凝血酶上调人肾小球系膜细胞PAI-1表达的细胞内信号转导研究

为探讨转录因子活化子蛋白１和相关的信号转导分子在凝血酶诱导人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物１表达中的作用,采用纤维蛋白平板法。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,凝胶电泳阻滞实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法,分别检测凝酶刺激培养的人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达情况,以及ＡＰ－１ ＤＮＡ连接活性和ＡＰ－１组成蛋白质ｃ－Ｊｕｎ,ｃ－Ｆｏｓ量的变化。     

Cys 618 Arg mutation in the RET proto-oncogene associated with familial medullary thyroid carcinoma and maternally transmitted Hirschsprung's disease suggesting a role for imprinting

The multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN2) syndromes and Hirschsprung's disease (HSCR) are inherited neurocristopathies characterized by medullary thyroid carcinoma (MTC), pheochromocytoma, parathyroid disease, and gastrointestinal neuromatosis. Mutations in the RET proto-oncogene are the underlying cause of the MEN2 syndromes and some cases of HSCR. In this report, we show that Cys 618 Arg mutation cosegregates with familial MTC and HSCR in two Moroccan Jewish families in which no involvement of pheochromocytoma or parathyroidism was observed. A single haplotype shared by chromosomes bearing the Cys 618 Arg mutation in both families strongly suggests a founder effect for this mutation. We have observed in our and in several other previously reported families, an excess of maternal over paternal mutated RET alleles in offsprings affected by HSCR. We suggest that parental imprinting may play a role in the ethiology of HSCR caused by mutations in the RET protooncogene. Hum Mutat 10:155–159, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

胃肠道间质瘤中C-kit原癌基因突变体的构建及功能研究

目的:构建含突变C-kit基因cDNA的真核表达质粒并行进一步的功能分析.方法:用RT-PCR方法从人胎脑组织克隆野生型C-kit基因蛋白编码区cDNA.根据胃肠道间质瘤中检测出的C-kit基因突变序列,体外突变野生型C-kit cDNA得到突变型C-kit cDNA,与pcDNA3重组成真核表达质粒,并用脂质体法稳定转染人胚胎肾细胞(human embryonic kidney cell,HEK)293细胞系,G418加压筛选出阳性克隆;用Western印迹法检测转染细胞KIT蛋白表达,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测转染HEK 细胞后细胞周期改变,并观察稳定转染突变型重组质粒人胚肾细胞在裸鼠内的成瘤性.分别设转染pcDNA3空白质粒和野生型的C-kit cDNA真核表达质粒的HEK细胞做为对照.结果:构建了突变型C-kit cDNA与pcDNA3的真核表达质粒; 功能检测分析表明:细胞生长曲线显示与对照组相比,实验组的生长速度明显增快;MTT比色显示,与对照组相比实验组细胞增殖活性显著增强;细胞周期检测结果显示,处于增殖期细胞(S G2-M)比例显著高于对照组;体内结果显示转染突变型C-kit基因的HEK细胞在裸鼠体内成瘤.结论:C-kit原癌基因突变体可促使人类细胞生长加快,增殖活性明显增强,并可以使更多的细胞由静止期进入增殖期, 并可使人胚胎肾细胞发生恶性转化,提示C-kit基因突变有可能是引起胃肠道间质瘤恶性转化的关键机制之一.     

冬虫夏草促进肾小管细胞增殖与c-myc原癌基因表达的联系

为阐明冬虫夏草刺激肾小管细胞增殖的分子机理,本研究应用斑点杂交技术观察了冬虫夏草对肾小管上皮细胞c-myc原癌基因mRNA表达的影响,结果发现冬虫夏草可诱导肾小管细胞c-myc原癌基因高表达,冬虫夏草可能通过这一机理促进肾小管上皮细胞增殖。     

碘缺乏病区硒与胎儿脑海马区原癌基因表达

目的　研究微量元素硒 (Se)与胎儿脑海马区神经元原癌基因c-fos蛋白表达之间的关系。方法　在陕西省缺碘 (I)低硒区 (宜君县 )缺碘高硒区 (紫阳县 )及对照区 (临潼县 )共采集 5 1例脐血进行微量元素Se、I的检测 ,并在以上 3地共解剖孕 2 0～ 37周的水囊引产胎儿胎脑 2 0例 ,通过免疫组化学法检测胎脑海马区神经元原癌基因c -fos蛋白产物的表达。结果　 3地I水平无显著性差异 ,Se水平有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,以紫阳为最高 ,宜君为最低 ;紫阳c-fos蛋白表达较强 ,与宜君相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　Se的水平可能影响胎脑海马区神经元c -fos蛋白的表达 ,并进而影响胎儿神经系统及智能的发育     

用聚合酶链反应检测肺癌myc族癌基因扩增

应用聚合酶链反应分析人非小细胞肺癌组织标本中ｍｙｃ族癌基因扩增情况。在３３例中检测出５例有ｍｙｃ癌基因扩增，说明在非小细胞肺癌中ｍｙｃ族癌基因扩增的频率较低。其中１例为腺癌复发患者，提示ｃ－ｍｙｃ扩增可能同癌复发相关。同时还发现另外一条带，可能是ｍｙｃ族的新成员，有待于进一步研究。     

低剂量电离辐射诱导小鼠脑c－fos原癌基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠脑神经元ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ水平的变化。结果发现，７５ｍＧｙ全身照射可诱导小鼠脑内广泛神经元ｃ－ｆｏｓ的表达，大脑皮质和下丘脑尤为明显。照射后１５分钟ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ即出现，１小时最为明显，２小时后逐渐减少，８小时完全消失。提示低剂量辐射可增加神经元的活性。     

Expression and role of c-myc protooncogene in murine preimplantation embryonic development

Journal of Assisted Reproduction and Genetics - The present study was conducted to investigate the expression and possible role of the c-mycprotooncogene in preimplantation embryos by using...     

SD鼠未成熟心肌细胞缺氧/复氧期c-fos,c-myc mRNA的表达

目的 研究未成熟细胞缺氧／复氧期间ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ的表达。方法 建立Ｓ大鼠未成熟心肌细胞原代培养及缺氧／复氧模型应用原位分子杂交技术,观察ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ在心肌细胞核内的表达。结果 未成熟心肌细胞在缺氧前ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ,ｍＲＮＡ无表达,对照（１）组和（２组）ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ在缺氧１２０ｍｉｎ开始表达,复氧６０ｍｉｎ表达程度进一步升高。牛磺酸保护组（Ⅲ）组在缺氧１     

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的效应。方法 人工合成正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸,转入体外培养的ＶＳＭＣ中,分别于作用后１～５ｄ进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定。结果加入反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸的ＶＳＭＣ增殖受到抑制,崦正义和错配反义寡核苷酸对ＶＳＭＣ增殖没有明显影响。结论 反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸可有效阻遏