血管内皮生长因子基因在正常造血细胞中的表达

目的　探讨正常造血细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)基因的表达水平。方法　TRIzol一步法提取正常外周血和非恶性骨髓标本单个核细胞及正常血小板的总RNA ;以 β2 -微球蛋白基因为内对照 ,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)半定量分析VEGF基因的表达。结果　 2 2份外周血标本有 18份表达VEGF基因 ,表达率为81.8% ,其中 8份为中度表达 ;18份骨髓标本VEGF基因的表达率高达 94.4% (17/ 18) ,其中高度表达和中度表达分别为 5份与 6份 ;血小板有VEGF基因的低度表达。结论　正常造血细胞可表达VEGF基因 ,提示体内血管生成受到多种效应细胞的共同调节     

锰超氧化物歧化酶过表达对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 揭示锰超氧化物歧化酶（MnSOD）在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用及机制。方法 转染人正义和反义MnSOD基因的PC12细胞,用50 mmol H2O2攻击已转染的细胞系,并采用MTT法、流式细胞术和 Hoechst染色方法研究H2O2的细胞毒作用。结果 转染正义MnSOD的细胞比原细胞的MnSOD酶活性提高1.3倍,而转染反义MnSOD细胞的酶活性降低67%。结论 H2O2对PC12细胞毒作用是通过诱发PC12细胞凋亡作用来实现的;MnSOD具有抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡作用,涉及线粒体的损伤,导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

蓝氏贾第鞭毛虫承德株分子生物学研究

目的：探讨蓝氏贾第鞭毛虫大、小型包囊存在的原因。方法：用分子生物学技术对３株贾第虫（ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）进行ｔｉｍ基因扩增和序列测定。结果：经与ＧｅｎＢａｎｋ登记虫株比较和用ＤＮＡｓｔａｒ软件处理的结果表明,此３株贾第虫的基因型属２型（ＪＨ型）。结论：大、小型包裹在形态学上经过统计学处理显示有显著差异,但与基因型无关。     

起始密码下游序列与16srRNA3′端序列的匹配性对基因表达效率的影响

目的 :研究起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配关系对基因表达效率的影响。方法 :我们一方面对人IL_2、人IL_8、人IL_6 ,人GM_CSF、人G_CSF、人IL_1ra、人IL_9等全长cDNA序列及 5′末端局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列进行匹配性进行分析 ,寻找序列匹配性与表达效率间的关系 ;另一方面 ,对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′端序列进行沉默突变 ,增强其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列间的匹配性 ,并克隆入pKpL4表达型质粒载体 ,通过大肠杆菌进行表达 ,实验验证序列匹配性与基因表达效率的关系。结果 :分析发现起始密码下游局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482核酸匹配性越好 ,则目的蛋白表达效率越高 ;目的基因编码区内与 16srRNA 3′ +146 9——— +1482间的最大匹配区域越靠近 5′末端 ,目的蛋白表达效率越高。通过对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′末端序列进行沉默突变 ,改善其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列的匹配性后 ,目的蛋白的表达量均呈不同程度地提高。结论 :提高起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配性 ,可增强目的基因的表达效率。     

糖尿病患者胰岛素基因启动子的突变检测和临床应用

目的 :探讨胰岛素基因启动子突变是否与中国人 2型糖尿病相关。方法 :随机选择黑龙江省中国汉族人 89例 2型糖尿病 ,应用聚合酶链式反应———单链象多态性 (PCR -SS CP)检测方法检测胰岛素启动子突变。结果 :89例 2型糖尿病中未发现 1例异常泳动变化。结论 :胰岛素基因启动子突变可能不是中国人 2型糖尿病的重要遗传因素。文献报道美国黑人中胰岛素基因启动子突变 ( 8个碱基TGGTCTAA的重复序列 )与 2型糖尿病相关 ,本研究结果提示此种相关有明显的种族异质性     

幽门螺杆菌亚型cagA+基因株与胃癌的关系

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关基因Ａ阳性株（ｃａｇＡ＾＋株）与胃癌的关系。方法：通过多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测９２例胃癌和２４例浅表胃炎组织石腊标本Ｈｐ和ｃａｇＡ＾＋亚型株的感染。结果：①Ｈｐ感染在胃癌和慢性浅表胃炎间无差异,而ｃａｇＡ＾＋株感染是前者高于后者（Ｐ〈０．０５）;②Ｈｐ感染早期胃癌地进展期癌、胃窦癌高于贲门癌、肠型胃癌高于弥漫型癌（Ｐ〈０．０５）。然而只有肠型胃癌ｃａｇＡ＾     

定量PCR检测缺失型DMD/BMD携带者的研究

研究DMD/BMD携带者临床诊断的有效手段。方法 :运用双重定量PCR及剂量系数分析 ,检测 2 6例正常对照 ,7例肯定携带者和 2 1例可疑携带者 ,部分结果与短片段重复顺序多态性方法及CK值作了比较。结果 :确定了判定参考标准 ,可疑携带者中 ,患儿母亲检测阳性率为 5 7.9% ,8例经短串联重复顺序多态性分析 ,得到了完全验证。结论 :定量PCR检测DMD/BMD携带者快速、敏感、准确 ,可在临床诊断中应用。     

非病毒载体法转染野生型P^53基因对肺癌细胞生长特性的影响

目的：研究非病毒载体法基因转染的最适条件及其潜在价值。方法：利用脂质体介导和配体定向法将带有野生型Ｐ＾５３基因（Ｗｔ－Ｐ＾５３）ｃＤＮＡ的质粒引入细胞,用直接镜检、软琼脂培养、四甲基偶氮唑（ＭＴＴ）法和乳酸脱氢酶法等研究细胞生长特性的改变情结果：绝大多数细胞被转染,肿瘤细胞生长受到明显抑制而发生凋亡。结论：本方法对于基因体外转染是可行的,并且有可能将来用于小细胞肺癌的Ｐ＾５３基因治疗。     

P16蛋白表达与胃癌浸润转移的关系

目的 :研究抑癌基因P1 6在胃癌中的表达 ,探讨P1 6蛋白在胃癌浸润转移中的作用。方法 :采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法 (SP法 ) ,检测 46例胃癌组织中P1 6蛋白的表达。结果 :P1 6表达与性别、年龄、浸润深度无显著意义 (P >0 .0 5) ;伴淋巴结转移胃癌P1 6蛋白表达阳性率为 6.9% ,无淋巴结转移胃癌为 35.3% ,差异有显著意义 (P <0 .0 5)。结论 :P1 6蛋白表达缺失可能与胃癌转移有关。