大鼠谷氨酰胺酶反义真核表达载体的构建及鉴定

目的 :构建大鼠谷氨酰胺酶 (GA)反义真核表达载体。　方法 :采用分子克隆技术将rGAcDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA 3.0中。　结果 :EcoRⅠ和HinDⅢ双酶切后 ,反义重组基因为 0 .2 8kb和 5 .4kb两条带 ,与理论计算相符。　结论 :成功构建了大鼠GA反义真核表达载体 ,为肿瘤细胞的GA反义基因治疗研究创造条件     

Current status and future prospects of human gene therapy

Gene therapy is defined as the treatment of diseases by the transfer of genes into patients. Clinical trials of gene therapy became feasible as a result of the development of retroviral mediated gene transfer techniques. The first trial was begun in September 1990 at the National Institutes of Health when a four year old girl was treated for adenosine deaminase deficiency. Currently, more than 500 patients are being treated by this innovative therapeutic strategy. In the present review article, the basic concepts and present status of human gene therapy are summarized.     

A defective HIV-1 vector for gene transfer to human lymphocytes

Conclusions All practical development of HIV-1 vectors for in vivo testing will require high titers of recombinant virus free of helper virus. To date, an HIV-based vector system with an efficiency of gene transfer comparable to that achieved by the Mo-MuLV-based system has not yet been developed. Such development will require a better definition of the optimal placement of viral cis-acting sequences within the HIV-1 vector. The establishment of stable packaging cell lines should increase the efficiency of production of recombinant HIV-1 viruses for future use. T-lymphocytes are, in fact, an important potential target for therapeutic gene transfer. The possible advantages of such vectors over currently available retroviral vectors suggest that the continued study of HIV-1 vectors for gene transfer to human T-lymphocytes is warranted.Abbreviations HIV Human immunodeficiency virus - LTR Long terminal repeat     

结核杆菌cfp10真核载体的构建、表达与基因免疫

目的: 构建以结核分枝杆菌H37Rv cfp10基因为基础的基因疫苗. 方法: 采用BamH I和Xba I双酶切质粒pGEM-Teasy-CFP10中,10 g*L-1琼脂糖凝胶电泳回收约300 bp大小片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1的相应酶切位点. 阳性克隆提取质粒,体外电穿孔转化CHO细胞,RT-PCR法检测cfp10特异的mRNA的表达. 质粒肌注免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中相应抗体的滴度. 结果: 用BamH I和XbaⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体pcDNA3.1,命名为pcCFP10; pcCFP10转化的CHO细胞RNA提取物中,RT-PCR扩增出300 bp大小的条带. 肌注免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中相应抗体平均滴度为1∶ 4,000. 结论: 以CFP10的编码基因为基础的真核表达质粒的构建成功.     

不同表达载体对人白细胞介素-18原核表达效率的影响

目的 探讨PBV220及PJW2载体构建的rhIL—18重组质粒的IL—18表达效率。方法 将构建的PBV220／rhIL—18重组质粒中的rhIL—18酶切、克隆到表达载体PJW2中，经PCR产物电泳及测序鉴定，热诱导后在大肠杆菌中表达。结果 PJW2／rhIL—18表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的20％，而PBV220／IL—18重组质粒表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的16％。两者表达的蛋白质分子量约为18KD，与预期分子量相符。结论 PJW2载体rhIL—18表达效率高于PBV220，为下一步的纯化及提高蛋白产量打下了基础。     

A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达

目的 在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白。方法采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因，克隆于植物表达载体paBI221，再双酶切pBI221，将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11，通过三亲杂交方法，制备农杆菌转化载体pSB111-VP4，并对pSB111-VP4作点杂交检测，筛选鉴定重组子，对马铃薯组织细胞进行转化。结果转化细胞经Western印迹检测其免疫活性，具有良好的抗原性。结论为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备。     

