三氧化二砷抑制人肝癌细胞P27kip1 187位苏氨酸磷酸化

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制与P27kipl第187位苏氨酸(P27Thr187)磷酸化的关系.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,2 μmol/L As2O3处理72 h,细胞计数法检测SMMC-7721生长,流式细胞仪检测细胞周期,核质分离、Western Blot及细胞免疫荧光技术检测P27、Thr187磷酸化的P27(p-P27T187)在SMMC-7721细胞中的表达及亚细胞定位.结果 2 ttmoVL As2O3明显抑制SMMC-7721的增殖,细胞周期阻滞在G2/M期.As2O3作用后P27蛋白总量增加,p-P27T187蛋白总量减少,并伴有Cdk2及cyclinE表达下降,同时P27发生从胞质向胞核的易位,p-P27T187核内表达减少.结论 As2O3可抑制P27T187的磷酸化,诱导P27在SMMCa721细胞核中的积聚.     

三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞分泌细胞因子的影响与意义

为了探讨细胞因子在三氧化二砷诱发APL细胞白细胞升高的作用 ,首先按照FAB细胞形态学和细胞遗传学标准选择APL患者。常规Ficoll密度梯度法分离骨髓和PBMC ,体外培养 1h去除贴壁细胞。体外IL 1β、IL 6、IL 8、TNF α和G CSF分泌水平采用ELISA方法进行测定 ,NBT还原实验用以检测APL细胞分化状态。直接细胞计数法和MTT法观察细胞增殖变化。研究结果证实体外 10 6M或体内以 10mg/d三氧化二砷治疗 96h后 ,APL细胞分泌IL 1β和G CSF平均水平升高 (P <0 0 5 ) ,IL 6和IL 8水平降低 (P <0 0 5 ) ,TNF α水平无明显变化 (P >0 0 5 )。进一步分析结果表明 ,体外APL细胞的增值比率与IL 1β或G CSF分泌升高比率呈现正相关 ,检测到IL 1β或G CSF患者的细胞数量增加比率高于未检测到IL 1β或G CSF组 ,说明IL 1β或G CSF分泌增加在三氧化二砷诱导后的APL细胞增殖中起着一定作用     

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响

目的:本文旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响及其作用机制。方法:将20周龄MRL/lpr狼疮鼠和正常C57BL/6J小鼠随机分组,分别接受ATO(0.4mg·kg~(-1)·d~(-1))和同体积生理盐水(NS)治疗2个月,分离脾脏淋巴细胞,然后用实时荧光定量PCR法检测T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的mRNA水平及T-bet/GATA3 mRNA的比值,Western blot法检测T-bet和GATA3的蛋白表达,ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的浓度。结果:(1)MRL/lpr狼疮鼠NS组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、Tbet/GATA3 mRNA比值均高于C57BL/6J小鼠NS组(P0.05),而GATA3、IL-4的mRNA及其蛋白表达均低于C57BL/6J小鼠NS组(P0.05);(2)在MRL/lpr狼疮鼠中,与NS组相比,ATO组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、T-bet/GATA3 mRNA比值均下降(P0.05),而2组中GATA3、IL-4的mRNA及蛋白表达无明显差异;(3)在C57BL/6J小鼠中,NS组和ATO组之间以上指标均无显著性差异。结论:ATO可能通过影响MRL/lpr狼疮鼠Tbet/GATA3信号通路,降低T-bet表达,从而减少Th1型细胞因子IFN-γ的表达和分泌。     

三氧化二砷和尿多酸肽抗肝癌作用的协同效应

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)和尿多酸肽诱导肝癌细胞凋亡的协同效应。方法：不同浓度的As2O3和尿多酸肽处理肝癌细胞株（BEL－7402，Hep G2)，用四唑蓝比色法检测细胞存活率；活细胞荧光染色观测细胞亡及形态学变化，流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率，并将不同剂量用于肝癌荷癌裸鼠，观察两药对荷癌鼠的作用，结果：As2O3诱导肝癌细胞凋亡的敏感剂量是5．0umol/L，而与尿多酸肽共同应用的凋亡敏感剂量是1．0umol/L As2O3 1.0g/L尿多酸肽。联合用药的实体型癌鼠皮下肿瘤生长的抑瘤率40．44％，较单用三氧化二砷的抑瘤率31．32％提高了近30％。结论：尿多酸肽可增加As2O3诱导肝癌细胞的凋亡效应，两药具有协同作用。     

