近交系胎鼠中脑多巴胺能神经元体外定向分化的初步研究

目的体外培养近交系大鼠胚胎腹侧中脑前体细胞(VMP)并诱导其分化为多巴胺能神经元(DN),为研究DN定向分化的分子机制提供细胞模型。方法取材胎龄11d的近交系大鼠胚胎VMP,体外用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)增殖培养7d后换用L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)诱导分化为DN,随后进行免疫荧光染色鉴定。结果细胞总数扩增49.76倍,免疫荧光染色显示β-TubulinⅢ阳性的神经元中(71.33±20.42)%为TH阳性的DN,后者占细胞总数的(24.85±12.85)%。结论近交系大鼠VMP经体外原代培养能够得到较高比例的DN,可作为深入研究DN定向分化分子机制的细胞模型。     

HLA-G突变分子对NK细胞抑制作用的研究

目的探索可溶性HLAG1分子结构对功能的影响,为其临床应用打下基础。方法通过分子克隆技术,去掉HLAG1重链分子α1功能区氨基端24肽,然后与轻链蛋白在体外与九肽共折叠复性形成复合物,并检测复合物对NK细胞杀伤活性的影响。结果成功构建突变的HLAG1重链分子的原核表达载体,表达的重链蛋白与轻链蛋白形成复合物,经Westernblot鉴定可与HLAⅠ类分子的单抗W6/32结合,并且可明显抑制NK细胞对K562细胞的细胞毒作用。结论α1功能区氨基端缺失24肽的HLAG1分子,可抑制NK细胞的细胞毒作用。     

中国人HNPCC家系的临床特征及M3胆碱能受体基因(A)8区突变检测

目的:分析中国人遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC)家系的临床特征并检测这些家系中M3胆碱能受体基因(A)8区的突变情况.方法:根据2003年4月杭州会议制定的中国人HNPCC家系标准收集HNPCC家系共15个,分析其临床特征;提取先证者的外周血基因组DNA,PCR扩增M3胆碱能受体基因第8外显子中一段长153 bp,包含有微卫星位点(A)8的基因片段,直接进行DNA测序.结果:15个家系共有恶性肿瘤患者55例,其中大肠癌患者41例,平均每个家系发生大肠癌2.73例,73%的大肠癌患者发病年龄<50岁,51%的病灶位于近端结肠,40%发生在直肠肛门,同时和异时多原发大肠癌总发生率为12%,2/3的家系属于Lynch Ⅱ型,共发生肠外恶性肿瘤14例(18个),其中胃癌最常见.15例先证者外周血中无1例检测到M3胆碱能受体基因(A)8区的突变.结论:M3胆碱能受体基因与中国人群中HPNCC的发病可能无密切关系.中国人HNPCC家系标准应在临床工作中推广应用,并进一步验证其合理性和科学性.     

人胚细胞提取物拮抗环磷酰胺诱发小鼠骨髓微核的研究

目前，抗癌、抗突变剂的研究日益增多，其中一些化合物本身具有致突变作用，应用于人体可能有不同程度的副反应．因此．寻找有效而副反应小的抗突变成份．对肿瘤与遗传病的防治有重要意义．     

油页岩及其矿渣的致突变研究

采用Ames试验、E Coli大肠杆菌突变试验和动物骨髓细胞微核试验对油页岩及其矿渣提取物进行了致突变性鉴定。结果表明油页岩及其矿渣提取物在微核试验中呈阳性反应,而在细菌回变试验中呈阴性反应。     

HIV的耐药性突变可发生在病毒载量较低时

瑞典学者Sonnerborg博士等人指出 ,传递抗逆转录病毒药物耐药性的突变 ,即使在接受联合治疗的HIV感染者体内病毒血症水平极低的情况下也可能发生。他们解释说 ,目前仍然存在如何治疗出现起始病毒学反应后 ,发展为低水平病毒血症患者的问题 ,而对低病毒载量条件下耐药性的识别 ,则能够影响此类患者的治疗选择。为此 ,他们以 1 4名对首个或随后的抗逆转录病毒治疗方案产生病毒学反应后 ,体内病毒血症水平持续较低或病毒载量增长缓慢的患者为研究对象 ,调查了药物诱导性突变的发生情况。结果显示 ,1 4名患者中 ,有 8人出现了逆转录酶 (RT)和…     