基于支持向量机的化工过程故障诊断

引入了基于统计学习理论的支持向量机技术，以连续搅拌釜式反应器——CSTR模型为例，研究了非线性化工复杂反应过程的故障诊断问题。实验结果表明，支持向量机方法与传统故障诊断方法相比，具有更好的精度、速度以及适应性。     

凋亡抑素启动子介导肿瘤特异性TRAIL在宫颈癌Hela细胞中的表达

目的:探讨凋亡抑素(survivin,SVV)启动子调控的TRAIL肿瘤细胞内特异表达在宫颈癌治疗中的应用意义。方法:提取人外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR方法,用带有IL-2信号肽基因序列的引物扩增TRAIL基因,克隆入真核表达载体pGL-Basic/surp中SVV启动子的下游,构建肿瘤特异性分泌表达TRAIL基因的真核表达载体pGL-Basic/surp/TRAIL。转染宫颈癌Hela细胞及正常人肝细胞(7702),RT-PCR鉴定转染细胞中的TRAIL表达。结果:RT-PCR扩增得到了613bp的cDNA片断,pGL-Basic/surp/TRAIL经酶切及测序鉴定与GenBank中报道的IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致;转染细胞RT-PCR鉴定结果显示,Hela细胞中可扩增出600bp基因片段,而7702细胞中未见该特异性扩增条带。结论:重组真核表达载体pGL-Basic/surp/TRAIL能够高效、特异性地表达于Hela细胞中,其成功构建为特异性肿瘤基因治疗提供了可行的理想工具。     

绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究

目的　绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞(MSCs)及其表达情况。方法　pEGFP与逆转录病毒载体经过酶切、连接等构建重组的EGFP 逆转录病毒载体 ,转染PA3 17细胞 ,用G418筛选出抗性克隆 ,获病毒上清 (滴度达到 8.5× 10 5cfu/ml)并感染人MSCs。流式细胞仪测定转染效率后加入成骨细胞分化培养夜 (地塞米松 (10 -7mol/L)、β 甘油磷酸钠 (10mmol/L)、维生素C(5 0mg/L ) ) ,2周后观察转染细胞的分化情况。 结果　 48h后细胞转染效率为 7% ,G418筛选 2周后约 97%细胞出现抗性克隆 ,表达维持 4周。基因转染细胞能够分化为成骨细胞。结论　重组EGFP逆转录病毒载体能转染MSCs ,且不影响细胞的功能。     

上海地区登革热媒介的现状及滋生习性调查

目的：掌握上海地区登革热媒介的现状及登革热发生的危险程度，了解媒介蚊虫(白纹伊蚊)的滋生习性与分布，为制定防制方案提供依据。方法：4-11月每月在长宁、闸北、卢湾、嘉定、闵行5个区的居民、单位内外的不同环境和容器中采集伊蚊幼虫，检查伊蚊幼虫滋生阳性率，采用人诱法监测伊蚊成虫的叮咬频率。结果：在上海地区尚未发现埃及伊蚊存在，登革热的媒介为白纹伊蚊；该蚊幼虫出现期为4-11月，数量高峰为6—9月；6—9月间白纹伊蚊幼虫的房屋指数为8．90％，容器指数8．59％，布雷图指数12．19％，幼虫密度指数为2．16；成虫的叮刺指数8．3只/30min，监测值达到WHO三级；其媒介数量能达到引起登革热流行的程度；白纹伊蚊幼虫滋生广泛，但以轮胎、缸罐、花盆、竹节等小容器为主；城乡间、不同房屋结构的住区间、不同单位间的白纹伊蚊幼虫阳性率差异有显著性(P＜0．01)。结论：上海地区登革热媒介蚊种为白纹伊蚊，其媒介数量已处于危险程度，一旦传染源进入，不可避免地会引起登革热的发生与流行，应密切关注。必须加强对媒介种群数量动态和媒介能量的监测工作，及时制定有效的预防措施。