柚皮苷对gp120所致BV2小胶质细胞损伤的保护作用

目的  探讨P2X7受体在HIV-1包膜糖蛋白gp120所致BV2小胶质细胞损伤中的作用,以及柚皮苷通过作用于P2X7受体对gp120所致BV2小胶质细胞损伤产生的保护作用。方法  通过gp120处理BV2小胶质细胞建立细胞损伤模型,并通过MTS比色法检测细胞损伤程度和柚皮苷是否对损伤细胞具有保护作用;应用逆转录PCR（RT-PCR）及蛋白质印迹法（Western blot）检测P2X7受体的表达变化。结果  gp120处理24 h后,与对照组比较,gp120组细胞存活率显著下降（P <0.01）;gp120+柚皮苷组的细胞存活率与gp120组比较有所上升（P <0.01）,但与gp120+BBG组比较差异无统计学意义（P >0.05）;RT-PCR及Western blot的检测结果显示,gp120组小胶质细胞的P2X7受体mRNA及蛋白均比对照组明显升高（P <0.01）,而gp120+柚皮苷组与gp120组比较有所下降（P <0.01）。结论  P2X7受体参与gp120所致BV2小胶质细胞损伤,柚皮苷可能通过抑制P2X7受体的表达上调对gp120所致细胞损伤产生保护作用。

     

高效液相色谱法同时测定抗骨增生胶囊中的毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷

目的 建立同时测定抗骨增生胶囊中毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷3种成分质量分数的高效液相色谱法.方法 采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以水(A)、甲醇(B)、乙腈(C)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm,柱温为30℃.结果 毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷测定的线性范围分别为5.02～100.4、7.38～ 147.6和5.20～ 104.0 μg/mL,r值均大于0.999,平均加样回收率分别为100.7％、100.4％和99.3％,RSD值均小于2.0％(n=6).结论 本方法简便、结果准确,可有效地控制抗骨增生胶囊的质量.     

骨碎补微乳涂膜剂体外透皮效果考察及安全性评价

目的 :考察骨碎补微乳涂膜剂体外透皮效果及安全性。方法 :以柚皮苷作为骨碎补的指标成分,经药物透皮扩散试验仪操作,HPLC测定透皮接受液中骨碎补总黄酮的含量并计算其离体透皮速率;用豚鼠进行皮肤急性毒性实验、皮肤刺激性实验和皮肤过敏性实验。结果:微乳涂膜剂较普通涂膜剂,累计渗透量和透皮速率都要多和快,且随有效成分浓度增加,高剂量组微乳涂膜剂增渗效果显著;在实验所用剂量范围内,对动物皮肤无急性毒性,无刺激性,无致敏性。结论:骨碎补微乳涂膜剂体外渗透效果显著,使用安全。     

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术咳喘宁颗粒化学成分分析及多指标定量测定

目的 采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱技术（HPLC-Q-TOF-MS/MS）对咳喘宁颗粒化学成分进行分析,并建立 HPLC 多成分含量测定方法。方法 采用 HPLC-Q-TOF-MS/MS 技术,色谱柱 Agilent ZORBAX C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）,柱温 35 ℃,体积流量 1.0 mL·min^-1,进样量 10 μL,流动相 A：0.1% 甲酸,流动相 B：乙腈,梯度洗脱;电喷雾离子源（ESI）,正、负离子模式扫描,结合对照品和文献数据鉴定咳喘宁颗粒中的化学成分,并建立HPLC法同时测定新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、柚皮苷的含量。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Waters AtlantisTM T3色谱柱,250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱：0～20 min,3%～15% 甲醇;20～25 min,15%～18% 甲醇;25～26 min,18%～23% 甲醇;26～45 min,23%甲醇;45～46 min,23%～38% 甲醇;46～60 min,38% 甲醇;60～61 min,38%～42% 甲醇;61～70 min,42% 甲醇 ;70～80 min,42%～90%甲醇;体积流量1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃;进样量10 μL,检测波长324、283 nm。结果 共鉴定咳喘宁颗粒中86个化合物,20个来自生麻黄、15个来自白屈菜、30个来自金银花、22个来自枇杷叶、12个来自金沸草、14个来自化橘红,其中有26个化合物经与对照品比对确认,选择新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和柚皮苷作为含量测定的质控指标,6种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好（r≥0.999 9）,精密度、稳定性及重复性良好,加样回收率为99.48%～103.39%,RSD为1.29%～1.98%。对3批咳喘宁颗粒进行多成分含量测定,方法可行。结论 在质谱成分解析的基础上,建立咳喘宁颗粒6种化学成分的含量测定方法,为咳喘宁颗粒的药效物质基础和质量标准研究提供参考。     

