肝再生磷酸酶-3和微小RNA17-92家族成员在结肠癌细胞中异常表达的意义

目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)和微小RNA17-92 (miR-17-92)家族成员在结肠癌中异常表达的意义.方法 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo-PRL-3和LoVo-VC,用MicroRNA芯片筛查表达异常的促癌microRNA,从中选取miR-17-92家族成员miR-17、miR-19a行荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证.在LoVo-PRL-3细胞中对STAT3信号传导与转录激活因子-3(STAT3)进行RNA干扰,检测miR-17、miR-19a的表达,在稳转细胞株中转染miR-17、miR-19a或对其进行敲除,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Tanswell试验对细胞增殖侵袭能力的变化进行研究.在13例患者结肠癌原发灶、转移灶及癌旁正常组织中行免疫组织化学及qRT-PCR检测PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达.结果 在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-17、miR-19a的表达明显上调(P＜0.05),干扰STAT3可以抑制miR-17、miR-19a的表达.在LoVo-VC细胞中过表达miR-17、miR-19a促进了细胞的增殖(P＜0.05及P＜0.01)和侵袭(P＜0.01),而在LoVo-PRL-3细胞中敲除miR-17、miR-19a抑制了细胞的增殖侵袭(P＜0.05).在结肠癌组织中PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达呈正相关.结论 PRL-3通过上调miR-17、miR-19a的表达在结肠癌细胞增殖侵袭中起到促进作用.     

microRNA-16在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及预后意义的研究

目的 通过检测microRNA (miR)-16在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓单个核细胞(BMMNCs)中的表达水平,分析miR-16在不同组B-ALL患儿中的表达差异,探讨miR-16在B-ALL的发生发展及预后中的意义.方法 收集2006年10月至2010年10月在青岛大学医学院附属医院儿科和青岛市立医院儿科初诊为B-ALL的36例患儿及12例健康儿童的骨髓标本为研究对象,分别纳入研究组和对照组.对研究组36例B-ALL患儿进行髂后上嵴穿刺获取BMMNCs,最终确诊为B-ALL高危标本为13例,标危标本为23例,分别纳入高危组和标危组.对研究组分别于化疗前、后采集标本进行实时(real-time)荧光定量PCR法检测BMMNCs中miR-16表达.对化疗后miR-16表达明显升高的30例患儿标本,纳入化疗敏感组,其余6例,纳入化疗耐药组(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准).结果 ①miR-16在研究组的表达水平明显低于对照组,高危组明显低于标危组,差异均有统计学意义(P<0.05);② B-ALL患儿化疗后,miR-16表达水平较化疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中以化疗敏感组升高最为明显(P<0.05),化疗耐药组化疗前、后miR-16表达水平比较,差异统计学意义(P>0.05).结论 miR-16低表达在B-ALL发病中发挥着重要作用,与白血病细胞增殖、转移能力和预后密切相关,可作为判断B-ALL患儿预后指标之一.     

甲状腺相关眼病患者外周血单个核细胞中微小RNA-146a的异常表达及意义

目的探讨微小RNA-146a(microRNA-146a,miRNA-146a)在甲状腺相关眼病(throid-associated ophthalmopathy,TAO)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达情况及临床意义。方法收集TAO患者、甲状腺功能亢进症(Graves disease,GD)不伴眼病患者和正常人空腹静脉全血标本各20例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分别检测各组标本PBMC中miRNA-146a的表达情况,并将qRT-PCR产物行凝胶电泳。结果与正常人相比,TAO患者和GD不伴眼病患者PBMC中miRNA-146a相对表达量均明显降低(均为P<0.05),下调率分别为98.02%和67.60%;与GD不伴眼病患者相比,miRNA-146a在TAO患者PBMC中相对表达量更低(P<0.05),下调率为30.40%。qRT-PCR产物行凝胶电泳后证实为miRNA-146a的扩增产物。结论 miRNA-146a的表达下调可能参与了TAO的病理发病机制,可能是治疗TAO的一个新靶点。     