三氧化二砷纳米微粒对抑制兔血管平滑肌细胞增殖作用的实验研究

目的 了解纳米微粒与普通剂型的三氧化二砷（As2O3）对抑制体外培养的兔血管平滑肌细胞（VSMC）增殖作用的差别。方法 对照组为不加药物的细胞，实验组为3μmol／L纳米微粒和普通剂型的As2O3，干预体外培养的兔VSMC细胞72h，进行四唑氮盐（MTT）染色测定细胞吸光度（A）值。用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，提取细胞DNA，进行凝胶电泳分析，将3组的结果进行比较。结果 3μmol／L纳米剂型的As2O3，干预细胞，细胞数量随作用时间的延长逐渐减少，细胞生长明显受抑制，而普通剂型干预细胞，生长受抑制程度较纳米剂型弱。24h时，对照组、3μmol／L普通剂型组与纳米组，A值分别为0．68±0．10、0．58±0．12、0．33±0．12，48h时分别为0．79±0．11、0．48±0．14、0．28±0．11，72h时分别为0．96±0．13、0．34±0．15、0．20士0．06，差异均有统计学意义（Ⅳ值分别为10．934、15．039、15．539，P值均〈0．01）。流式细胞仪检测，纳米剂型As2O3、普通剂型As2O3干预及对照组的细胞干预48h，细胞增殖率分别为44．97％、58．54％、74．02％，早期凋亡率分别为16．89％、11．27％、11．20％，晚期凋亡率分别为26．56％、23．60％、12．46％，坏死细胞分别为11．58％、6．59％、2．32％。DNA电泳，As2O3干预细胞，可见凋亡梯形条带，部分细胞坏死，呈模糊的无间隔片状条带。纳米剂型药物作用的细胞DNA条带，梯形条带更多、更模糊。结论 As2O3，可以抑制体外培养的VSMC增殖，且纳米剂型As2O3较普通剂型的As2O3，对细胞抑制作用更强。     

三氧化二砷诱导血管内皮细胞凋亡和抑制血管生成的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)抑制血管内皮细胞(HUVECs)生长、诱导凋亡和抑制血管生成的作用。方法：As2O3与HUVECs共同孵育一定时间后，观察细胞形态学变化，并用MTT方法测定细胞生长曲线图、TUNEL方法检测细胞凋亡；观测As2O3对鸡胚血管生成的影响。结果：在0．75μmol／L～6μmol／L浓度范围内随药物浓度增加或作用时间延长，细胞生长抑制和细胞凋亡效果越显著；As2O3作用鸡胚绒毛尿囊膜后血管生成减少。结论：As2O3抑制HUVECs生长、诱导细胞凋亡，对血管生成有抑制作用。     

三氧化二砷诱导血管内皮细胞凋亡和抑制血管生成的实验研究

 目的研究三氧化三砷(As2O3)抑制人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)生长、诱导凋亡和抑制血管生成的作用.方法As2O3与HUVECs共同孵育一定时间后,观察细胞形态学变化,并用MTT方法测定细胞生长抑制率、TUNEL方法检测细胞凋亡;观测As2O3对鸡胚血管生成的影响.结果在0.75～6 μmol/L浓度范围内随药物浓度增加或作用时间延长,细胞生长抑制和细胞凋亡效果越显著;As2O3作用鸡胚绒毛尿囊膜后血管生成减少.结论As2O3抑制HUVECs生长、诱导细胞凋亡,对血管生成有抑制作用.     

