正常肺组织大分割照射全肺平均耐受剂量与生物学效应研究

目的 建立正常组织分次照射基于肺纤维化影像学改变的全肺平均剂量-效应模型,定量分析分割照射相比单次照射的生物学效应及耐受剂量关系。方法 采用8~10周龄C57BL6雌性小鼠按随机数表法分组进行X射线全肺野照射,分别给予梯度剂量0、2.0 Gy×5次、4.0 Gy×5次、6.0 Gy×5次、7.0 Gy×5次、8.5 Gy×5次。照射后24周行CT扫描成像,CT图像三维重建后经三维分割算法获得肺部平均密度与肺部体积值,并分别据此进行Boltzmann模型放射生物学建模。结果 照射后24周CT图像三维重建冠状位图像提示剂量依赖的肺部影像学改变。同一时间点肺组织全基因组芯片与组织病理学研究均提示与影像学改变高度吻合。经放射生物学建模,分次照射诱导肺密度改变的全肺平均剂量（D_mean）中位剂量为（30.80±0.80）Gy（校正R²=0.97）;引起肺体积减小的中位剂量为（31.31±7.07）Gy（校正R²=0.92）。基于影像学参数的剂量-效应曲线提示,肺组织对分次照射的耐受性相比单次照射显著提高。结论 纤维化进展过程中,肺密度与肺体积改变对X射线的依赖性不仅取决于总剂量大小,也与分割次数、分次剂量存在一定关联。     

肾阳虚大鼠肾组织中microRNA差异性表达与信号通路分析

目的:采用基因芯片检测腺嘌呤造模诱导肾阳虚证大鼠肾组织中显著差异表达的小分子核糖核酸(miRNA),并用生物信息学方法分析其意义。方法:模型组大鼠灌胃150 mg·kg-1腺嘌呤诱导肾阳虚肾损伤模型,正常组灌服等量生理盐水。麻醉处死后取部分肾组织病理切片做苏木素-伊红(HE)染色并检测血液中血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr)的含量,尿液中24 h尿蛋白(24U-TP)含量; trizol法提取肾脏组织中RNA,RNA经检测质量合格后用于后续芯片分析。μParaflo微流体芯片分析肾组织中差异表达的miRNA;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步验证芯片结果;利用生物信息学网站分析差异表达miRNA的靶基因及其功能。结果:基因芯片结果显示造模后共有50个miRNA差异表达,与正常组比较,模型组只有9个miRNA在肾组织中高表达且具有显著性差异,其中,与正常组比较,模型组中rno-miR-21-5p,rno-let-7i-5p,rno-miR-146b-5p和rno-miR-15b-5p表达明显升高(P0.05,P0.01); rno-miR-6215,rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p和rno-miR-194-5p表达明显降低(P0.05)。经PCR验证表明,与正常组比较,rno-miR-21-5p,rno-miR-146b-5p表达显著上升(P0.01); rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p,rno-miR-194-5p表达显著下降(P0.01)。其中,miR-192,miR-21,miR-378与上皮细胞-间充质转化/间充质-上皮细胞转化(EMT/MET)平衡相关,miR-192和miR-378可作为抗纤维化因子保护肾脏,而miR-21可作为促纤维化因子诱导肾脏损伤。miR-194可通过靶向调控脑Ras同源蛋白(Rheb)拮抗缺氧再灌注诱导的人肾近端肾小管上皮细胞HK-2损伤。这些差异miRNA的靶基因主要富集在Wnt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上。这两条信号通路与EMT/MET平衡密切相关。结论:通过基因芯片表达谱,发现4个参与肾间质纤维化(RIF)作用调节和2个未知功能miRNA表达。为进一步深入分析肾阳虚的调控网络提供了一个新的线索。     

活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响

目的探讨活性维生素D3[1,25(OH)2D3]在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响。方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组(90只)和纤维化后干预组(60只),纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ(n=30),纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ(n=20)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水。给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3,模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇),对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水。各种处理均为两天1次。纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材,纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠。用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col)ⅠmRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化。结果博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ,而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少。给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加(P0.05)。在纤维化发生干预组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(P0.05),但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低,但差异无显著性(P0.05)。结论活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用,其预防效果更好一些,并且能促进miR-29a的表达,活性维生素D3可能是通过促进miR-29a的表达来抑制肺纤维化的发生发展。     

Reduced skeletal muscle satellite cell number alters muscle morphology after chronic stretch but allows limited serial sarcomere addition

