亚砷酸钠暴露14周诱导肝癌细胞LM3氧化损伤及恶性迁移的研究

目的·探究不同剂量的亚砷酸钠暴露对人肝癌细胞株LM3细胞的影响,分析亚砷酸钠促进肝癌细胞恶性迁移的分子机制。方法·建立细胞亚砷酸钠染毒模型,分别用含0、1、10μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基连续培养LM3细胞14周。暴露结束后,从细胞培养基中去除亚砷酸盐,用不含亚砷酸钠的培养基培养细胞1周使其恢复。以同一批次传代未经过亚砷酸钠处理的细胞作为对照组。分别用CCK-8增殖实验、Transwell迁移实验、DCFH-DA活性氧荧光探针实验验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞增殖、迁移和氧化应激的影响;用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞相关基因的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果·相比对照组,1μmol/L和10μmol/L亚砷酸钠染毒能显著增强LM3细胞内的活性氧水平（均P<0.05）,并促进LM3细胞的恶性迁移（均P<0.05）,且该作用呈剂量依赖性,但亚砷酸钠对LM3细胞的增殖并无显著影响。亚砷酸钠染毒可以上调血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸...     

亚硒酸钠对亚砷酸钠所致的小鼠精子畸形的影响

本文研究了亚硒酸钠与亚砷酸钠对小鼠精子畸形的影响.亚砷酸钠组引起的精子畸形率明显高于对照组.亚硒酸钠抑制了亚砷酸钠导致的精子畸形的增多.     

亚砷酸钠诱发人外周血淋巴细胞染色体断裂位点研究

在体外培养的人外周血淋巴细胞中加入亚砷酸钠,能使染色体断裂频率显著上升。染色体断裂位点与原癌基因和肿瘤染色体异常位点在同一区带的占72.9％,其中断裂频率较高的位点是:lp32,lq25,lq31,lq42,2p23,2q31,3p14,9q22,19p13,19q13。表明在砷致癌过程中,染色体的变化起着重要作用。     

硒多糖、亚砷酸钠对大鼠肝微粒体酶和GSH-Px等的影响

研究了硒多糖、亚砷酸钠在体内、外对大鼠肝微粒体酶细胞色素Ｐ－４５０、ｂ５、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－细胞色素Ｃ还原酶、谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）的影响;并通过测定硒多糖、亚砷酸钠对肝谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和脂质过氧化（ＬＰＯ）的影响,探讨了硒、砷相互作用的机理。结果表明：连续７天腹腔注射０．２ｍｇ／ｋｇ硒多糖,细胞色素Ｐ－４５０、ｂ５的含量、ＧＳＴ的活性降低（Ｐ＜０．０５）;硒多糖明显诱导ＧＳＨ－Ｐｘ的活性,降低脂质过氧化,拮抗亚砷酸钠对ＬＰＯ的作用。亚砷酸钠显著增强肝细胞脂质过氧化（Ｐ＜０．０５）,对ＧＳＨ－Ｐｘ和肝微粒体酶无明显影响     

亚砷酸钠致小鼠乳腺癌作用机制研究

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)对小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG)的影响,为砷致乳腺癌机制提供理论依据.方法 以小鼠乳腺上皮细胞为模型,研究亚砷酸钠对乳腺上皮细胞形态的影响;经流式细胞仪检测亚砷酸钠对小鼠乳腺上皮细胞凋亡的影响;实时定量RT-PCR检测细胞周期基因P21 mRNAs表达水平.结果 NaAsO2对NMuMG具有毒性效应,在一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,细胞形态明显改变,凋亡明显增多,且呈剂量-效应关系;细胞增殖的抑制基因P21 mRNA水平增高了18.12倍.结论 亚砷酸钠可能通过上调P21基因的表达来抑制NMuMG增殖,可能是砷中毒引起乳腺癌的发生机制之一.     

