成年犬自体骨骼肌成肌细胞移植于急性心肌梗死区的实验研究

目的观察心肌内和冠状动脉内注射法移植自体骨骼肌成肌细胞于急性心肌梗死区的生长分化特点。方法以改良成年犬骨骼肌成肌细胞培养方法进行细胞分离及扩增。结扎冠状动脉前降支中段,建立急性心肌梗死模型。分为直接注射对照、移植,冠状动脉内注射对照、移植4组,每组5只。不开通冠状动脉,分别向梗死心肌内和梗死相关冠状动脉内注射自体骨骼肌成肌细胞(1·0~1·4×108个)或等量生理盐水。移植4周后通过HE染色、PTH染色、骨骼肌特异性慢肌球蛋白抗体免疫组化染色和透射电镜寻找梗死区内存在新生肌组织的证据并观察其生长特点。结果经心肌内直接注射和冠状动脉内注射移植自体骨骼肌成肌细胞4周后,透射电镜及HE染色下均可在梗死区内找到新生幼稚肌原性细胞存在,PTH染色证实有新生的横纹肌组织形成,骨骼肌特异性慢肌球蛋白抗体免疫组化染色发现有骨骼肌原性的成熟肌组织存在;成肌细胞直接注射组内新生的肌组织排列较为密集,而冠状动脉内成肌细胞注射组内的新生肌组织排列较分散。结论通过心肌内直接注射和经梗死相关冠状动脉注射将自体骨骼肌成肌细胞移植到急性心肌梗死区后均能形成成熟的肌组织,为以骨骼肌成肌细胞进行急性心肌梗死的细胞心肌成形治疗提供了组织学依据。     

成年犬骨骼肌成肌细胞培养方法改良及生长特性研究

目的 :为细胞心肌成形治疗初步探讨较为简便、经济的成年犬骨骼肌成肌细胞体外培养方法并研究其生长特性。　　方法 :采用机械分解法与IA型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合获取骨骼肌成肌细胞 ;通过细胞形态、生长曲线研究其生长特性 ;细胞组化染色鉴定 ,并比较差速贴壁纯化与否所得细胞组化染色阳性计数差异。　　结果 :改良方法适于获取成年犬骨骼肌成肌细胞 ;细胞生长旺盛 ,在细胞密集或分化培养基作用下可融合成肌管 ;α 横纹肌肌动蛋白、骨骼肌特异性肌球蛋白组化染色细胞为弱阳性 ,而肌管为强阳性。胚胎成肌细胞调节因子组化染色为阳性 ;各组细胞α 横纹肌肌动蛋白组化染色阳性数无显著差异。　　结论 :改良方法获得的骨骼肌成肌细胞具有良好的增殖、分化能力 ;差速贴壁纯化与否获得成肌细胞的阳性计数无显著差异。     

脑源性神经营养因子基因治疗对大鼠脑内多巴胺含量的影响

采用脑源性神经营养因子（BDNF）基因工程成肌细胞纹状体内移植观察其对帕金森病（PD）大鼠脑内纹状体多巴胺含量的影响，结果发现：基因工程成肌细胞脑内移植可使纹状体多巴胺含量明显增加，并可维持达两月之久，这为帕金森病的治疗提供了一种新的有效的治疗方法。     

Novel Duchenne Muscular Dystrophy Treatment Through Myoblast Transplantation Tolerance with Anti-CD45RB, Anti-CD154 and Mixed Chimerism

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a fatal disease caused by a defect in the skeletal muscle protein, dystrophin. One potential therapy for DMD involves transplantation of myoblasts from normal individuals. Unfortunately, myoblast allografts are particularly immunogenic and transplant tolerance in dystrophic (mdx/mdx) mice has not yet been achieved despite using strategies successful in other allograft models. Here, we attempted to induce 'central tolerance' using either haplo- or fully allogeneic bone marrow after conditioning with low-dose (3 Gy) whole body irradiation and anti-CD154 or anti-CD45RB mAbs. With one exception, these mice lacked persistent chimerism, long-term survival of myoblast allografts, or tolerance. In contrast, the addition of anti-CD45RB to anti-CD154 uniformly resulted in long-lived high-level mixed chimerism, long-term (>100 days) engraftment of allogeneic myoblasts and deletion of donor-reactive cells. Moreover, all recipients exhibited tolerance to second myoblast allografts or donor-specific tolerance to skin transplants performed >80 days after the initial graft. Thus, we now report that anti-CD45RB synergizes with anti-CD40L to promote stable mixed chimerism and robust tolerance to myoblast allografts for the first time. This novel protocol may be applicable to future clinical trials in myoblast transplantation for treatment of DMD and for transplantation of other immunogenic allografts.     