Introduction: Muscles add sarcomeres in response to stretch, presumably to maintain optimal sarcomere length. Clinical evidence from patients with cerebral palsy, who have both decreased serial sarcomere number and reduced satellite cells (SCs), suggests a hypothesis that SCs may be involved in sarcomere addition. Methods: A transgenic Pax7‐DTA mouse model underwent conditional SC depletion, and their soleii were then stretch‐immobilized to assess the capacity for sarcomere addition. Muscle architecture, morphology, and extracellular matrix (ECM) changes were also evaluated. Results: Mice in the SC‐reduced group achieved normal serial sarcomere addition in response to stretch. However, muscle fiber cross‐sectional area was significantly smaller and was associated with hypertrophic ECM changes, consistent with fibrosis. Conclusions: While a reduced SC population does not hinder serial sarcomere addition, SCs play a role in muscle adaptation to chronic stretch that involves maintenance of both fiber cross‐sectional area and ECM structure. Muscle Nerve 55 : 384–392, 2017     

补阳还五汤对肺纤维化中HMGB1-RAGE信号通路的调控作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤和异常修复的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end-product,RAGE)的表达,及补阳还五汤对HMGB1-RAGE信号通路的调控作用。方法:144只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,博莱霉素(BLM)模型组,补阳还五汤低、中、高剂量组(6.83,13.66,27.32 g·kg~(-1)),阳性药组(强的松,4.2 mg·kg~(-1)),动物实验采用博莱霉素气管注入法复制肺纤维化模型后,分别给予补阳还五汤高、中、低剂量和强的松灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本。采用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测肺组织中的HMGB1,RAGE mRNA的表达;采用蛋白质免疫印记法(Western blot)检测HMGB1,α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle action,α-SMA)的表达。细胞实验采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的人肺成纤维细胞(HFL1),采用Western blot法检测α-SMA蛋白的表达。结果:动物实验中,与正常组比较,模型组在第28天显著上调HMGB1 mRNA(P0.01),在第7天和第14天显著上调RAGE mRNA(P0.01),在各时间点显著上调HMGB1,α-SMA(P0.01);与BLM模型组比较,补阳还五汤高剂量组在第14天和第28天显著下调HMGB1 mRNA(P0.01),在第7天和第14天显著下调RAGE mRNA(P0.01),在各时间点显著下调HMGB1和α-SMA蛋白(P0.01)。细胞实验中,与空白组比较,20%空白血清预培养加HMGB1组显著升高α-SMA蛋白(P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,不同剂量的补阳还五汤含药血清显著下调细胞中α-SMA蛋白(P0.01)。结论:补阳还五汤可抑制HMGB1在大鼠肺组织中和人肺成纤维细胞中所引起的RAGE,α-SMA的表达增加。提示补阳还五汤可能通过阻断HMGB1/RAGE信号通路,减少肌成纤维细胞生成,对肺纤维化的发生发展起到防治作用。     

基于代谢组学的降脂中药的作用物质基础及作用机制研究探索*

高脂血症俗称"高血脂",是生命的"隐形杀手",对身体的损害是一个缓慢的、逐渐加重的隐匿过程.高脂血症是冠心病、脑中风等心脑血管疾病的危险因素,动脉粥样硬化(AS)为基础病变的脑梗死与血清胆固醇升高之间存在明确的相关性.且血脂高的患者常伴有高血压,糖尿病,高脂血症是中老年的常见病、多发病.     

