Progressive CD127 down‐regulation correlates with increased apoptosis of CD8 T cells during chronic HIV‐1 infection

Chronic HIV‐1 infection can induce a significant decrease in CD127 expression on CD8 T cells, but the underlying mechanisms and immunological consequences are unclear. In this study, we investigated CD127 expression on CD8 T cells from a total of 51 HIV‐1‐infected subjects and 16 healthy individuals and analyzed the association between CD127 expression and CD8 T‐cell apoptosis in these HIV‐1‐infected subjects. We found that CD127 expression on total CD8 T cells was significantly down‐regulated, which was correlated with the increased CD8 T‐cell apoptosis and disease progression of chronic HIV‐1 infection. The in vitro addition of IL‐7 efficiently rescued the spontaneous apoptosis of CD8 T cells from HIV‐1‐infected individuals. IL‐7 stimulation also transiently down‐regulated CD127 expression, whereas some of the CD127^? CD8 T cells regained CD127 expression soon after IL‐7 was retracted from the incubation medium. Thus, IL‐7 stimulation reduced apoptosis of both CD127⁺ and CD127^?CD8 T cells to some degree. These data indicate that CD127 loss might impair IL‐7 signaling and increase CD8 T‐cell apoptosis during HIV‐1 infection. This study, therefore, will extend the notion that IL‐7 could be a good candidate for immunotherapy in HIV‐1‐infected patients.     

反义miRNA-221/222上调p27kip1抑制胶质瘤细胞生长的体外研究

目的 探讨敲低miRNA-221/222表达上调p27kip1抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长的效果及机制.方法 脂质体共转染反义miRNA-221/222下调U251人脑胶质瘤细胞株miRNA-221、miRNA-222的表达.使用Northern blot方法 鉴定转染后U251细胞miRNA-221、miRNA-222表达水平下调;MTT法评价反义miRNA-221/222抑制U251细胞生长效果;流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布;Western blot分析p27kip1蛋白的表达变化.结果 Northern blot显示反义miRNA-221/222共转染组使miRNA-221、miRNA-222的表达水平明显下降.反义miRNA-221转染组仅使miRNA-221的表达水平明显下降,反义miRNA-222转染组仅使miRNA-222的表达水平明显下降.转染无意序列组及对照组的miRNA-221、miRNA-222表达水平没有改变.MTT结果 显示反义miRNA-221/222共转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组、转染无意序列组、转染反义miRNA-221组、转染反义miRNA-222组.流式细胞术检测可见反义miRNA-221/222共转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞且明显高于其他各组.Western blot显示反义miRNA-221/222共转染组的p27kip1蛋白表达明显上调.结论 反义miRNA-221/222通过上调p27kip1蛋白表达来抑制胶质瘤细胞U251的生长.     

miRNA-22在脂肪基质细胞体外脂向分化过程中的表达

背景：脂肪基质细胞在特定条件下可以向脂肪细胞分化, 然而,脂肪基质细胞脂向分化的分子机制仍不明确！ 目的：明确miRNA在脂肪基质细胞脂向分化过程中是否发挥作用及其可能机制。 设计、时间及地点：观察对照试验,于2007-10/2008-03在四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成。 材料：出生30 d健康雄性SD幼鼠8只,取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞。 方法:采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养。建立脂肪基质细胞体外脂向分化细胞模型,采用miRNA芯片技术筛选脂肪基质细胞向脂肪细胞方向分化的相关miRNA,使用实时定量聚合酶链反应技术对芯片结果进行验证。 主要观察指标：①细胞形态学。②PPARγ免疫细胞化学染色和油红O染色。③miRNA芯片结果。④实时定量聚合酶链反应结果。 结果: ①经显微镜下观察、油红O染色及PPARγ免疫细胞化学染色检测证实脂肪基质细胞已经脂向分化。②miRNA芯片发现诱导组中miRNA-22的表达量呈下降趋势。③实时定量聚合酶链反应结果证实miRNA-22的表达量与对照组相比显著减少(P < 0.05)。 结论: miRNA-22在脂肪基质细胞脂向分化后的表达有显著降低,提示miRNA-22可能参与脂肪基质细胞的脂肪分化调控过程,生物信息学分析提示,该过程可能通过对其靶基因MAPK7(ERK5)的调控而实现。     

miRNA-122a靶基因预测及生物信息学分析

目的:利用基因芯片技术分析肝癌HepG2细胞和正常肝上皮LO2细胞中miRNA的表达,并对HepG2细胞中低表达的miRNA-122a进行靶基因预测及相关生物信息学分析,为以miRNA-122a为靶点的基因治疗提供理论和实验基础.方法:利用基因芯片技术检测HepG2细胞和LO2细胞中miRNA-122a表达水平,通过生物信息学预测miRNA-122a的靶基因,并对其靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway-analysis)和蛋白质相互作用网络分析.结果:与LO2细胞比较,miRNA-122a在HepG2细胞中呈低表达.miRNA-122a预测靶基因有1 104个,其靶基因集合功能分别富集于碳水化合物生物合成、核苷酸代谢、细胞因子受体结合、细胞周期等生物学过程(P<0.001);信号转导通路显著富集于JAK-STAT信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、ErbB信号通路、细胞周期等信号转导通路(P<0.001).结论:miRNA-122a在HepG2细胞中呈现低表达,miRNA-122a预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

miRNA-21与肿瘤相关研究新进展

小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程.研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关.本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述.     

