X线修复交叉互补基因1缺陷细胞株的建立及其蛋白的表达

目的 运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人X线修复交叉互补基因1(XRCC1)在支气管上皮细胞中的表达,为研究人XRCC1蛋白在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备.方法 利用分子克隆技术构建含pU6启动子的XRCC1 RNA干扰特异性绿色荧光蛋白C1载体重组子"pEGFP-C1-U6-dsRNA";以脂质体法将载体重组子转染人支气管上皮细胞,同时以空白细胞和空载体转染细胞作对照;在经G418筛选后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果,以蛋白印迹法分析转染后细胞中的XRCC1蛋白表达情况.结果 在转染重组子的细胞中,XRCC1蛋白的表达明显下调,仅相当于正常细胞的38.2%.结论 人支气管上皮细胞人X线修复交叉互补基因1的靶向抑制成功.     

粉尘螨2类变应原基因的克隆和序列分析

目的:克隆中国大陆地区粉尘螨2类变应原(Derf2)的cDNA。方法:挑取活的粉尘螨经-70℃冷冻后提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Derf2基因,克隆至pMD18-TSimple平滑载体中测序。结果:筛选出2株长度为436bp的Derf2cDNA片段,核苷酸序列1株与Genbank上的Derf2序列(D10448)碱基有6处不同,同源性为98.6%;另1株有2处不同,同源性为99.7%。结论:粉尘螨2类变应原的基因序列具有多态性,中国大陆地区Derf2的cDNA克隆片段与Genbank上公布的Derf2序列高度同源。     

家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选

目的 建立简便可靠的非同位紊杂交筛选方法,筛选家族性急性髓系白血病cDNA消减文库中的差异表达基因.方法 用地高辛(DIG)标记消减文库cDNA作为探针,通过差异筛选技术进行差异表达片段的筛选,杂交阳性结果经RT-PCR再度验证.结果 DIG标记探针浓度为250～500 pg/μL,效率为48%～96%,并且杂交信号清晰,重现性好.应用DIG标记探针改良的差异筛选技术所得到的阳性结果经RT-PCR验证符合率达到86%.结论 采用DIG标记探针具有高度的灵敏度和良好的特异性,可避免放射性污染,简化实验操作,可作为替代同位素32P-dCTP标记探针的方法.     

辅助问题方法求解隐互补问题

目的研究用辅助问题方法求解隐互利、问题。方法首先介绍推广的单调性的概念以及文中要用到的一些经典结论。结果利用辅助问题准则提出一种迭代算法求解隐互补问题，并证明隐互补问题与推广的变分不等式的等价性及该算法的全局收敛性。结论推广了经典互补问题的相应的结论。     

范可尼贫血蛋白与急性髓系白血病

范可尼贫血(FA)是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,表现为进行性骨髓衰竭、先天性骨骼畸形和易患癌症等.FA患者细胞染色体自发不稳定,并对DNA交联剂如丝裂霉素C(MMC)高度敏感.因FA常发展成急性髓系白血病(AML),被认为是白血病前状态.目前已发现11种FA基因,通过共同的机制在维持细胞基因组稳定性中发挥作用.FANCF蛋白作为一种灵活的衔接蛋自在FA蛋白复合物正确组装形成过程中发挥着重要作用,它的形成使FANCD2蛋白单一泛素化,泛素化FANCD2蛋白导向染色质与乳腺癌抑制蛋白(BRCA1)相瓦作用,修复DNA损伤.FA基因缺陷将导致基因组不稳、染色体断裂的发生率增高,经过遗传损伤的积累最终导致AML及骨髓增生异常综合征(MDS)的发生.     

变应性鼻炎基因芯片检测及其基因表达谱的研究

目的 运用基因芯片技术研究变应性鼻炎的基因表达谱。方法 对变应性鼻炎和非变应性鼻炎鼻黏膜组织进行总RNA抽提，纯化后的mRNA进行逆转录制备杂交探针，应用含有12800个人类全长互补DNA（complementary DNA,cDNA)的表达谱芯片对8例变应性鼻炎与非变应性鼻炎鼻黏膜组织进行差异表达谱分析。结果 在变应性鼻炎的基因表达谱中差异表达基因共有734条，上调的基因430条，下调的基因304条，共存性差异表达基因有21条，其中上调基因15条，下调基因6条，在差异表达的基因中，其中有些是炎性反应、免疫应答、免疫调控、神经内分泌网络系统及信号传导的相关基因，这些基因可能与变应性鼻炎发病机制有关。结论 运用基因芯片技术研究变应性鼻炎相关基因，可能为鼻变态反应性疾病的病因和发病机理的研究提供新思路。     

维甲类化合物构效关系研究维甲酸核受体与选择性配体相互作用的分子模拟

目的：研究维甲酸核受体蛋白α,β和γ 3种亚型的氨基酸序列差异性,确定可能与抑制剂选择性结合有关的氨基酸残基,揭示维甲酸类药物的毒副作用和与其结合多种受体亚型的关系,设计、开发受体选择性的维甲类分子。方法和结果：基于已解析的γ受体亚型的晶体结构,利用分子图形学和计算化学方法预测了未知的α,β亚型的三维结构;通过3种维甲酸核受体分别与其泛激动剂、选择性激动剂及无结合活性的维甲酸分子之间的分子对接研究,定性解析了抑制剂立体结构上的微小差异导致不同受体产生选择性的本质原因。结论：有选择性受体结合活性的维甲类化合物是进行低毒作用的新型维甲类药物研究和开发的基础。     

维甲类化合物构效关系研究维甲酸核受体与选择性配体相互作用的分子模拟

目的：研究维甲酸核受体蛋白α,β和γ３种亚型的氨基酸序列差异性,确定可能与抑制剂选择性结合有关的氨基酸残基,揭示维甲酸类药物的毒副作用和与其结合多种受体亚型的关系,设计、开发受体选择性的维甲类分子。方法和结果：基于已解析的γ受体亚型的晶体结构,利用分子图形学和计算化学方法预测了未知的α,β亚型的三维结构;通过３种维甲酸核受体分别与其泛激动剂、选择性激动剂及无结合活性的维甲酸分子之间的分子对接研究,定性解析了抑制剂立体结构上的微小差异导致不同受体产生选择性的本质原因。结论：有选择性受体结合活性的维甲类化合物是进行低毒作用的新型维甲类药物研究和开发的基础。     

豆腐的营养搭配

豆腐+肉肉类含丰富的蛋氨酸,如将豆腐加肉类一同烹饪,即可获得营养互补的作用。豆腐+菠菜传统认为,豆腐与菠菜不宜同食。其实,将豆腐与菠菜同食,菠菜中的钾和镁,能促进人体对豆腐中钙的吸收。菠菜草酸太多,能形成草酸钙沉淀,妨碍人体对钙的吸收,因此菠菜应先焯一下,去掉部分草酸。豆腐和菠菜的比例以1:1为好。豆腐+鸡蛋鸡蛋中蛋氨酸含量特别丰富,可弥补     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移，为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法 采用免疫扫描谱型分析技术，分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况，对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果 5例正常献血员PBMC TCR BV CDR3谱型均呈高斯分布，5例活动型SLE患者24TCR BV CDR3家族均出现不同的优势表达。对单／寡克隆性增生T细胞B链CDR3区基因进行测序，证实存在不同的CDR3序列。结论 SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移，提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关。特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定，将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。