声脉冲辐射力弹性成像评价儿童肝纤维化的临床应用

目的：探讨声脉冲辐射力弹性成像评价儿童肝纤维化程度的临床应用价值。 方法：采用声脉冲辐射力弹性成像技术对70例患有儿童常见肝病的患儿及50例健康志愿者分别进行弹性成像检测及血清学检测,血清学检查的主要指标为谷草转氨酶（AST）与血小板计数（PLT）之比（APRI）,将病例组弹性成像测值SWV值及血清学检测APRI比值分别与肝纤维化METAVIR分级进行相关性分析,并将SWV值与APRI比值进行比较,评价弹性成像SWV值在评价儿童肝纤维化的临床应用价值。 结果：SWV值与儿童肝纤维化程度成正相关（相关系数0.71,P＜0.05）,SWV值随着肝纤维化程度的加重而增加,各病理肝纤维化分级的肝脏平均SWV值分别为：F1 1.57±0.30 m/s,F2 1.89±0.32 m/s,F3 2.14±0.36 m/s,F4 2.59±0.22 m/s。APRI值与肝纤维化程度不相关（相关系数=-0.02,P＞0.05）。肝纤维化分级≥F1时,最大约登指数对应的的SWV值为1.73 m/s（se 54.30%,sp 100.00%）;肝纤维化分级≥F2时,最大约登指数对应的的SWV值为1.67 m/s（se 89.50%,sp 74.50%）;肝纤维化分级≥F3时,最大约登指数对应的的SWV值为1.83 m/s（se 84.60%,sp 83.30%）。受试者工作特征曲线下面积(AUROC)分别为0.823,0.895,0.907。 结论：声脉冲辐射力弹性成像在无创评价儿童肝纤维化方面有较高的临床价值,尤其能更精准评价中重度肝纤维化程度,为儿童肝病的诊断、治疗及疾病随访提供重要影像学依据。     

养阴活血汤早期干预对大鼠肺间质纤维化的影响

目的 观察养阴活血汤对博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化疗效以及对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)mRNA表达的影响.方法 96只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、中药组和干扰素β1a(interferon-β1a,IFN-β1a)组.气管内注入博莱霉素A2建立大鼠肺间质纤维化模型.中药组自造模次日始,每只大鼠灌胃浓缩中药每天20 ml/kg,IFN-β1a组皮下注射重组人IFN-β1a 4.6μg/kg,每周3次.正常组和模型组等体积生理盐水灌胃.各组大鼠在实验周期第3天、第7天、第14天和第28天腹主动脉放血法处死,进行肺系数检测,HE和VG染色.原位杂交测定大鼠肺组织中TGF-β1和CTGF的mRNA表达情况.结果 养阴活血汤能明显降低肺系数,使肺组织的病理改变减轻,可以减弱大鼠肺组织和原代培养肺成纤维细胞中TGF-β1 mRNA和CTGF mRNA的表达强度.结论 养阴活血汤可以减少TGF-β1 mRNA和CTGF mRNA的表达量,减弱细胞因子对肺间质纤维化的促进作用,从而起到抑制肺间质纤维化的作用.     

先天性肝纤维化——附12例临床分析

目的分析先天性肝纤维化的临床特征。方法对12例先天性肝纤维化患者临床表现、实验室检查及病理组织学特点进行回顾性分析。结果12例患者均有明显临床症状,10例有典型门脉高压症状,11例就诊时肝功能异常,肝脏病理主要表现为：肝组织内呈现宽大致密且炎症不明显的胶原纤维间隔,或纤维束弥漫穿插于固有的肝小叶内,无典型的假小叶结构。结论对于不明原因肝功能异常的门脉高压症患者,应尽可能进行肝组织活检病理检查以协助诊断及指导治疗。     

Matrix metalloproteinase inhibitor, CTS-1027, attenuates liver injury and fibrosis in the bile duct-ligated mouse

Aim:  Excessive matrix metalloproteinase (MMP) activity has been implicated in the pathogenesis of acute and chronic liver injury. CTS-1027 is an MMP inhibitor, which has previously been studied in humans as an anti-arthritic agent. Thus, our aim was to assess if CTS-1027 is hepato-protective and anti-fibrogenic during cholestatic liver injury.
Methods:  C57/BL6 mice were subjected to bile duct ligation (BDL) for 14 days. Either CTS-1027 or vehicle was administered by gavage.
Results:  BDL mice treated with CTS-1027 demonstrated a threefold reduction in hepatocyte apoptosis as assessed by the TUNEL assay or immunohistochemistry for caspase 3/7-positive cells as compared to vehicle-treated BDL animals ( P  < 0.01). A 70% reduction in bile infarcts, a histological indicator of liver injury, was also observed in CTS-1027-treated BDL animals. These differences could not be ascribed to differences in cholestasis as serum total bilirubin concentrations were nearly identical in the BDL groups of animals. Markers for stellate cell activation (α-smooth muscle actin) and hepatic fibrogenesis (collagen 1) were reduced in CTS-1027 versus vehicle-treated BDL animals ( P  < 0.05). Overall animal survival following 14 days of BDL was also improved in the group receiving the active drug ( P  < 0.05).
Conclusion:  The BDL mouse, liver injury and hepatic fibrosis are attenuated by treatment with the MMP inhibitor CTS-1027. This drug warrants further evaluation as an anti-fibrogenic drug in hepatic injury.