纳布啡通过调控 miR-4301/BRD4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨纳布啡对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 本研究时间为2019年1—7月.肝癌细胞株Huh7购自美国ATCC,将Huh7细胞分为对照组、不同浓度纳布啡(50μmol、100μmol、200μmol)组、微小RNA-4301(miR-4301)组、miR-4301模拟物阴性对照(miR-NC)组、纳布啡+miR-4301抑制表达载体(anti-miR-4301)组、纳布啡+miR-4301抑制表达载体阴性对照(anti-miR-NC)组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测Huh7细胞的增殖抑制率;Transwell检测Huh7细胞的迁移和侵袭数;蛋白质印迹检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和溴结构域蛋白4(BRD4)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-4301和BRD4 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-4301和BRD4的靶向关系.结果 与对照组相比,不同浓度纳布啡组Huh7细胞抑制率升高[(11.25±1.12)％、(22.63±2.25)％、(37.65±3.74)％比(0.00±0.01)％],迁移数减少[(79.32±7.38)个、(61.36±5.48)个、(45.69±5.37)个比(98.63±9.54)个],侵袭数减少[(67.53±6.65)个、(53.41±5.22)个、(37.64±3.87)个比(81.36±8.13)个],p21表达水平升高,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,miR-4301表达水平升高,BRD4mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),且呈浓度依赖性.与miR-NC组相比,miR-4301组Huh7细胞抑制率升高[(31.25±3.15)％比(6.32±0.63)％],迁移数减少[(52.33±5.26)个比(96.32±9.54)个],侵袭数减少[(41.69±4.32)个比(83.15±8.33)个],p21表达水平升高,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低(均P<0.05).miR-4301靶向调控BRD4的表达,抑制miR-4301表达逆转了纳布啡对Huh7细胞的作用.结论 纳布啡可抑制肝癌Huh7细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-4301和BRD4有关.     

外周血miRNA-150与CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞在儿童免疫性血小板减少症中的变化及意义

目的探讨外周血miRNA-150与CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞在儿童免疫性血小板减少症（ITP）中变化及意义。 方法选取南通大学附属妇幼保健院在2017年3月至2020年9月接受诊治的ITP患儿93例,其中新诊断ITP患儿（病程＜3个月）56例,持续性ITP患儿（病程3~12个月）37例。另选取本院同期健康体检儿童50例作为对照组。采用实时荧光定量PCR反应测定外周血miRNA-150表达,采用流式细胞术测定CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达。 结果ITP患儿外周血miRNA-150表达高于对照组,且CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率低于对照组（P＜0.05）。持续性ITP组外周血miRNA-150表达高于新诊断ITP组,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率低于新诊断ITP组（P＜0.05）。全反应（CR）组外周血miRNA-150表达低于反应（R）组和无效（NR）组,且R组低于NR组（P＜0.05）。CR组CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率高于R组和NR组,且R组高于NR组（P＜0.05）。外周血miRNA-150对ITP诊断敏感度和特异度分别为78.18%和60.53%;CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达对ITP诊断敏感度和特异度分别为83.63%和71.05%。miRNA-150与PLT呈负相关（r=-0.738）,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞与PLT呈正相关（r=0.796）。 结论外周血miRNA-150在ITP患儿中高表达,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞在ITP患儿中低表达,且外周血miRNA-150和CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达与疗效密切相关。     

人乳头瘤病毒16型长控制区域上YY1位点的缺失可增强病毒对小鼠纤维细胞的转化能力

目的人乳头瘤病毒（Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）１６型早期启动子Ｐ９７控制着病毒癌基因的表达。为了观测长控制区（Ｌｏｎｇｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ，ＬＣＲ）上ＹＹ１结合位点的破坏对病毒转化能力的影响。方法构建了带有自然发生突变ＬＣＲ序列的ＨＰＶ１６全基因质粒，利用ＥＭＳＡ和荧光素酶实验检测小鼠纤维细胞胞核内源性ＹＹ１蛋白存在和功能状态；将标准及突变的ＨＰＶ１６毒株转染至Ｃ１２７细胞进行软琼脂糖培养基生长实验。结果与上皮类细胞相似，在Ｃ１２７胞核提取物中可检出ＹＹ１蛋白，并且具有良好的ＤＮＡ结合功能和Ｐ９７活性抑制作用。转化实验显示ＹＹ１位点突变ＨＰＶ１６毒株可在软琼脂糖培养基上形成２～１０倍量多的生长集落。结论细胞转录调节因子ＹＹ１存在于啮齿类动物纤维细胞胞核中；ＬＣＲ上ＹＹ１结合位点的破坏可在完整基因组范围内明显增强病毒对小鼠纤维细胞的转化能力。     

Polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer gels as sustained release vehicles for subcutaneous drug administration

Polyoxyethylene-polyoxypropylene surface-active block copolymers (Pluronic^®) were evaluated as a vehicle for subcutaneous administration of drugs using a phenolsulfophthalein (PR) as a tracer. The type of Pluronic^® copolymer (F108 or F127), and their concentrations, and the effect of solutes (NaOH, NaCl or PR) on gelation properties were studied. Sodium hydroxide and sodium chloride decreased the gel-sol transition temperature, whereas the opposite effect was observed with PR. The ‘in vitro’ release rates obtained for PR were inversely proportional to the concentration of Pluronic used and a zero-order release rate was observed in all preparations assayed. Pluronic^® F127/PR preparations were administered subcutaneously (SC) to Wistar rats and PR plasma levels were compared with those reached after SC or intravenous (i.v.) administration of a PR aqueous solution. The gel formulation produced a sustained plateau level within 15 min that lasted 8–9 h. In vivo data analysis was performed with the JANA and PCNONLIN computer programs. The best fittings for experimental data from Pluronic gels were obtained using a zero-order input and first-order output two-compartment model. The results obtained suggest that PF127 aqueous gels may be of practical use as a vehicle for SC administration of drugs.