Bacillus amyloliquefaciens中性植酸酶基因的原核表达及蛋白纯化和性质

淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens是一种嗜热细菌，其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景．通过TD-PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达栽体pET-30a( )上，在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达，表达量占大肠杆菌可溶性蛋白的33．5％．采用金属Ni^2 亲和层析对基因表达产物进行纯化，表达产物具有正常的生物学功能．     

食管鳞癌中人表皮生长因子受体Her-2/neu蛋白的过表达及预后意义

目的 分析食管鳞癌中Her-2/neu蛋白过表达的临床病理意义及其对预后的影响,探讨以Her-2/neu单抗对过表达Her-2/neu蛋白的食管鳞癌患者进行靶向治疗的可行性.方法 应用Hercep Test 试剂盒,对94例外科切除、病理诊断为食管鳞癌的标本中Her-2/neu蛋白的表达水平进行检测,并分析Her-2/neu蛋白的过表达与临床病理特征的关系以及与患者预后的关系.结果 HER-2/neu蛋白在癌旁组织及正常食管组织中的表达为阴性,在94例食管鳞癌中的过表达率为20.2%(19/94),其过表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、组织学分化程度、临床分期均无明显相关性(P>0.05),而与肿瘤浸润深度(T分期)以及淋巴结转移(N分期)具有一定的相关性.在T3+T4期的肿瘤组织中的过表达率明显高于T1+T2期的肿瘤组织中的过表达率(30.0% vs.13.0%),差异有统计学意义(χ~2=4.136,P=0.039);在N1期肿瘤组织中的过表达率明显高于在NO期肿瘤组织中的过表达率(26.8%vs.10.6%),差异有统计学意义(χ~2=3.711,P=0.045);生存分析显示HER-2/neu蛋白过表达组的总生存率低于非过表达组,差异有统计学意义(χ~2=6.258,P=0.017),而两组的无瘤生存率差异无统计学意义(χ~2=0.258,P=0.605);Cox模型多因素分析显示HER-2/neu基因过表达是影响患者总生存率的有意义的预后因素之一.结论 HER-2/neu基因过表达与食管鳞癌的浸润转移及预后密切相关,HEK-2/neu蛋白过表达检测可作为判断食管鳞癌生物学行为和预测预后的参考指标之一,并为HER-2/neu过表达的病例应用HER-2/neu单克隆抗体进行靶向治疗提供依据.     

CEM／ADM多耐药细胞株的P170－糖蛋白的表达

本文利用免疫荧光法对肿瘤细胞ＣＥＭ，ＣＥＭ／ＡＤＭＰ１７０－糖蛋白进行了检测，结果显示：敏感细胞全部为阴性，而耐药细胞株Ｐ１７０－糖蛋白呈过度表达，其过度表达细胞数随肿瘤细胞对抗癌药物耐受性增强而增加，其中ＣＥＭ／ＡＤＭ多耐药细胞株的Ｐ１７０－糖蛋白过度表达细胞为９２％。     

Recent advances and findings of angiotensin type 2 receptor: a review

Angiotensinogen is a member of the serpin family. It is produced constitutively and released into the circulation mainly by the liver. Angiotensinogen forms angiotensin Ⅰ by action of the circulated renin released from the kidney. Angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ）, an octapeptide hormone with sequence Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe,is converted from angiotensin Ⅰ through removal of two terminal residues by the angiotensin-converting enzyme （ACE） mostly catalyzed in the lung.1 This peptide binds to two subtype receptors, angiotensin type 1 receptor （AT1R） and angiotensin type 2 receptor （AT2R）,members of the superfamily of heptahelical G protein coupled receptors, with different affinities.2 It is well known that AT1R and AT2R crosstalk and lead to counterregulatory functions in many systems, especially the cardiovascular system.3 Accumulating data established the roles of AT1R in the classic actions of Ang Ⅱ including vasoconstriction and cardiovascular hypertrophy, whereas AT2R is suggested to exert direct functions in vasodilation and antigrowth effects.4 Recent publications provide new insights into the roles of AT2R with increasing responsibilities. Recent progresses in AT2R research are reviewed in this article.     

高表达FasL的Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用

目的：研究高表达FasL的转基因小鼠Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用。方法：以溶脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,UU)直接注入FasL转基因的小鼠膀胱模拟上行性感染的途径,分别在1、2和3周处死小鼠,分离取得睾丸组织,观察组织的病理变化,并从小鼠睾丸组织分离获得高纯度的Sertoli细胞,然后抽提总RNA,用RT－PCR方法比较正常组与UU感染组之间FasL、IL－1α、TGF－βmRNA的表达差异。结果：与正常组相比,UU感染的小鼠,睾丸组织发生明显的病理改变,Sertoli细胞表达的调节因子在mRNA水平也发生了明显的变化：其FasLmRNA的表达在1周,3周时与正常无明显区别,2周时明显升高;IL－1α、TGF－βmRNA的表达在1－3周均为升高。结论：FasL转基因小鼠的睾丸ertoli细胞可通过改变有关细胞因子的表达格局发挥免疫调节作用。     

PIK3CB、Akt及p-Akt在子宫内膜癌中的表达及意义

  目的 检测PIK3CB、Akt及p-Akt在增殖期子宫内膜、子宫内膜非典型增生和子宫内膜样腺癌中的表达,探讨它们在子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法 应用免疫组化SP法和Western blot检测PIK3CB、Akt及p-Akt在不同子宫内膜组织中的表达情况。结果 PIK3CB、Akt及p-Akt在子宫内膜样腺癌中的表达水平均高于子宫内膜非典型增生和增殖期子宫内膜组织（P<0.05）。PIK3CB的表达与子宫内膜癌的临床分期和病理学分级无关。Akt及p-Akt在不同病理学分级子宫内膜癌组织中表达的差异有统计学意义,但与临床分期无关。结论 PI3K/Akt信号转导通路在子宫内膜癌发生发展中发挥着重要作用,针对PI3K/Akt信号转导通路的干预治疗可能为子宫内膜癌的预防及治疗提供新的靶点。     