宫颈鳞状细胞癌化疗前后小分子RNA-96的表达变化及其与化疗敏感性的关系

目的 探讨新辅助化疗对宫颈鳞状细胞癌小分子RNA-96(miR-96)表达的影响及其与化疗疗效、敏感性及临床病理特征之间的关系。方法 采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28例(Ⅰb2期～Ⅱa期)宫颈鳞状细胞癌患者新辅助化疗前、后癌组织中miR-96的表达,分析miR-96表达变化与新辅助化疗的疗效、敏感性及其与临床病理特征的关系。结果 RT-PCR 检测miR-96表达的敏感性和特异性良好;新辅助化疗前宫颈癌组织中miR-96的相对表达量是化疗后宫颈癌组织中的(5.330±5.069)倍,差异具有统计学有意义(P=0.000)。化疗前后miR-96的表达变化:中、低分化者(2.345±1.153)低于高分化者(9.941±5.359)(P=0.000);间质浸润深度＜1/2间质者(8.236±5.399)高于≥1/2间质者(1.978±1.030)(P=0.000);有淋巴结转移者(1.848±0.959)明显低于无淋巴结转移者(7.942±5.348)(P=0.000);而年龄≤45岁、＞45岁,临床分期为Ⅰb2期、Ⅱa期者化疗前后miR-96的表达变化差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 新辅助化疗能有效降低宫颈鳞状细胞癌组织中miR-96的表达水平,因此测定化疗前宫颈癌组织中miR-96的表达水平对新辅助化疗疗效及敏感性预测具有一定参考价值。     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

依那普利对压力超负荷诱导的心肌纤维化的影响及microRNA-214的表达变化

目的：探讨压力超负荷导致心肌纤维化过程中microRNA-214的表达变化,以及依那普利对心肌纤维化的影响。方法80只雄性SD大鼠随机分为压力超负荷组（Model,n=40）,假手术组（Sham,n=40）。其中各组再随机分为两个亚组：依那普利治疗组（n=20）与无依那普利治疗组（n=20）。行腹主动脉缩窄术建立心脏压力超负荷大鼠模型。4周后,酶联免疫分析法测定各组大鼠血清中的PICP、ICTP、MMP-2、TIMP-2等心肌纤维化指标,荧光实时定量PCR技术检测的microRNA-214表达变化。结果压力超负荷组大鼠的PICP为（161.3±16.3）ng/L、ICTP为（3.06±0.5）、PICP/ICTP 比值为（51.1±7.3）、MMP-2为（2638.2±289.6）pg/mL、TIMP-2为（4396±365.9）ng/mL,上述指标与假手术相比,均有所增高,差异具有统计学意义（P均＜0.05）;模型组MMP-2/TIMP-2比值为（0.6±0.4）,显著低于假手术组（P＜0.05）,依那普利处理亚组的大鼠PICP为（114.1±19.6）ng/L、ICTP为（2.5±0.7）ng/L、PICP/ICTP比值为（45.1±16.3）、MMP-2为（806.8±301.6）pg/mL、TIMP-2为（2052.6±322.3）,均低于单纯压力超负荷组,异具有统计学意义（P均＜0.05）。依那普利处理亚组MMP-2/TIMP-2比值为（0.88±0.3）,显著高于单纯压力超负荷组,差异具有统计学意义（P均＜0.05）。同时压力超负荷处理会导致microRNA-214的表达相对于假手术组增高（2.1±0.3）倍,依那普利处理可以缓解压力超负荷引起的microRNA-21过表达,但仍为假手术组的（1.5±0.2）倍。结论依那普利可以缓解压力超负荷造成的心肌纤维化,microRNA-214与此过程有关,可作为心肌纤维化的治疗靶点或标志物。     

