新生鼠脑损伤后松果体细胞的一氧化氮合酶与细胞凋亡关系的初步研究

为了探讨新生鼠发生缺氧缺血性脑损伤时松果体细胞的诱生型一氧化氮合酶 ( i NOS)表达与松果体细胞凋亡及形态学改变的关系 ,用 7日龄新生 Wistar大鼠 ,结扎左侧颈总动脉 ,术后 2 h吸入 8%浓度氧 2 h,建立新生儿缺氧缺血性脑病模型( HIBD)。分别于建模后 0 h、2 4h、48h处死动物 ,剥取松果体 ,观察松果体细胞的 i NOS表达及细胞凋亡 ,电镜观察松果体形态学改变。结果表明 :( 1)新生鼠脑损伤后松果体的 i NOS在 0 h、2 4h含量与对照组相比明显升高 ;( 2 )脑损伤后松果体凋亡细胞早期明显增多 ,尤以 0 h、2 4h为主 ;( 3)电镜观察 :脑损伤后松果体的形态学也以 0 h、2 4h改变为明显 ,出现线粒体明显肿胀、粗面内质网极度扩张、细胞变性。提示 :( 1)新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 0 h、2 4h松果体细胞的 i NOS表达增加 ,以后逐渐下降 ,48h表达减少。 ( 2 ) TUNEL法原位检测细胞凋亡与 i NOS表达同步改变 ,i NOS表达对细胞凋亡有促进作用。 ( 3) i NOS表达和细胞凋亡参与了新生鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体细胞形态学改变     

结缔组织生长因子在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞中的表达及意义

目的:动态观察结缔组织生长因子(CTGF)蛋白在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达水平的时相变化,探讨其与肝窦内皮细胞下基底膜形成的关系。方法:采用腹部敷贴法建立血吸虫病肝纤维化模型,HE、Masson染色和透射电镜观察其病理变化;免疫组化技术检测CTGF、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和层粘连蛋白(LN)在小鼠肝脏组织中的表达和分布;并应用彩色图像分析仪进行定量分析。结果:与正常对照组比较,模型组鼠肝窦内皮细胞表达CTGF蛋白阳性或强阳性,肝窦壁LN、ColⅣ表达水平增高,且随着肝纤维化的发展,CTGF和LN、ColⅣ表达逐渐增强,肝窦内皮下基底膜逐渐增厚。图像定量分析两组平均吸光度值、平均灰度值和阳性面积比具有统计学差异;CTGF蛋白与LN、ColⅣ水平呈正相关。结论:血吸虫病肝纤维化时小鼠肝窦内皮细胞通过CTGF蛋白表达上调,调控细胞外基质产生,导致ColⅣ、LN分泌增加,参与肝窦内皮下基底膜形成,从而引起肝内微循环障碍。     

荷EL4肿瘤小鼠模型的建立及美法仑抑瘤作用免疫机制的探讨

目的:建立荷小鼠淋巴瘤EL4的野生型C57BL/6小鼠及其裸鼠模型,探讨美法仑(melphalan)抑瘤作用的免疫机制。方法:给正常野生型C57BL/6小鼠皮下接种小鼠淋巴瘤EL4细胞,建立荷EL4肿瘤的小鼠模型。于野生型C57BL/6小鼠皮下接种瘤细胞后12d,经腹腔给荷瘤小鼠单次注射不同剂量的美法仑,找出美法仑可发挥最大的抑瘤作用,并能致使肿瘤消退、不再复发的最小使用剂量。然后再给野生型C57BL/6小鼠及其裸鼠(遗传背景相同)皮下同时接种小鼠淋巴瘤EL4细胞建立两种荷瘤小鼠模型。同样于接种瘤细胞后12d,经腹腔给两种荷瘤小鼠模型均注射可使野生型C57BL/6小鼠肿瘤消退、不再复发的最低剂量的美法仑,以正常野生型C57BL/6小鼠为对照,观察在T淋巴细胞缺陷的裸鼠体内美法仑的抑瘤作用。结果:注射7.5mg/kg美法仑治疗后,免疫功能正常的野生型C57BL/6荷瘤小鼠的肿瘤消退;而荷瘤C57BL/6裸鼠的肿瘤仍继续生长。结论:单一剂量的美法仑对荷淋巴瘤EL4小鼠具有明显的治疗作用,其作用的发挥需要T淋巴细胞的参与,可能与T细胞的杀伤作用有关。     

鹿茸多肽对胎鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究

目的：探讨鹿茸多肽(Velvet antler polypeptides-VAP)对胎鼠脑神经干细胞(Neural stem cell-NSC)体外分化的影响。方法：从E12—14天的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量NSC后，加入不同剂量的鹿茸多肽刺激NSC分化，以含有10％小牛血清DMEM／F12培养基组为对照组，实验组为加有5μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L、100μg／L、200μg／L、     

