不同采收期杜仲叶中3种黄酮成分动态变化研究

目的 建立杜仲叶中芦丁、槲皮素、山奈酚3种有效成分的高效液相色谱法测定方法;测定不同采收期杜仲中这3种黄酮成分的含量以便确定杜仲叶的最佳采收期.方法Sciehome C18色谱柱(150×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.5%H3PO4(50:50);流速为1.0 ml·min-1;检测波长270 nm柱温为25 ℃.结果3种黄酮类成分的加样回收率及RSD分别为:芦丁98.44%,1.20%;桷皮素100.81%,0.69%;山萘酚98.39%,1.00%.5月份采收的杜仲叶3种黄酮总含量最高.结论 我们建立的HPLC测定方法可行;杜仲叶以5月份采摘为宜.     

槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用

目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。     

槲皮素联合吡喹酮对小鼠日本血吸虫病心肌组织即早基因与转化生长因子β1表达的影响

目的 研究血吸虫肝硬化致心肌损害作用及其机制,探讨槲皮素对吡喹酮杀虫治疗后血吸虫肝纤维化进一步发展及其致心肌损伤的抑制作用及其机制.方法 80只小鼠随机分为4组.A、B、C 3组小鼠感染日本血吸虫尾蚴,D组小鼠为对照组.A、B、C 3组小鼠感染尾蚴8周后,A组小鼠以吡喹酮500 mg/kg治疗2 d;B组小鼠以吡喹酮500 mg/kg治疗2 d后继以槲皮素30 mg/kg治疗8周;C组小鼠不作任何治疗(模型组).D组小鼠正常饲养.第16周末处死小鼠,留取肝脏、心肌组织,应用HE染色法、透射电镜、RT-PCR及免疫组化染色法,观察各组小鼠肝脏、心肌组织病理及心肌组织超微结构改变,分析心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达变化.结果 模型组、吡喹酮组、吡喹酮+槲皮素联合治疗组小鼠均存在不同程度心肌损伤.吡喹酮治疗后肝纤维化及心肌损伤程度减轻,心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达均明显低于模型组,杀虫治疗后继以槲皮素治疗,可进一步减轻肝纤维化及心肌损伤程度,降低心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达,但其表达仍高于对照组.结论 晚期血吸虫病肝硬化可通过刺激心肌即早基因表达、促使TGF-β1过度产生而致心肌重塑.抗肝纤维化治疗可减轻心肌重塑程度.槲皮素可通过减轻肝纤维化程度、抑制心肌即早基因表达,降低心肌TGF-β1水平而发挥保护心肌作用.     

槲皮素对卵巢癌细胞HO-8910增殖的抑制作用及机制

目的观察槲皮素体外对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法将体外培养卵巢癌HO-8910细胞用0、10、20、40、80、160μmol／L的槲皮素处理。用MTF法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率,细胞免疫化学染色法检测细胞内Fas及HSP70的表达,分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-8的活性。结果浓度10～160μmol／L的槲皮素均能抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并有明显的时间和剂量依赖性（P〈0．05）。不同浓度的槲皮素作用48h后各组细胞凋亡率随槲皮素浓度增高,HSP70表达下调,FAS表达增强,Caspase-3、8活性上调,均呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论槲皮素能抑制卵巢癌细胞的增殖。其机制可能与槲皮素通过提高细胞内Fas的表达,降低HSP70的表达及诱导Caspase-3、8的活化及诱导卵巢癌细胞凋亡有关。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术结合体内实验验证,探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征（Tourette syndrome,TS）的作用机制。方法 通过检索TCMSP和BATMAN-TCM数据库获得归芍地黄汤加减方的活性成分及作用靶点,检索GeneCards和OMIM数据库获得TS疾病相关靶点,将二者靶点取交集,得到交集靶点。利用Cytoscape软件构建活性成分-靶点网络,并对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）及网络拓扑分析。利用R语言软件及相关程序包对交集靶点进行基因本体（geneontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,对网络拓扑分析后筛选出的关键靶点进行分子对接,并通过动物实验对关键靶点和信号通路进行验证。结果 筛选得到归芍地黄汤加减方治疗TS的活性成分8个,交集靶点32个。主要活性成分包括槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、异鼠李素,关键靶点包括白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-...     