β-淀粉样前体蛋白第二、三外显子删除突变抑制β-淀粉样蛋白分泌

目的 :观察 β 淀粉样前体蛋白第二、三外显子编码结构域对培养的人神经纤维母细胞瘤细胞系 (SH SY5Y)生长代谢和 β淀粉样蛋白 (Aβ)分泌的影响。 方法 :利用重组DNA技术 ,构建 pcDNA3.1APP695和删除第二、三外显子的pcDNA3.1ΔAPP695质粒 ,用脂质体转染法将其转入SH SY5Y细胞系 ,用 0 .6 g·L-1G4 18筛选获得稳定表达外源基因的细胞系 ,采用MTT法分析对细胞增殖的影响 ,用免疫沉淀Westernblot分析细胞培养液中Aβ的含量。结果 :成功构建了APP695cDNA和删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA的真核表达载体 ,转染SH SY5Y细胞系后 ,Westernblot证实外源基因得到表达 ,MTT分析结果显示删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA未对细胞产生明显的抑制增殖作用 ,免疫沉淀Westernblot分析表明 ,与转染全长APP695cDNA细胞相比 ,转染ΔAPP695cDNA细胞Aβ分泌显著减少。 结论 :APP695第二、三外显子编码结构域删除后抑制了Aβ的生成 ,对探讨Aβ分子前体水解加工生成Aβ的关系有重要意义     

5—溴脱氧尿嘧啶核苷标记法检测哺乳动物体细胞染色体异常分离的研究

通过分析５一溴脱氧尿嘧啶核苷（５－ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ）掺入后的第２周期细胞染色体，同步评估了受试化合物秋水仙素（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，ＣＯＬ）及昆明山海棠水抽提物（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｕｉｍｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ（Ｌｅｕｌ）Ｈｕｔｃｈ，ＴＨＨ）在小鼠骨髓细胞中的有丝分裂阻滞、染色体异常分离及姐妹染色单体互换（ｓｉｓｔｅｒｃｈｒｏｍａｔｉｄｅｘｃｈａｎｇｅ，ＳＣＥ）诱发效应。ＣＯＬ及ＴＨＨ均具有不同程度的有丝分裂阻滞效应，且显著诱发非整倍体（２ｎ＝４１－４３）及多倍体的产生。ＴＨＨ尚显著诱发小鼠骨髓细胞ＳＣＥ。结果提示：ＴＨＨ具有与ＣＯＬ类似的哺乳动物体细胞非整倍体／多倍体诱发效应；此外，ＴＨＨ尚含有某些基因毒性成分．实验还证实，ＢｒｄＵ标记法检检测哺乳动物体细胞染色体异常分离是可行的。     

大鼠垂体细胞的无血清原代培养

近年来,大量采用体外细胞培养技术研究垂体细胞分泌功能。原代培养垂体细胞通常采用添加血清或组织抽提物的培养液,血清通过提供营养物、激素、载体蛋白和各种生长调节因子促进细胞新陈代谢,尤其对垂体细胞的发育和分化、受体的诱导及表达、激素或神经递质的产生均具有重要作用.但血清成分复杂,其中存在的未知因子可能使实验结果混乱。本实验采用无血清原代培养大鼠垂体前叶和中/后叶细胞,细胞收获量大,形态完整,分泌功能正常。     

信号核素134Cs诱发体细胞和生殖细胞畸变效应比较研究

对１３４Ｃｓ诱发体细胞和生殖细胞的畸变效应进行了比较研究。方法观察内污染不同放射性活度１３４Ｃｓ时诱发同体骨髓细胞和精原细胞染色体畸变的量效关系，以及同一放射性活度１３４Ｃｓ作用不同时间诱发上述两种细胞的染色体畸变产额。结果研究发现，１３４Ｃｓ内照射诱发的骨髓细胞染色体畸变产额显著高于精原细胞，而其诱发的染色体畸变类型均以染色单体型畸变为主。结论由不同放射性活度１３４Ｃｓ所诱发的染色体畸变产额而言，骨髓细胞要比精原细胞高出１．５～５倍。