球囊损伤后第3天,免疫组化检测细胞增殖标记物BrdU的掺入,与模型组相比,反义组、诱骗组、反义+诱骗组BrdU标记指数明显降低(P＜0.05).Western blot印迹法显示核因子κBp65蛋白表达在血管损伤后7 d达高峰.大鼠颈动脉损伤后7 d,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)蛋白表达在反义组、诱骗组、反义+诱骗联合治疗组均较各自对照组降低.结论 球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖在不同时相点有动态变化;核因子κB反义和诱骗性寡核苷酸可抑制MMP-9的表达.