p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究外源性 p27kip1 基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC 1细胞,Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性 p27kip1 蛋白在细胞内的表达,观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响。结果:体外转染 GRC 1 细胞 48 h 后, p27 蛋白在p27kip1转染后的 GRC 1 细胞中高表达。FCM检测表明,细胞停滞于 G1 期,实验组 G1 期细胞占66 9%,并出现亚G1 凋亡峰;而空白对照组和转染空载体组 G1 期细胞分别为 32 2% 和33 8%。MTT 法检测表明,转染 p27cDNA 后,实验组细胞增殖明显受抑。结论: p27kip1 基因在体外转染GRC 1细胞并过表达p27kip1蛋白,抑制细胞由G1 期向 S期过渡,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体

目的制备高包封率的盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体。方法处方前研究测定了药物在不同pH值缓冲液中的溶解度和表观油水分配系数;采用pH梯度进行主动载药。超滤法分离脂质体与游离药物,测定包封率,考察了外水相pH值、孵育温度、药脂比对包封率的影响。结果随pH值的增大,盐酸去氢骆驼蓬碱的溶解度降低,表观油水分配系数增大;采用主动载药法,包封率随脂质体内外相pH梯度的减少而降低,受孵育温度的影响不大,在药脂比小于1∶5时脂质体包封率达到80%以上。结论主动载药法可制得包封率较高的去氢骆驼蓬碱脂质体。     

自杀基因质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.TK在鼻咽癌细胞中的构建及转染研究

目的 构建含TK自杀基因的质粒表达载体并进行转染研究。方法 根据已发表的Hsv-TK基因的核苷酸序列，设计并合成一对引物，以含TK基因的PGEM/TK质粒为模板扩增出TK基因全长CDS序列，将其克隆到质粒表达载体pcDNA3．1(-)CMV中，进行序列分析和酶切鉴定后，运用电穿孔法将重组体pCDNA3．1(-)CMV-CD车专人鼻咽癌CNE-2细胞中，观察其表达情况以及无毒前体药物GCV干预下对CNE-2细胞生长的抑制作用。结果 酶切和序列分析证明pcDNA3．1(-)(2MV．TK含完整的TK基因序列，RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出预期片段；鼻咽癌CNE-2细胞在无毒前体药物GCV干预下，其生长受到抑制。结论 成功构建了质粒载体pcDNA3．1(-)CMVTK，可以将其作为鼻咽癌自杀基因治疗的一种载体。     

Vascular Endothelial Growth Factor165-regulated Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Invasion and Migration Involve Expression and Activation of Matrix Metalloproteinase-2

The effect of vascular endothelial growth factor （VEGF） overexpression on matrix metalloproteinase-2 （MMP-2） in nasopharyngeal carcinoma （NPC） cells in vitro and the possible mechanism involved were investigated, and the correlation between the expression of VEGF and MMP-2 in NPC evaluated. The NPC cells were transfected with PAd-trackVEGF165 plasmid. The expression levels of VEGF and MMP-2 mRNA and protein in NPC cells were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot respectively. It was found that the expression of VEGF and MMP-2 mRNA and protein was significantly increased in NPC cells after transfection of VEGF 165. It was concluded that the expression of VEGF was correlated to the in vitro invasion of NPC cells, and the induction of MMP-2 by VEGF was a key process of NPC cell invasion.     

产权改革对广东省医院运行状况影响研究

收集与医院退出市场行为相关的数据，研究在营利性、非营利性及国有和私有产权共存的医疗产业中，医院退出医疗市场行为与其运营效率的关系。应用医院的相对无效率残差、产权形式和其他相关因素来分析1999年至2003年广东省医院的退出行为。在方法上，将医院因为承担非营利性工作所导致的无效率从决定医院退出行为的运营效率中分离出来考虑。结果发现，相对无效率对营利性医院退出医疗市场的行为影响很大．而相对无效率对国有非营利性医院在医疗市场中存在无明显影响。产权改革既不是提高医院运营效率的必要条件也不是充分条件：医院运营效率的影响是多方面的，政策性负担是重要的影响因素。     

TIMP-2逆转录病毒载体的构建及表达

目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）编码序列基因逆转录病毒表达载体，转染人单核细胞白血病细胞株，为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础。方法根据基因库中已公布的序列设计引物，用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段，用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中。采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中，以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1，G418筛选，极限稀释法挑选单克隆细胞株，定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达。结果TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中，经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确，病毒上清感染SHI-1细胞，经G418筛选并挑选出单克隆细胞，经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调。结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞，可对其生物学行为作进一步研究。     

不同转染方法及GFP表达载体对小鼠胚胎干细胞转染效率的比较

目的对比不同的转染方法及绿色荧光蛋白(GFP)表达载体对小鼠胚胎干细胞(ESC)的转染效率,为进一步研究ESC及衍生细胞移植示踪提供工具。方法用阳离子脂质体转染小鼠胚胎干细胞系ES-D3,对比贴壁细胞转染法、悬浮细胞转染法及不同载体pCX-EGFP、p-EGFP-C1和pIRES-hrGFP的转染效率。结果悬浮法和贴壁法转染效率分别为(90.0±4.1)%,(70.0±2.3)%,两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。3种载体转染效率分别为pCX-EG-FP(90.0±4.1)%,pIRES-hrGFP(32.0±6.0)%,p-EGFP-C1(4.0±0.4)%。3组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结论悬浮转染法转染pCX-EGFP可获得较高的转染效率。     

在用医疗设备的安全质量管理

本文阐述了如何对在用医疗设备加强监督管理,从而保障设备的安全性、可靠性及充分发挥其利用率。     

优势专科建设的效应

通过本院优势专科第一周期建设中取得的绩效,重点阐述了科研、人才培养、社会效应和经济效应等几个方面,充分体现了优势专科建设的必要性和优越性,明确了今后的目标和任务,重视优势专科建设,促进医院医疗水平再上新台阶.