三氧化二砷抑制骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的影响。方法　应用噻唑蓝 (MTT)法和集落形成能力测定、形态学观察、流式细胞术和电镜观察等方法检测和观察As2 O3 对骨肉瘤细胞株MG 63及二倍体细胞株MRC 5增殖的影响。结果　As2 O3 对骨肉瘤细胞及二倍体细胞株的增殖有抑制作用 ,并具有时间依赖性和一定范围内的剂量依赖性。≥ 1μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63骨肉瘤细胞的抑制率达 70 % ,而≥ 8μmol/L浓度的As2 O3 对MRC 5细胞的增殖才达到相近的抑制率 ;0 .5～ 2 .0 μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63细胞的生长抑制率高 ,而对MRC 5细胞的生长抑制率低 ,表现为明显的选择性抑制 ( P <0 .0 1)。 1μmol/LAs2 O3 处理的MG 63细胞第 3天呈典型的凋亡形态学改变 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期细胞前出现明显亚二倍体峰 ,凋亡率与As2 O3 处理时间呈正相关 ;MRC 5细胞则未见明显凋亡峰。结论　As2 O3 通过诱导细胞凋亡抑制骨肉瘤细胞和二倍体细胞增殖 ,在一定浓度内As2 O3 可选择性抑制骨肉瘤细胞的生长增殖。     

免疫荧光法检测全反式维甲酸和As2O3对人口腔鳞状细胞癌KB细胞的诱导分化作用

目的 研究细胞角蛋白(cytokeratin,CK)13在口腔鳞状细胞癌中表达的变化规律,探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与三氧化二砷(As2O3)在诱导分化人口腔未分化鳞状细胞癌细胞系KB细胞中的作用.方法 采用免疫荧光标记CK-13单克隆抗体及KB细胞细胞核,检测CK-13在ATBA与As2O3诱导分化KB细胞前后的表达变化.将同期培养的KB细胞分为对照组(细胞培养液)、ATRA实验组及As2O3实验组.培养72 h后分别观察3个视野下对照组与实验组KB细胞中CK-13在细胞质中的表达情况,并统计胞质着色率.结果 免疫荧光检测法发现对照组的KB细胞中CK-13绿色荧光染色胞质着色率为(1.00±0.58)%;ATRA实验组的3个浓度组中CK-13绿色荧光染色胞质着色率分别为(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%、(98.96±1.04)%,而As2O3实验组的3个浓度组结果 分别为(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%、(88.64±11.36)%.对照组与实验组CK-13绿色荧光染色胞质着色率的统计数据对比差异均有统计学意义(P＜0.05),各实验组之间相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ATRA与As2O3对KB细胞均存在诱导分化作用,CK-13定位着色于细胞质,其表达变化与肿瘤细胞分化程度呈正相关,可作为评估ATBA和As2O3对OSCC诱导分化疗效的分子标志物.     

三氧化二砷体外抑制A375黑色素瘤细胞的生长及谷胱甘肽过氧化物酶的活力

目的:了解三氧化二砷(As2O3)对体外培养的A375黑色素瘤细胞的生长及谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测1.5,3.0,6.0,12.0,24.0μmol/LAs2O3与A375黑色素瘤细胞作用24,48,72h后对瘤细胞的抑制作用;测定共培养24h的A375黑色素瘤细胞所含的谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:各浓度As2O3对A375瘤细胞的生长均有明显的抑制作用,As2O3的浓度越高,增殖抑制作用越强;各浓度As2O3与A375黑色素瘤细胞作用24h后,瘤细胞的谷胱甘肽过氧化物酶活力均有明显的降低,分别为2.23±0.81,2.87±0.70,4.08±0.81,2.63±0.84,1.40±0.41mU/mL,在As2O3浓度为6.0μmol/L时,酶活性最高,低于此浓度或高于此浓度时,酶活力呈递减的趋势。经过统计学独立样本的t检验分析,差别有统计学意义。结论:As2O3对A375瘤细胞的生长有浓度依赖性抑制作用,AsO显著降低A375瘤细胞谷胱甘肽过氧化物酶活力。