骨桥蛋白RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞作用的研究

目的研究OPN特异性RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法针对OPN cDNA设计3条siRNA,用Lipofectamin 2000转染卵巢癌SKOV3细胞,用RT-PCR检测siRNA对OPN基因的沉默效果;用Western blot检测siRNA对细胞中OPN蛋白表达的影响;利用Hochest 33258检测siRNA诱导SKOV3细胞凋亡的作用。结果 siRNA能明显降低卵巢癌SKOV3细胞中OPN mRNA和蛋白的表达,3个siRNA转染组中siR-NA3组对OPN基因的抑制效果最为明显,siRNA3能显著增加SKOV3细胞的凋亡。结论靶向OPN的siRNA能在体外有效抑制OPN的表达,可用于卵巢癌的基因治疗。     

Biochemical markers of bone turnover in diagnosis of myeloma bone disease

This study was designed to explore the value of markers of bone turnover, macrophage inflammatory protein-1alpha (MIP-1alpha), and osteopontin (OPN) in the diagnosis of myeloma bone disease. Twenty-five patients with newly diagnosed and untreated multiple myeloma (MM), and 22 age-, sex-, and bone mineral density-matched control subjects were enrolled. Levels of MIP-1alpha, OPN, carboxy-terminal telopeptide of Type-1 collagen (C-telopeptide or Ctx), deoxypyridinoline (DPD), Type-1 collagen propeptide (T1Pro), and bone-specific alkaline phosphatase (BALP) were assessed in both groups. Twenty-two of the patients had bone involvement documented by skeletal surveys and lumbar spinal magnetic resonance imaging. Levels of serum Ctx, OPN, MIP-1alpha, and urine DPD were significantly higher in MM patients with bone disease than in controls (P<0.01). Serum Ctx levels were elevated in 90.9% of patients with MM and 40.9% of controls (P<0.001). Urine DPD levels were elevated in 90.4% of the patients and 31.8% of the controls (P<0.001). The serum OPN and MIP-1alpha levels of the patients were significantly correlated with beta2-microglobulin and lactate dehydrogenase levels (P<0.05). Our study indicates that Ctx and DPD are sensitive markers of bone disease in MM, and higher than normal values suggest presence of bone disease rather than benign osteoporosis in MM. The utility of OPN and MIP-1alpha needs to be further investigated.     

Osteopontin特异性siRNA真核表达载体的构建及其在GC9811胃癌细胞中沉默效应的鉴定

目的：构建骨桥蛋白(OPN)特异性siRNA(small interfere RNA)真核表达载体,体外观察对OPN基因的沉默作用．方法：采用基因克隆技术,将合成的特异性OPNRNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体mU6pro,构建OPN siRNA真核表达载体．以脂质体法将mU6pro空载体和2个(mU6pro／OPN—siRNA1和mU6pro／OPN—siRNA2)重组质粒分别导入具有高转移特性的GC9811胃癌细胞系．72h后用RT—PCR和Western blotting技术检测各实验组胃癌细胞内OPN mRNA及蛋白水平的表达情况．结果：成功构建OPN siRNA真核表达载体．转染OPN—siRNA的胃癌细胞,72h后OPN mRNA及蛋白表达下调,而以mU6pro／OPN-siRNA1的抑制效果更为明显．结论：构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰OPN mRNA及蛋白的表达,为将其进一步应用于胃癌的治疗研究奠定了基础。     

骨桥蛋白对骨髓内皮祖细胞体外增殖功能的影响

目的观察骨桥蛋白(OPN)对体外培养的人骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖功能的影响及可能的机制。方法以密度梯度离心法获取人骨髓单个核细胞(MNCs),差速贴壁法培养8d,由形态学、流式细胞仪、Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双染鉴定为EPC后,免疫组化和RT-PCR方法检测OPN在EPC的表达。加入不同浓度人重组OPN和PI3K抑制剂LY294002和Akt抑制剂作用于EPC,采用CCK-8法观测EPC的增殖能力。结果人重组OPN促进EPC的增殖功能,并且呈剂量依赖性。抑制PI3K/Akt信号通路可以阻断OPN对EPC增殖能力的影响。结论人重组OPN在体外可能通过PI3K/Akt信号通路调节人骨髓源性EPC的增殖能力。     

骨桥蛋白和基质金属蛋白酶-2在子宫内膜癌的表达

目的探讨骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在子宫内膜癌中的表达及其与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学法检测28例正常子宫内膜、28例不典型增生子宫内膜和68例子宫内膜癌中OPN和MMP-2的表达。结果 OPN在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达逐渐增强,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01);MMP-2在子宫内膜癌组织中的表达高于正常子宫内膜和不典型增生内膜(P<0.01),而MMP-2在正常子宫内膜和不典型增生内膜中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。OPN和MMP-2的表达与子宫内膜癌的临床分期、肌层浸润、组织分化及淋巴结转移有关(P<0.01),但与病理类型无关(P>0.05)。OPN与MMP-2在子宫内膜癌中的表达呈显著正相关(r=0.634,P<0.01)。结论 OPN和MMP-2在子宫内膜癌中高表达可能与子宫内膜癌的发生、发展、浸润和转移有关。     

MHC class II-restricted antigen presentation is required to prevent dysfunction of cytotoxic T cells by blood-borne myeloids in brain tumors

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骨桥蛋白靶向磁性纳米探针对动脉斑块的分子成像

目的 通过构建新型骨桥蛋白（OPN）靶向的四氧化三铁（Fe3O4）纳米颗粒，实现对动脉粥样硬化斑块中平滑肌增殖的荧光成像。方法 通过?COOH和?NH2之间的脱水缩合反应将OPN抗体偶联至DMSA修饰的Fe3O4纳米颗粒表面，进而将荧光染料NHS-Cy5.5连接获得纳米成像探针。通过噻唑蓝（MTT）和TUNEL方法检测探针对巨噬细胞的毒性。动脉粥样硬化动物模型通过高脂喂养ApoE?/?小鼠20周构建成功，继而将探针（5mg Fe/kg）经小鼠尾静脉注射，24h后用小动物活体成像仪系统进行光学三维成像，离体血管的冰冻切片做Cy5.5的激光共聚焦检测。结果 MTT结果显示，加不同浓度探针孵育：0，5，10，15，20，25，30mg/L相较于对照组来说，细胞活性并未表现出差异[A490nm：（1.10±0.03），（1.05±0.03），（1.03±0.02），（0.96±0.02），（0.96±0.03），（0.93±0.03） vs （1.11±0.05），P＞0.05]；TUNEL结果显示，加不同浓度的探针孵育：0，10，20，25，30mg/L与对照组比较来说，细胞凋亡率差异无统计学意义[（21.2±1.5）%，（21.8±1.1）%，（21.5±1.2）%，（22.3±1.2）% vs （20.5±1.0）%，P＞0.05]，证实探针在我们所运用浓度范围内对细胞几乎是无毒性的。探针经尾静脉注射到动脉粥样硬化模型小鼠体内后，24h光学成像可见颈部有明显的信号，且组织切片的激光共聚焦结果显示，探针主要集中在斑块内，HE染色结果进一步显示斑块的性质。结论 本实验所构建的探针在所使用浓度范围内基本无任何明显毒性，且对动物颈部动脉粥样硬化斑块有较好的识别效果。