枳壳及其制剂血府逐瘀胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量测定

目的 建立HPLC同时测定枳壳和血府逐瘀胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量。方法 色谱柱为SunFire^TM C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(20∶80),磷酸调pH至2.5;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为283 nm。结果 柚皮苷在0.166~2.074 μg内线性关系良好(r=0.999 8),平均加样回收率为98.17%;新橙皮苷在0.162~2.020 μg内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率为100.61%。结论 本方法简便、准确,重复性好,可用于枳壳及其制剂血府逐瘀胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量测定。     

清脂胃舒佐餐茶HPLC法指纹图谱的研究及4个成分的含量测定

目的 建立清脂胃舒佐餐茶水溶性成分的高效液相色谱（HPLC）法指纹图谱,并测定没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量。方法 采用HPLC法,色谱条件：Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.8 ml/min;检测波长为300 nm;柱温为35℃。结果 通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）,确定了清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱共有模式,标定了26个共有峰,整体相识度为0.934~0.995;并测定了10批制剂中绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量分别为0.672、0.194、1.247和0.532 mg/g,RSD分别为1.35%、1.89%、0.69%和0.79%。结论 清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱及其中没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量检测方法简便、稳定、科学,为本品的质量控制提供了科学依据。     

常山胡柚不同生长期果实中3种成分含量的动态变化

目的 建立HPLC同时测定常山胡柚不同生长期果实中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的方法,并研究常山胡柚不同生长期果实中3种成分含量的动态变化,从而确定常山胡柚作为药用资源的最佳采收时间。方法 采用HPLC测定常山胡柚不同生长期果实中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷3种成分的含量,色谱柱为安捷伦ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm× 250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸(15∶85);检测波长：284 nm;流速：1.0 mL·min^-1;柱温：40 ℃;峰面积外标法定量。结果 柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的线性范围分别为28.45~284.50 ng(r=0.999 8)、18.09 ~180.93 ng(r=0.999 8)、85.86~858.55 ng(r=0.999 6),平均回收率分别为98.83%(RSD=2.12%),99.05%(RSD=2.30%),98.83%(RSD=1.85%)。常山胡柚不同生长期果实中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量分别为12.65~109.66,0.45~17.50,8.06~218.90 mg·g^-1,柚皮苷在6月时最高,橙皮苷和新橙皮苷在5月时最高,其中5~7月间采收的果实柚皮苷和新橙皮苷的含量均符合中国药典枳壳项下含量的要求。结论 本方法操作简便、快速,结果准确、可靠,重复性好,适合作为含量测定的方法,并为常山胡柚作为药用资源的采收提供了参考依据。     

文旦柚柚皮中柚皮苷的富集及其活性研究

目的 采用热水浸提柚皮中柚皮苷,并使用大孔吸附树脂对其进一步富集,并考察其活性。方法 以柚皮苷的吸附率和解吸率为考察指标,筛选不同大孔吸附树脂对柚皮苷的吸附性能和洗脱能力,并初步考察柚皮苷抗氧化作用和镇静作用。结果 大孔树脂HPD450有较好的吸附效果,工艺条件：上样流速为2 BV·h^-1,样液浓度为2.36 mg·mL^-1;解吸最适工艺条件：洗脱剂乙醇浓度为50%,用量为4 BV,流速为3 BV·h^-1。浓度为3.75 mg·mL^-1的柚皮苷具有较好的抗氧化作用,以20 mg·kg^-1给药时,小白鼠进入睡眠时间较短且行动比较缓慢。结论 HPD450可用于富集柚皮中的柚皮苷,得到的产物具有较好的镇静和安眠作用。     

温胆汤UPLC-UV-MS/MS指纹图谱研究

目的 研究和建立温胆汤UPLC-UV指纹图谱,确定色谱峰药材来源,同时对各成分进行定性研究,为该方物质基础和质量控制提供科学依据.方法 UPLC-UV法进行温胆汤指纹图谱研究,对14批样品进行相似度分析;阴性液对照法进行共有峰药材来源研究;UPLC-MS/MS法对温胆汤中成分进行定性研究.结果 建立了温胆汤UPLC-UV指纹图谱,进行了方法学考察,结果显示该方法精密度、稳定性、重复性良好;对14批样品进行指纹图谱研究,得出共有峰指纹图谱,标记了22个共有峰;进行了14批样品相似度比较,相似度在0.863～0.998;通过与对照品保留时间比较,直接指认了橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、甘草苷和甘草酸铵;与药材阴性液比较,对22个共有峰药材来源进行了归属;UPLC-MS/MS法定性了橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、甘草苷和甘草酸铵5个成分,推断出了圣草枸橼苷、异柚皮苷、枸橘苷、乌拉尔甘草皂苷乙4个成分.结论 建立的指纹图谱方法准确、可靠,对温胆汤物质基础和质量控制研究提供了一定参考.