全身过表达人METRNL基因小鼠模型的构建与验证

目的 构建全身过表达人METRNL基因的小鼠模型（R26-L-METRNL^+/-小鼠）。方法 基于Cre-loxP系统利用Dppa3-Cre小鼠和实验室前期构建的人METRNL基因条件性过表达（R26-LSL-METRNL^+/-）小鼠进行交配繁殖,得到目标R26-L-METRNL^+/-小鼠。将该目标小鼠进行基因型鉴定,收集其血液及心、肝、脾、肺、肾、脑、白色脂肪和肌肉组织,利用实时荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹实验和血清酶联免疫吸附实验,考察人METRNL基因在小鼠的表达情况。结果 R26-L-METRNL^+/- 小鼠的人METRNL在组织mRNA水平、组织蛋白水平和血液蛋白浓度方面都有显著表达,远高于野生对照组小鼠。结论 R26-L-METRNL^+/-小鼠模型构建成功。     

化瘀消癥颗粒对miR-210过表达与低氧状态下滋养细胞血管生成、侵袭的影响

【目的】观察化瘀消癥颗粒对miR-210过表达与低氧状态下滋养细胞血管生成、侵袭的影响。 【方法】体外培养HTR-8/SVneo细胞,通过转染建立miR-210 过表达模型,以CoCl2法建立化学低氧模型,将实验分为空白组、miR-210过表达组、miR-210过表达阴性组、miR-210过表达+中药组、低氧+中药组及中药组,采用Western Blot法检测各组HTR-8/SVneo 细胞中缺氧诱导因子1α （HIF-1α） 、血管生成因子 （VEGF） 、侵袭相关因子[基质金属蛋白酶9 （MMP-9） 、金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1） ]蛋白的表达。 【结果】 与空白组比较,miR-210过表达组中HIF-1α、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平及MMP-9/TIMP-1比值升高 （P＜0.05） ;与miR-210过表达组比较,miR-210过表达阴性组、miR-210 过表达+中药组、低氧+中药组、中药组中HIF-1α、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平及MMP-9/TIMP-1比值均下降 （P＜0.05） ,中药组下降作用尤其明显;与miR-210 过表达+中药组比较,低氧+中药组、中药组中HIF-1α、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平及MMP-9/TIMP-1比值下降 （P＜0.05） ;与低氧+中药组比较,中药组上述各指标均下降 （P＜0.05） 。 【结论】化瘀消癥颗粒对miR-210 过表达及低氧状态下滋养细胞所增强的血管生成、侵袭能力具有负调控作用,这可能是其治疗输卵管妊娠的作用机制之一。     

KLF2过表达及敲减胃癌稳转细胞株的建立

目的 构建KLF2过表达BGC823和KLF2敲减MGC803胃癌稳转细胞株。方法克隆人源KLF2基因,连接到AgeI/AgeI酶切后GV358载体上,构建GV358-KLF2重组质粒,转染293T细胞,包装慢病毒;构建KLF2shRNA,连接到BamHI和EcoRI双酶切后的PHBLV-U6-ZSGreen-Puro载体上,经鉴定后转染293T细胞。采用RT-PCR及Western印迹法检测稳转细胞株中KLF2的表达。结果利用慢病毒介导,重组质粒GV358-KLF2和KLF2-shRNA转导入BGC823细胞、MGC803细胞并稳定表达。RT-PCR和Western印迹法结果均显示过表达稳转株KLF2表达量明显升高（P＜0.05）,敲减稳转株KLF2表达量明显下降（P＜0.05）。结论成功构建了KLF2过表达BGC823细胞株和KLF2敲减MGC803细胞株,为后续KLF2功能实验奠定了基础。     

结肠癌组织中C/EBPα的表达及其对SW480细胞侵袭的影响

【】目的 研究结肠癌组织中C/EBPα的表达,及其过表达对结肠癌SW480细胞系侵袭性的影响。方法 首先利用免疫组化方法检测48例结肠癌患者的癌组织和正常组织中的C/EBPα表达情况,并统计分析了C/EBPα的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系。然后构建pCDGFP-C/EBPα真核表达质粒,过表达于结肠癌SW480细胞系中,通过细胞划痕实验研究其迁移能力的变化,并检测与肿瘤侵袭相关蛋白(KLF5、MMP-2、MMP-9、ECD)的表达量的变化 结果 免疫组化实验结果显示,在正常组织中,C/EBPα的低表达率为6.25%,而在结肠癌组织中,C/EBPα的低表达率为68.75%,两组之间差异具有统计学意义(P＜0.05),且低表达C/EBPα的患者的肿瘤直径越大、TMN分期越晚、淋巴结转移概率越大。细胞划痕实验结果显示,划痕48h后,正常SW480细胞的迁移率为53.16%,而过表达C/EBPα的SW480细胞的迁移率为23.57%,两组之间差异具有统计学意义(P＜0.05),且免疫印记实验也表明,过表达C/EBPα的SW480细胞的KLF5、MMP-2、MMP-9表达明显降低,而ECD表达明显升高。 结论 C/EBPα在结肠癌组织中低表达,且与结肠癌的TMN分期和转移有着密切关系,且过表达C/EBPα能够显著降低结肠癌细胞的侵袭性,对今后结肠癌的早期诊断和基因靶向治疗有着重要意义。