基于“初生-次生代谢产物”互作途径的大果沙棘和中华沙棘差异性研究

目的 分析大果沙棘Hippophae rhamnoides vat. sp L.与中华沙棘H. rhamnoides初生/次生代谢物的差异,并对其生物合成途径变化进行分析。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法对2个种属的沙棘进行初生及次生代谢产物表征,基于二水平析因-星点设计法（plackett burman-central composite design,PB-CCD）设计对沙棘UPLC-DAD指纹图谱进行研究,优化液相方法,指认共有峰;以偏最小二乘-判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、聚类分析及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析对大果沙棘、中华沙棘进行差异初生代谢物筛选及相关代谢通路富集;进一步采用质谱多反应检测（multiple reaction monitoring,MRM）对筛选得到具有差异的初生代谢物和次生代谢物进行定量分析;最后,对2个品种沙棘的差异性成...     

金樱子HPLC多组分定量控制及化学计量学综合质量评价

目的 对不同产地金樱子进行综合质量评价,为其道地研究提供依据。方法 收集8省16批次金樱子样品,采用高效液相色谱法同时检测金樱子中蔷薇酸、委陵菜酸、熊果酸、没食子酸、儿茶素、橙皮苷、芦丁、槲皮素、木犀草素、山柰酚、芹菜素和鞣花酸含量,建立金樱子多组分定量控制模式;采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)和熵权优劣解距离法(EW-TOPSIS)建立金樱子质量优劣评价模型,对其整体质量进行综合评价。结果 12个成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率96.94%~100.05%,RSD为0.72%~1.56%;16批样品聚为3类;鞣花酸、儿茶素、槲皮素和没食子酸可能是影响金樱子产品质量主要潜在标志物;EW-TOPSIS结果显示16批金樱子相对贴近度(J_b)为0.146 2~0.756 2,不同产地的金樱子品质差异较大。结论 所建立的方法操作便捷,结果准确,可作为金樱子多组分定量控制方法;化学计量学及EW-TOPSIS法客观全面,可用于金樱子的整体质量评价。     

基于N-乙酰转移酶研究槲皮素对大鼠体内异烟肼代谢的影响

目的 基于N-乙酰转移酶(NAT)的表达及活性检测,研究槲皮素对大鼠体内异烟肼(INH)代谢及药动学特征影响.方法 雄性Wistar大鼠单独灌胃给予INH(60 mg/kg)或槲皮素(50 mg/kg)联合INH(60 mg/kg).分别于给药后不同时间收集血清,应用液质联用技术测定血清中INH及其代谢物乙酰异烟肼(A...     

Improving Lipophagy by Restoring Rab7 Cycle: Protective Effects of Quercetin on Ethanol-Induced Liver Steatosis

Chronic alcohol consumption retards lipophagy, which contributes to the pathogenesis of liver steatosis. Lipophagy-related Rab7 has been presumed as a crucial regulator in the progression of alcohol liver disease despite elusive mechanisms. More importantly, whether or not hepatoprotective quercetin targets Rab7-associated lipophagy disorder is unknown. Herein, alcoholic fatty liver induced by chronic-plus-single-binge ethanol feeding to male C57BL/6J mice was manifested by hampering autophagosomes formation with lipid droplets and fusion with lysosomes compared with the normal control, which was normalized partially by quercetin. The GST-RILP pulldown assay of Rab7 indicated an improved GTP-Rab7 as the quercetin treatment for ethanol-feeding mice. HepG2 cells transfected with CYP2E1 showed similar lipophagy dysfunction when exposed to ethanol, which was blocked when cells were transfected with siRNA-Rab7 in advance. Ethanol-induced steatosis and autophagic flux disruption were aggravated by the Rab7-specific inhibitor CID1067700 while alleviated by transfecting with the Rab7^Wt plasmid, which was visualized by immunofluorescence co-localization analysis and mCherry-GFP-LC3 transfection. Furthermore, TBC1D5, a Rab GTPase-activating protein for the subsequent normal circulation of Rab7, was downregulated after alcohol administration but regained by quercetin. Rab7 circulation retarded by ethanol and corrected by quercetin was further revealed by fluorescence recovery after photobleaching (FRAP). Altogether, quercetin attenuates hepatic steatosis by normalizing ethanol-imposed Rab7 turnover disorders and subsequent lipophagy disturbances, highlighting a novel mechanism and the promising prospect of quercetin-like phytochemicals against the crucial first hit from alcohol.     

高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素含量

目的建立测定金钱草颗粒中槲皮素含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS3 C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50),流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm,柱温为30℃。结果槲皮素质量浓度在10.4～104.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.92%,RSD=1.07%(n=6)。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于测定金钱草颗粒的含量。