亚砷酸钠对角质形成细胞的氧化损伤作用

目的　探讨亚砷酸钠 (NaAsO2 )对体外培养的人皮肤角质形成细胞株 (HaCaT)的氧化损伤作用。方法　用Alamarblue还原法检测细胞增殖力 ,以Alamarblue还原率表示细胞增殖力 ;用 2′7′-二乙酰二氯荧光素 (DCFH DA)测定细胞内活性氧群 (ROS)水平 ;用彗星实验检测DNA损伤 ;用紫外速率直接法测定细胞内过氧化氢酶 (CAT)的活性。结果　NaAsO2 作用于HaCaT细胞 2 4h后 ,0. 0 0 1～ 1μmol/L组的AlamarBlue还原率显著高于对照组 ,而10 μmol/L以上组AlamarBlue还原率下降 (P <0 . 0 5 ) ;2 5 μmol/L的NaAsO2 即可使二氯荧光素 (DCF)的荧光强度增加 ;5 μmol/L的NaAsO2 可引起单个细胞的彗星尾长显著高于对照组 ;2 5 μmol/L的NaAsO2 即可引起CAT活性明显降低 (P <0 . 0 5 ) ,且呈剂量 -反应关系。结论　低浓度NaAsO2 可刺激细胞增殖而高浓度的NaAsO2 抑制细胞增殖 ,NaAsO2 可引起HaCaT细胞内ROS增多 ,引起细胞DNA损伤和CAT活性降低。     

香烟烟气溶液和砷联合作用对淋巴细胞的影响

目的研究香烟烟气溶液和亚砷酸钠联合作用对大鼠淋巴细胞活力和氧化应激反应的影响,并探讨两者之间是否存在交互作用。方法香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用于大鼠淋巴细胞,用AlamarBlue还原法定量评价细胞活力变化,用细胞内还原型谷胱甘肽含量和丙二醛含量评价细胞内的氧化应激反应,并利用2×3析因设计研究两者的交互作用。结果染毒各组的AlamarBlue还原率以及细胞内还原型谷胱甘肽含量显著降低,细胞内丙二醛含量显著升高。析因设计分析结果表明,香烟烟气溶液和亚砷酸钠对AlamarBlue还原率的影响不存在交互作用,而对细胞内还原型谷胱甘肽含量和细胞内丙二醛含量的影响存在交互作用。结论在本研究中香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用均能够降低大鼠淋巴细胞活力,增强细胞内的氧化应激反应,且两者对细胞内的氧化应激反应的影响存在交互作用。     

亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12损伤的作用机制

目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对小鼠肝细胞AML12损伤作用的机制.方法 取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,设置6个NaAsO2浓度[0(对照)、10、15、20、25及30μmol/L]组,分别用相应浓度的NaAsO2处理AML12细胞24 h;采用化学比色法和油红O染色法检测各组AML12细胞内丙二醛(MDA)和脂质含量水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测各组小鼠AML12细胞内法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)mRNA和FXR、SHP、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达.结果 与对照组相比,10～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内MDA含量升高、但FXR和SHP mRNA及FXR蛋白相对表达量下降(P<0.05),15～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内脂滴含量增加(P<0.05),20～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内SHP蛋白相对表达量降低(P<0.05),25～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内BAX蛋白相对表达量增高(P<0.05).结论 NaAsO2可致小鼠肝细胞AML12损伤,其机制可能与FXR-SHP信号通路的失调有关.     

构树叶总黄酮对表皮细胞防护作用研究

目的 研究构树叶提取物构树总黄酮(total flzvonoids of broussonetia papyrifera,TFBP)对铅、砷染毒的人永生化表皮细胞氧化损伤的防护效果。方法 在人永生化表皮细胞培养的基础上,在0．1mmol／L的醋酸铅、5．0μmol／L的亚砷酸钠的染毒体系中,分别加入0～200mg／L TFBP,测定细胞裂解液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力,评价TFBP的抗氧化效果。结果 0．1mmol／L的醋酸铅对细胞染毒产生氧化损伤,而添加高于100mg／L TFBP后,MDA含量由4．23nmol／mg Pro降低到1．87nmol／mg Pro,SOD活力由25．90 U／mg Pro增加到37．12U／mg Pro,但GSH-Px的活力变化不大。砷 TFBP 150mg／L、200mg／L组与砷染毒组相比,GSH-Px和SOD活力差异有显著性。结论 该试验条件下,TFBP对铅、砷染毒的人永生化表皮细胞氧化损伤有防护效果。     

p66~(Shc)对亚砷酸钠诱导心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨p66~(Shc)在亚砷酸钠介导的心肌细胞氧化应激中的作用。方法利用亚砷酸钠诱导的H9C2心肌细胞氧化应激模型,分别用CCK-8比色法检测细胞活力;双氯荧光素探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western Blot法检测p66~(Shc)、磷酸化p66~(Shc)的表达变化;免疫荧光共聚焦检测p66~(Shc)的亚细胞定位。结果与对照组相比,5μM亚砷酸钠处理组细胞活力显著降低(P0.05),细胞内ROS水平显著升高(P0.001);砷引起了p66~(Shc)表达量增加,而且磷酸化p66~(Shc)与p66~(Shc)蛋白总量的比值也显著升高(P0.05),p66~(Shc)在砷刺激下从细胞浆向线粒体转位。过表达野生型p66~(Shc)质粒增加砷介导的心肌细胞内ROS水平,而过表达突变型p66~(Shc)质粒和敲低p66~(Shc)的表达都降低砷处理组细胞内ROS水平。结论研究显示亚砷酸钠可能通过上调p66~(Shc)的表达和磷酸化水平诱导心肌细胞ROS水平的升高。     

亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响

目的：探讨亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响。方法：使用原代培养的人真皮成纤维细胞和表皮细胞，采用直接细胞计数法和MTT法检测亚砷酸钠对两种细胞系生长的影响。结果：成纤维细胞较表皮细胞易于培养；MTT法检测，不同剂量的亚砷酸钠与对照组比较，吸光度值均有提高，有剂量－效应关系（P＜0.01)；0.5-8.0μmol/L的亚砷酸钠对成纤维细胞有明显增殖作用；低浓度（0.8μmol/L、1.6μmol/L)对表皮细胞有明显的增殖作用，浓度高于3.2μmol/L时，表皮细胞生长受抑制；10.00μmol/L亚砷酸钠对成纤维细胞有毒性作用。结论：无机砷诱导人皮肤细胞的增殖作用可能是引起慢性砷中毒皮肤损伤的重要原因，具体作用机制有待进一步研究。     

不同价态砷染毒对大鼠丙酮酸激酶活力的影响

目的 探讨不同价态及剂量砷染毒对大鼠血清丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK)的影响,为阐明砷毒作用机制提供依据.方法 Wistar大鼠70只,采用喂饲法染毒,暴露于不同价态无机砷.动物随机分成7组,每组10只,雌雄各半:即正常对照组(C);亚砷酸钠低 (AL)、中 (AM)、高 (AH) 剂量组;砷酸钠低 (BL)、中 (BM)、高 (BH) 剂量组.大鼠饲养至第3个月末,用颈椎脱臼法处死.应用酶联免疫分析法(ELISA)测定大鼠在不同价态及剂量砷染毒后血清PK活性变化.结果 血清PK活性在亚砷酸钠和砷酸钠高剂量组中的比较差异有统计学意义(P<0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠中剂量组与低剂量组比较时差异均无统计学意义(P均>0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠与对照组比较时差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 不同价态高剂量无机砷染毒,可导致PK活性降低,并且机制不完全相同.PK活性的改变可能是影响砷代谢及其毒作用的重要环节,低剂量染砷未见PK活性的改变.     

亚砷酸钠预处理对鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的：观察亚砷酸钠（ＳＡ）预处理对大鼠常温下肝脏缺血－再灌注损伤的保护作用。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析ＳＡ预处理诱导大鼠肝脏合成热休克蛋白（ＨＳＰ）,复制大鼠肝脏缺血－再灌注模型,ＳＡ组缺血前１８小时以６ｍｇ／ｋｇ静注ＳＡ,动态观察血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、乳本脱氢酶（ＬＤＨ）、肝组织ＡＴＰ及能荷（ＥＣ）、血浆内皮素（ＥＴ）和肝组织学变化及生存率。结果：ＳＡ预处理可诱导大鼠肝脏合成ＨＳＰ     

亚砷酸钠染毒对大鼠皮肤及其他脏器损伤的实验研究

目的研究不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对大鼠皮肤和脏器的毒性损伤。方法将40只SPF级SD大鼠按性别和体重随机分成对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别自由饮用蒸馏水、12.5、25和50 mg/L的NaAsO2水溶液,连续染毒90 d后取材,采用火焰原子吸收法测定大鼠皮肤和心、肝、脑、肾主要脏器中的砷含量,HE染色后光镜下观察大鼠皮肤表皮结构及心、肝、肾、脑脏器的组织学变化。结果与对照组比较,砷染毒组大鼠均有不同程度的体重减轻、脏器系数升高、体内各组织中砷蓄积量增高的亚慢性砷中毒表现,差异有统计学意义(P0.05);不同剂量的NaAsO2染毒组大鼠皮肤及心、肝、脑、肾组织出现不同程度的病理损伤。结论 NaAsO2对大鼠皮肤及心、肝、脑、肾各脏器存在明显的损伤作用。     

亚砷酸钠对L-02肝细胞氧化应激及PSMB5、SOD1表达的影响

目的 观察不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对L - 02肝细胞氧化应激及20S蛋白酶体β5亚基（20S proteasome β5 subunit,PSMB5）、超氧化物歧化酶1（superoxide dismutase 1,SOD1）mRNA和蛋白表达的影响。方法 用不同剂量的NaAs02分别处理L - O2肝细胞24 h,用比色法检测氧化应激指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ,SOD）、SOD1 、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase,GSH - Px)活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;实时荧光定量PCR 法及蛋白免疫印迹法分别检测PSMB5、SOD1的mRNA及蛋白表达情况。结果 （1）与对照组比较,随着砷染毒剂量的增加,细胞内的SOD活力逐渐降低,SOD1、GSH - Px活力、MDA含量均先上升后下降（P＜0.05）。（2）与对照组比较,各染砷组PSMB5 和SOD1 mRNA水平均逐渐上升（P＜0.05或P＜0.01）。（3）与对照组比较,各染砷组PSMB5蛋白表达均降低（P＜0.01）;而10、20 μmol／L NaAsO2组SOD1蛋白表达逐渐上升,40 μmol／LNaAsO2组SOD1蛋白表达降低（P＜0.05）。结论 NaAs02可能通过影响PSMB5的转录后表达使其蛋白表达降低,同时可降低SOD1蛋白表达及其酶活力导致氧化应激而损伤机体。