Shiga Toxin Promotes Podocyte Injury in Experimental Hemolytic Uremic Syndrome via Activation of the Alternative Pathway of Complement

Shiga toxin (Stx)–producing Escherichia coli is the offending agent of postdiarrhea-associated hemolytic uremic syndrome (HUS), a disorder of glomerular ischemic damage and widespread microvascular thrombosis. We previously documented that Stx induces glomerular complement activation, generating C3a responsible for microvascular thrombosis in experimental HUS. Here, we show that the presence of C3 deposits on podocytes is associated with podocyte damage and loss in HUS mice generated by the coinjection of Stx2 and LPS. Because podocyte adhesion to the glomerular basement membrane is mediated by integrins, the relevance of integrin-linked kinase (ILK) signals in podocyte dysfunction was evaluated. Podocyte expression of ILK increased after the injection of Stx2/LPS and preceded the upregulation of Snail and downregulation of nephrin and α-actinin-4. Factor B deficiency or pretreatment with an inhibitory antibody to factor B protected mice against Stx2/LPS-induced podocyte dysregulation. Similarly, pretreatment with a C3a receptor antagonist limited podocyte loss and changes in ILK, Snail, and α-actinin-4 expression. In cultured podocytes, treatment with C3a reduced α-actinin-4 expression and promoted ILK-dependent nuclear expression of Snail and cell motility. These results suggest that Stx-induced activation of the alternative pathway of complement and generation of C3a promotes ILK signaling, leading to podocyte dysfunction and loss in Stx-HUS.     

黄连素调节miR-29b抑制高糖诱导的MPC-5足细胞上皮-间质转化研究

[目的]探讨miR-29b在高糖诱导的MPC-5足细胞上皮-间质转化中的作用及黄连素的保护机制.[方法]将MPC-5小鼠足细胞分为正常组、高糖组和高糖+50μmol/L黄连素组,培养48 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液上清液中的重组人转化生长因子-β1(TGF-β1),实时定量聚合酶链反应(RT-qP...     

糖尿病肾病患者足细胞病变的临床病理特征

目的：研究2型糖尿病肾病患者肾小球足细胞病变，分析其与血糖控制、蛋白尿、肾功能及肾组织病理形态学改变之间的关系。方法：27例经肾穿刺活检明确诊断的2型糖尿病肾病。肾组织病理定量计数肾小球足细胞数。借助足细胞特定标志物WTl与肾小球基膜Ⅳ型胶原α3链(C—Ⅳα3)双套色荧光染色，用激光共聚焦荧光显微镜对肾小球足细胞进行准确的密度定量分析。结果：糖尿病肾病患者无论临床表现为微量白蛋白尿、蛋白尿(尿蛋白＜3．5g/24h)，还是大量蛋白尿(尿蛋白＞3．5g/24h)，均伴肾小球足细胞数目及密度的减少，其中以大量蛋白尿组最为显著，蛋白尿组次之，微量白蛋白尿组最轻。足细胞数目及其密度与尿蛋白量呈显著负相关(P＜0．01)。足细胞数目的减少还与肾小球病理改变相关，表现为肾小球K—W结节病变者其足细胞数明显少于肾小球弥漫系膜增生性病变者(P＜0．01)。此外，足细胞数减少严重者肾小球硬化以及血清肌酐水平升高的发生率均明显增高。结论：糖尿病肾病患者早期就表现出肾小球足细胞数目及其密度的减少，随着病变加重，这种变化愈发明显。足细胞病变不仅导致大量蛋白尿的发生，而且还与肾小球硬化和肾功能损伤的发生有关。     

骨形态发生蛋白-7通过 TGFβ／smad 信号通路抑制高糖诱导下足细胞的转分化

目的：通过观察骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对高糖环境培养下足细胞 p-smad2/3、nephrin、desmin 表达的影响探讨 BMP-7抑制足细胞转分化机制。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为以下4组：正常糖组（NG 组,含 D-葡萄糖5．5 mmol/L）、高糖刺激组（HG 组,含 D-葡萄糖30 mmol/L）、高糖＋BMP-7干预组（BMP-7组,含 D-葡萄糖30 mmol/L＋400 ng/ml rhBMP-7）、甘露醇对照组（MN 组,含 D-葡萄糖5．5 mmol/L ＋甘露醇24．5 mmol/L）,各组干预时间为48 h,应用荧光定量 PCR 法检测足细胞 nephrin、desmin mRNA 表达量,Western blot 检测足细胞 p-smad2/3、nephrin、desmin 蛋白表达量。结果正常状态下足细胞高表达 nephrin,少量表达 p-smad2/3、desmin;高糖刺激可以上调足细胞 p-smad2/3、desmin 的表达、下调 nephrin 的表达（P ＜0．05）;BMP-7与高糖共同培养在一定程度上可以抑制高糖引起的足细胞 p-smad2/3表达上调,减少 desmin 表达,恢复 nephrin 表达（P＜0．05）;NG 组与 MN 组之间比较 p-smad2/3、nephrin、desmin 表达水平无显著差异（P ＞0．05）。结论BMP-7可能通过调节 TGFβ/smad 信号通路抑制高糖诱导足细胞转分化。     

鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理及足细胞表型改变的研究

 目的观察鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理和足细胞表型改变的时序变化,寻找输尿管梗阻后肾脏发生不可逆损伤的时相。方法建立单侧输尿管完全梗阻动物模型,梗阻后不同时间点取出肾脏,经HE染色和免疫荧光双标方法,观察肾脏病理及足细胞表型的改变。结果大体观察,梗阻24h后出现肾盂扩张,梗阻3d后出现肾皮质变薄。组织学观察,梗阻12h后出现一部分近曲小管扩张,小管上皮细胞呈水样变性肿胀,在梗阻3d后出现大量小管上皮细胞变形肿胀。免疫荧光双标法,梗阻24h后有少量足细胞、巨噬细胞同时被2种抗体标记,2d后足细胞呈减少趋势,而巨噬细胞逐渐增多。结论输尿管梗阻后在肾脏病理改变早于肾脏发生形态学改变的发生,输尿管梗阻后24h发生足细胞表型的改变,与肾脏肾盂出现明显扩张的时间相近,随着梗阻时间的延长,肾脏病理改变逐渐加重,足细胞转化逐渐增多。     

坎地沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin和CD2AP表达的影响

目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞相关分子Nephrin、Podocin及CD2AP表达的变化,以及坎地沙坦对其的干预作用,为DN的防治提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组:A组为正常对照组,B组为DN组,C组为DN+坎地沙坦组。用药后第4周和第7周检测各组大鼠的血糖(GLU)、体重、24h尿蛋白(proteinuria)和内生肌酐清除率(Ccr),于第7周予RT-PCR法检测大鼠肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA表达。结果 7周后,与A组比较,B组出现尿蛋白排泄增多,Ccr下降(P<0.05),肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA水平均下调(均P<0.05);与B组比较,C组尿蛋白排泄量降低(P<0.05),Ccr升高(P<0.05),Nephrin、Podocin及CD2AP mR-NA水平均增加(均P<0.05)。采用直线相关分析后发现,尿蛋白与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈正相关。结论 DN时存在足细胞分子Nephrin、Podo-cin及CD2AP表达异常,坎地沙坦对肾脏的保护作用机制可能是通过增加Nephrin、Podocin及CD2AP表达而实现。     

复方血栓通胶囊改善肾功能机制研究

[目的] 研究复方血栓通胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠24 h尿白蛋白、尿肌酐、血肌酐和血尿素氮等相关代谢指标的影响,及应用基因芯片探讨复方血栓通胶囊改善DN 大鼠肾功能的机制。[方法] 选用SD 大鼠45 只,高脂喂养/ 链尿佐菌素(STZ)注射法制备DN 模型,将DN 成模大鼠40 只随机分为小剂量、中剂量、大剂量血栓通组[ 分别给予0.3、0.6、1.2 g/(kg·d)的血栓通粉末悬浊液]、DN 模型组(给予生理盐水)。另外选用SD 大鼠10 只为正常对照组(给予生理盐水),均连续灌胃12 周。每月末测定大鼠空腹血糖(FBG)和体质量。3 个月末测定大鼠24 h尿白蛋白、尿肌酐、血肌酐和血清尿素氮水平。取大鼠肾脏组织进行Illumina基因芯片实验以期从整体基因角度揭示复方血栓通胶囊改善肾功能的机制。实时定量PCR 实验验证基因芯片的结果。[结果] 复方血栓通胶囊能以剂量依赖的方式降低24 h尿白蛋白、血肌酐和血清尿素氮,升高尿肌酐(P<0.05或P<0.01)。基因芯片显示大剂量血栓通组较模型组有67 个基因显著改变,其中34 个上调,33 个下调。实时定量PCR 实验发现大剂量血栓通组胶原蛋白1 型1(Col1a1)、结缔组织生长因子(Ctgf)和转化生长因子1(Tgfb1)基因较模型组显著下调,细胞色素P450 家族2 亚族C 肽23(Cyp2c23)和Nephrin-1(Nphs1)显著上调。[结论] 复方血栓通胶囊能有效改善DN 大鼠肾脏功能,其机制可能涉及Bmp2-Tgfβ-Ctgf通路,Cyp2c23 和足细胞损伤修复。     

活性维生素D3通过抑制TRPC6表达发挥糖尿病肾病的保护作用

目的:探讨活性维生素D3对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠的肾保护作用是否与抑制瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有关.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组及DN加活性维生素D3干预组(DN+ VD组)3组各10只.造模成功后6、12、18周检测大鼠体重、24 h尿蛋白量;造模成功后18周末处死大鼠,检测血样及肾组织指标变化.结果:DN+ VD组与DN组相比蛋白尿显著减少,肾脏病理损伤改善.DN组与NC组比较,Podocin、Nephrin蛋白表达量均明显降低(均P＜0.05),Desmin和TRPC6蛋白表达量均显著升高(均P＜0.05),活性维生素D3干预后上述改变明显改善,差异有统计学意义.相关性分析显示:TRPC6与Podocin(r=-0.808,P＜0.05)、Nephrin(r=-0.791,P＜0.05)呈负相关,而与24 h尿蛋白(r=0.886,P＜0.05)、Desmin(r=0.929,P＜0.05)呈正相关.结论:活性维生素D3显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤,其作用机制与调节足细胞TRPC6的表达有关.