亚砷酸钠对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA的表达及VEGF、CyclinD1、PR蛋白含量的影响北大核心CSCD

目的采取不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO_2)灌胃染毒,针对其对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA(雌激素受体mRNA)的表达及VEGF(血管内皮生长因子)、Cyclin D_1(细胞周期蛋白D_1)和PR(孕激素受体)蛋白含量的影响,探讨其对生殖毒性的可能机制。方法 SD大鼠40只,随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,经灌胃,分别给予其双蒸水,1.25、2.5和5 mg/kg·d的NaAsO_2,4周后,断颈处死,取血、左侧卵巢做以下检测:(1)Elisa法测定VEGF、Cyclin D_1和PR蛋白的含量;(2)实时荧光定量PCR检测卵巢组织中ERmRNA的表达。结果 Elisa结果显示,随着灌胃的NaAsO_2剂量增加,中和高剂量大鼠血清VEGF、Cyclin D_1和PR蛋白含量分别为(13.54±1.98)ng/L、(12.44±2.06)ng/L、(1.089±0.133)μg/L、(1.040±0.136)μg/L、(324.27±19.77)ng/L和(320.46±18.01)ng/L呈下降趋势,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,大鼠卵巢ER mRNA基因的表达降低,且低、中和高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论染毒NaAsO_24周后可引起SD雌性大鼠卵巢与子宫结构改变,在性成熟前期染毒NaAsO_2,可能通过下调卵巢ER mRNA基因,使得ER下游的VEGF、Cyclin D1蛋白以及PR蛋白生成减少,最终导致卵泡发育异常,产生生殖毒性。     

低砷染毒致小鼠肝脏氧化损伤的影响

目的动态观察低剂量砷染毒小鼠致肝脏脂质过氧化情况。方法96只健康雄性KM小鼠随机分组,设0、50、500和5000μg/L4个组,再将每个剂量组分4、6和8周3个染毒时间点,经饮水染毒,测定肝脏和血液中总砷含量、肝组织脂质过氧化和抗氧化水平。结果血砷、肝脏砷含量随着染毒时间和染毒剂量的增加而逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05)。在肝组织中,丙二醛(MDA)含量均随染毒时间和染毒剂量的增加而增高,差异有统计学意义(P<0.05);过氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性则是均随着染毒时间和染毒剂量的增加出现先增高后降低的现象,其增高差异均有统计学意义(P<0.05)。GSH-Px活性降低与对照组之间,差异有统计学意义(P<0.05),而SOD活性降低与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论在本试验条件下,低砷可以诱导小鼠肝脏抗氧化损伤系统出现适应性的增高,但随着剂量和作用时间增加最终会造成小鼠的氧化损伤。     

亚砷酸钠对上皮细胞向间充质细胞转变过程的影响

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对上皮细胞向间质细胞的转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程的影响。方法①EMT模型的建立:培养小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG),当细胞大约融合50%时,换成3%血清的培养基,24h后加入5ng/ml TGF-β,作用24 h后,观察NMuMG形态,细胞染色检测E-ca、Vimentin表达、实时定量RT-PCR检测E-ca,Vimentin mRNAs表达水平,是否成功的由上皮细胞转变成间质细胞。②加入NaAsO2:以5 ng/ml TGF-β作为阴性对照组,观察组5ng/ml TGF-β+5μmol/ml NaAsO2、5ng/ml TGF-β+10μmol/ml NaAsO2,再次检测上述指标。结果①成功建立EMT模型:细胞形态由立方形的上皮细胞转变成长梭形间质细胞;细胞染色显示,与未诱导组相比,E-ca表达呈阴性,Vim-entin表达明显呈阳性;E-ca基因表达水平显著下降,Vimentin基因表达水平显著上调。②NaAsO2对EMT过程的影响:一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,明显增强了Vimentin表达;...     

无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的诱导作用

[目的]观察亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达的诱导作用。[方法]以5μmol／L和10μmol／L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况。[结果]5μmol／L和10μmol／LNaAs02暴露2h开始出现HO-1mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组（P〈0．01）。其中,10μmol／LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组（P〈0．01）;但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高。NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组（均P〈0．01）;5μmol／L和10μmol／L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2．80、9．34、18．15和3．97、12．92、23．29倍;此外,10μmol/LNaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol／L组（P〈0．01）。[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应。