非小细胞肺癌患者癌组织和血浆中microRNA-21的表达及意义

目的探讨microRNA-21(miRNA-21,miR-21)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和血浆中的表达及临床意义。方法用荧光定量PCR检测100例NSCLC患者肺癌组织及癌旁组织miR-21的相对表达量,并检测100例NSCLC患者及100例健康人血浆miR-21的相对表达量,用t检验比较其表达水平的差异,用卡方检验分析肺癌组织miR-21表达量与各临床病理资料之间的关系,ROC曲线评价miR-21对NSCLC的诊断价值。结果 miR-21在肺癌组织的表达水平高于癌旁组织(t=10.154,P0.05),且在NSCLC患者血浆中的表达水平高于健康人(t=13.444,P0.05);肺癌组织中miR-21高表达患者肺癌复发转移率明显高于低表达患者(χ2=11.335,P0.05);生存分析显示,肺癌组织或血浆中miR-21高表达患者较低表达者生存期明显缩短(χ2为6.685和5.692,P0.05);ROC曲线表明,miR-21对NSCLC诊断价值中等。结论 miR-21在NSCLC患者癌组织及血浆中均有高表达,肺癌组织miR-21高表达与NSCLC复发转移具有密切关系,可作为NSCLC诊断及评价预后的指标。     

microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响

目的探究microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响。方法将microRNA-34a NC、microRNA-34a inhibtor、microRNA-34a mimic分别转染至U87脑胶质瘤细胞,依次设为NC组、miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组,比较三组脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭、迁移情况,荧光素活性,VEGF mRNA与蛋白表达情况。结果转染后,miR-34a mimic组细胞增值抑制率高于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05);转染48 h后,miR-34a mimic组细胞侵袭、迁移能力低于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05),miR-34a inhibtor组高于NC组(P0.05);转染48 h后,miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组VEGF mRNA、蛋白相对水平分别高于、低于NC组[mRNA:(2.34±0.32)、(0.49±0.03)vs(1.00±0.06);蛋白:(2.42±0.16)、(0.43±0.06)vs(1.00±0.10)](F=256.230、83.750,均P0.05)。结论 microRNA-34a可以抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制VEGF基因表达有关。[国际神经病学神经外科学杂志, 2021, 48(2):143-148]     

Clinical significance of serum miR-21 in old and young patients with acute myocardial infarction

Background There may be dysregulation of circulating microRNAs in acute myocardial infarction （AMI）, which is an aging-related process. However, the difference between young and elderly people in expression level of circulating miR-21 in AMI patients has not been investigated. Methods The study included 72 consecutive patients with AMI. The group I consisted of 43 patients aged equal to or above 65 years and the group II consisted of 29 patients aged equal to or below 45 years. Real-time RT-PCR was applied to detect serum miR-21 expression levels at the time of mechanical reperfusion and 12 h, D1, D3 and D7 after PCI, respectively. Results The expression level of miR-21 in AMI patients increased markedly 12 h after PCI and reached the peak at D1 after PCI in both groups. There was no difference of miR-21 expression between Group I and U at the time of mechanical reperfusion （5.12 _＋ 0.73 vs. 4.98 ＋ 0.87） and D7 after PCI （1.28 __ 0.75 vs. 1.94 ＋ 0.89）, However, group I patients exhibited higher miR-21 expression level than group I1 at 12 h （7.96 ＋ 0.78 vs. 4.23 0.77, P 〈 0.05）, D1（9.32 __ 0.89 vs. 6.12 __ 0.92, P 〈 0.05） and D3 （4.78 __ 0.91 vs. 2.97 _＋ 0.77, P 〈 0.05） after PCI, respectively. Conclusion Our data reveal an increase of miR-21 in patients with AMI may be a mechanism of myocardial ischemia reperfusion injury. The expression of miR-21 was related to the development and progression of AMI, and there is an age-related change in the expression of miR-21 in acute myocardial infarction patients.     

MicroRNA-193b在初治白血病患者的表达及意义

本研究旨在检测白血病患者microRNA-193b(miR-193b)的表达水平并探讨其意义。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者miR-193b的相对表达水平,分析其在不同类型白血病中的表达差异及其与部分实验室指标和化疗反应的关系。结果表明:慢性髓系白血病(CML)和急性早幼粒细胞白血病(APL)患者与正常对照组miR-193b的表达相比,其差异均无统计学意义(P>0.05);AML(除外APL)、ALL患者miR-193b的表达均低于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。在AML(除外APL)患者中,miR-193b表达水平与患者外周血白细胞计数及细胞CD34表达无明显相关,但是与患者的治疗反应呈负相关(P<0.05)。结论:AML(除外APL)患者中miR-193b表达水平可能与AML细胞的化疗敏感性相关。miR-193b可能是AML(除外APL)治疗的一个新靶点。