瘤型麻风动物模型的NK细胞活性的体外测定

本文报道了瘤型麻风小鼠模型中脾脏NK细胞活性的体外测定,以及加入外源性IL-2对这一活性的影响。结果表明,随着感染时间的延长,小鼠脾脏中NK细胞活性逐渐降低。感染1月小鼠的NK细胞活性明显低于正常小鼠,感染3月小鼠的NK细胞活性较感染1月小鼠更低(P值均<0.01)。将含有IL-2的上清液加入NK细胞活性检测系统中,发现外源性IL-2可逆转感染小鼠的NK细胞活性,使其恢复达正常水平。结合IL-2与NK细胞活性在免疫调节中的作用,对瘤型麻风动物模型的特殊表现作了讨论。     

恶性疟原虫113肽抗原基因重组的减毒鼠伤寒沙门菌在家兔中免疫应答的研究

我们已经在减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合１１３肽基因ＡＢ（ＧＺ－ＡＢ）。活菌以２×１０９ＣＦＵ经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ测定抗体水平，结果于首次免疫或加强免疫后都可检测到一定水平的特异性抗体。所免疫的家免可以诱发针对恶性疟原虫抗原及ＧＺ－ＡＢ的迟发性超敏反应（ＤＴＨ）。我们的研究表明，含有多个恶性疟原虫抗原表位的人工合成基因可以在减毒鼠伤寒沙门菌中表达，活菌可诱发家兔产生特异的体液免疫及细胞免疫，为恶性疟口服活菌苗的制备打下基础。     

毫米波辐射对植入前小鼠胚胎及早期胚胎的影响

本文报道小鼠受精卵体外及在体受毫米波辐照后一些改变。毫米波源为36.11GHz固态微波连续发生器,波长8mm,功率密度为10mW/cm~2、8mW/cm~2、4mW/cm~2及2mW/cm~2。结果发现2-4mW/cm~2毫米波辐照即可使体外培养之受精卵细胞表面微绒毛减少、脱落,细胞表面形成许多囊泡。透射电镜下可见细胞间隙扩大、胞浆中线粒体膨胀、空化,用FITC-ConA试验可见细胞表面结合荧光减少。酶试验证明辐照后卵胚细胞表面AKP,ATPase,5′-Nase均有降低。在体受精卵细胞经辐射后证明,辐射可使胎儿体重增长减慢,囊胚形成数量下降,植入率降低,而表面酶下降不明显。     

骨髓间充质干细胞移植后在mdx鼠体内的分布研究

目的： 研究骨髓间质干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)后体内各主要器官的分布状况。方法: 取第5代SD大鼠骨髓间质干细胞，应用［3H］－TdR标记后以2×107cells／只细胞尾静脉移植到经7Gy γ射线预处理后的7-9周龄mdx鼠体内，分别于移植后24 h、48 h、4周、8周和16周测定血液、肺、肝、骨髓、骨骼肌及心肌的放射性分布计数。结果: 经7Gy γ射线放疗预处理的mdx鼠，在尾静脉移植骨髓干细胞后，24 h肺的放射性分布计数最高，为36.70±3.04；48 h肝的放射性分布计数最高，为36.74±3.28；骨髓分布计数随移植时间延长增多，2周时达到高峰，计数为38.43±4.99，以后逐渐下降，但4月时仍明显高于其它组织器官，计数为13.45±1.37；骨骼肌、心肌的放射性分布计数随移植时间延长明显增高，16周时分别达到4.79±0.94和9.55±1.53。结论: 在MSCs移植后早期，MSCs主要分布于肺、肝等血流丰富的器官，随移植时间延长逐渐归巢到骨髓定居，2周时达到高峰，此后逐渐向损伤器官如骨骼肌、心肌等定向迁移，并且随时间延长分布增加，从而为MSCs定居于肌组织并且分化为肌细胞提供了证据。     

神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血性脑病的作用研究

目的 探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）对新生大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）及其后的癫痫发作是否具有保护和预防作用以及可能作用机理，为临床应用GM1治疗HIE提供理论依据。方法 建立新生大鼠HIE模型。用组织化学方法和免疫组织化学方法观察缺氧缺血后脑损害的形态学改变，兴奋性氨基酸Glu阳性（Glu-IR)神经元和抑制性氨基酸GABA阳性（GABA-IR）神经元表达和GM1对上述变化的影响。结果 盐水处理组与GM1治疗组相比病变较重，Glu-IR神经元和GABA-IR神经元数目减少与GMI治疗组差异有显著性意义。结论 GM1能够在一定程度上减轻新生大鼠缺氧拭岂血后病损灶，保护Glu-IR神经元和GABA-IR神经元，尤其是对GABA-IR神经元的保护作用，提示GM1对新生大鼠缺氧缺血后的癫痫发作具有一定的预防作用。但尚需进一步探讨研究。     

表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）的DNA疫苗，观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA，将DNA疫苗pCDNA3．1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL／6小鼠体内，分离小鼠脾细胞，检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反应。以B16-PSMA细胞攻击免骺小鼠，观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况，评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性，经过免疫后的小鼠成瘤率降低，无瘤生存期延长，肿瘤生长缓慢，肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润，表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应，对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用，为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。