人胰岛素样生长因子-1真核表达质粒的构建及其在成肌细胞中的表达

目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核表达质粒 ;应用阳性脂质体介导的基因转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1瞬时转染C2C12成肌细胞中 ;采用RT -PCR及免疫组化染色等方法检测hIGF - 1基因在成肌细胞中的表达情况 ;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hIGF - 1的生物活性。结果 :将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1转染成肌细胞后 ,hIGF - 1mRNA及蛋白表达水平明显增高 ;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性。结论 :成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hIGF - 1蛋白的表达 ,所表达出hIGF - 1蛋白具有生物学活性。     

转基因成肌细胞移植治疗帕金森病的实验研究

评价转基因成肌细胞移植治疗帕金森病（ＰＤ）的疗效。方法移植转酪氨酸羟化酶（ＴＨ）基因的成肌细胞（ｎ＝２４）和未经遗传修饰的成肌细胞（ｎ＝１０）于偏侧ＰＤ鼠损毁侧纹状体。用阿朴吗啡（ＡＰＯ）诱发旋转行为，反向聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＴＨ免疫组化检测ＴＨ基因的表达和ＴＨ蛋白的合成以及高效液相色谱仪－电化学检测器（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）检测纹状体多巴胺及代谢产物含量以此评估基因治疗的效果。结果治疗组移植治疗后ＡＰＯ诱发的旋转行为明显改善（Ｐ＜０．０１），且可持续１３个月，而对照组ＡＰＯ诱发的旋转行为无改善（Ｐ＞０．０５），应用ＲＴ－ＰＣＲ、ＴＨ免疫组化和ＨＰＬＣ－ＥＣＤ在治疗组移植部位检测到ＴＨ基因的表达、ＴＨ蛋白的合成和移植侧纹状体部多巴胺及其代谢产物含量增高。结论遗传修饰的成肌细胞能够在体内长时间、有效地表达ＴＨ，并改善ＰＤ鼠的病理行为，是ＰＤ基因治疗的合适靶细胞之一。     

人成肌细胞体外培养的动态观察和形态学的初步研究

以肌组织原代培养方法对正常人成肌细胞进行体外培养；用倒置相差显微镜观察成肌细胞的成肌过程，并应用透射和扫描电镜以及免疫细胞化学技术研究成肌细胞的超微结构以及中间丝结蛋白的分布情况。结果显示，体外培养肌细胞可分为缓慢生长、分裂增殖和肌管形成期３个不同的生长、成熟阶段。成肌细胞是幼稚的早期单核肌细胞，体外分裂增殖能力强，可呈克隆生长或（和）簇状分布的不断的成熟分化过程。分裂增殖期成肌细胞胞浆有束状平行排列的肌丝以及线粒体和糖原分布，并呈逐步的分化成熟过程，可相互融合形成肌管，并可与初生肌管进一步融合发育成熟。各期成肌细胞胞浆中间丝结蛋白呈阳性反应，早期生成结蛋白量少且分布不均。上述方法对同期培养的成肌细胞与纤维母细胞可资鉴别。     

Complementary surface epitopes, myotropic adhesion and active grip in Trypanosoma cruzi-host cell recognition

Plasma membranes with complementary surface epitopes and with essentially the same orientation as tissue infective metacyclic trypomastigotes and epimastigotes of Trypanosoma cruzi adhere to L6 myoblast host cells preferentially to smooth muscle and epithelial cells as a function of time, surface area and concentration in saturation phenomena at 4 and 37°C. The initial adhesion rates are partially calcium ion dependent and, at saturation, they are also dependent on high energy phosphorylated intermediates, exerting an active grip on adherent parasite membranes. These phenomena are consistent with the existence of parasite attachment molecules on the external surface of the plasma membrane and complementary host cell receptor structures with the capacity to bind them.     

高脂环境对大鼠成肌细胞AMPK的影响及Ghrelin的保护作用

目的探讨高脂环境对大鼠成肌细胞AMPK的影响及Ghrelin的保护作用,为深入研究2型糖尿病的防治提供理论依据。方法在给予原代培养大鼠成肌细胞0.3 mM棕榈酸处理12 h的同时用加入10-11M、10-9M、10-7M Ghrelin作用,用R T-PCR法检测AMPK的mR NA表达,用Western blotting法检测p-AMPK蛋白的水平。结果与对照组相比,在0.3 mM PA组中,AMPK mRNA表达未见明显改变,p-AMPK蛋白水平明显降低。与0.3 mM PA组对比,随着给予Ghrelin的浓度逐渐增加,AMPK mRNA表达未见明显改变;p-AMPK蛋白水平逐渐增加并呈剂量反应关系,其中10-7M Ghrelin组p-AMPK蛋白水平增加最为明显。结论高脂环境可以影响大鼠成肌细胞AMPK,且Ghrelin具有保护作用。