[125I], [127I]‐and [14C]‐Labelling of the GLP‐1‐(7‐37) derivative NN2211

Arg³⁴Lys²⁶(N^ε‐(γ‐L ‐glutamyl(N^α‐palmitoyl)))‐GLP‐1(7‐37) (NN2211) is currently in development as a diabetes type 2 drug. The fatty acid attached to the GLP‐1(7‐37) ensures a long and controlled duration of action. The synthesis of [¹²⁵I]NN2211, [¹²⁷I]NN2211 and [¹⁴C]NN2211 used for preclinical ADME studies are described. NN2211 was iodinated using the lactoperoxidase/hydrogen peroxide method, and [¹⁴C]NN2211 was synthesized in 4 steps by two routes both starting from an α‐protected [U‐¹⁴C]glutamic acid. Copyright © 2003 John Wiley & Sons, Ltd.     

基于HSV-1型特异性表位的血清抗体ELISA检测方法建立与初步应用评价

目的建立并评价HSV-1型特异性抗体鉴别诊断的ELISA方法。方法以HSV-1-gG112-127型特异性表位的串联重组表达蛋白作为包被抗原,建立检测血清HSV．1特异性IgG的间接ELISA方法。同时以免疫印迹检测作为“金标准”,评价检测方法的真实性和可靠性。结果采用棋盘法确定了包被抗原、抗体的最佳浓度,建立ELISA检测方法。血清特异性IgG检测的灵敏度为91％,特异度为97．6％,阳性预测值为97％,阴性预测值为93％,符合率为94．5％,试验的一致率为98％。结论用串联重组蛋白作为包被抗原对HSV-1感染的血清进行ELISA分型检测,其特异性好。     

miR-155在结肠癌组织中表达的临床病理意义

目的:探讨结肠癌组织及细胞株中microRNA-155(miR-155)表达的临床病理意义.方法:采用RT-qPCR检测40例结肠癌组织及癌旁组织、结肠癌细胞株中miR-155的mRNA的表达,并对其临床病理指标进行分析,分析抑制miR-155表达对结肠癌细胞增殖、克隆形成及凋亡影响.结果:RT-qPCR检测结果表明40例结肠癌组织中miR-155相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.01).不同分化结肠癌细胞miR-155相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中低分化结肠癌细胞中表达均高于中、高分化结肠癌细胞(P<0.05~P<0.01).miR-155的异常高表达与病人肿瘤较大、分化程度差、淋巴结发生转移情况及远处有转移均有关(P<0.05~P<0.01),而与年龄和性别无关(P>0.05).抑制miR-155可明显抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成.结论:结肠癌组织中高表达miR-155可以作为预测恶性程度、淋巴转移的有效指标,miR-155在结肠癌病人的临床靶向治疗中具有一定的价值.     

金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测miRNA-721

目的 构建一种自催化发夹组装（CHA）无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法 首先在金纳米颗粒（AuNPs）表面修饰5-羧基荧光素（FAM）标记的DNA发夹探针H1,H1的荧光被金纳米粒子猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNPs上的H1标记荧光素远离AuNPs而发射荧光,随后H1和H2之间发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将20 μL探针AuNPs-H1,50 μL 3 μmol/L探针 H2（退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L NaCl,5 mmol/L MgCl2,pH 7.4）,与50 μL不同浓度的miRNA-721（0.1 ~ 5 μmol/L）在30℃下共反应20 min,最后在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果 以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下得到520 nm处的相对荧光强度变化值（?F = F – F0）与miRNA-721浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程?F = 29232lgC – 52435（R2 = 0.9910）。该荧光法检测限为1.23 nmol/ L。在正常人血清中的加标回收率为92.71% ~ 104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论 该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠乳腺癌研究

目的 探讨C127细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠乳腺癌活性,并将C127细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(C127-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对C127荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用.方法 从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒,巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对C127细胞、MA782细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用C127-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较.结果 ①C127-DC-TIL具有很强的对C127细胞杀伤活性[杀伤率为(70.21±2.86)%],明显高于其对MA782和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(51.31±3.25)%,(31.41±2.65)%],也明显高于未经DC激活的TIL、C127-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对C127细胞杀伤活性[杀伤率分别为(48.30±2.97)%,(47.76±3.43)%和(17.23±2.56)%]和对MA782细胞杀伤活性[杀伤率分别为(38.52±2.87)%,(36.62±2.75)%和(18.07±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(25.38±2.63)%,(24.82±2.81)%和(17.34±2.81)%],同时B16细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(B16-DC-TIL,TIL来源于C127瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性.②C127-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性分别为(32.21±1.24)%、(30.35±1.72)%和(37.43±1.54)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF水平为(38.41±1.77)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、C127-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P＜0.01).该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制.结论 ①C127-DC-TIL可产生很强的体外针对C127细胞的特异性杀伤活性.②C127-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠乳腺癌作用.     

CD127和HIV-1感染的免疫关系

发生HIV-1感染时,患者体内IL-7表达水平升高的同时,T细胞表面CD127(IL-7受体α链)表达水平也下降,并出现调控恢复能力的减弱,提示CD127的表达水平和艾滋病的疾病进程存在某种联系.在HIV-1感染三种分型(急性HIV感染、慢性HIV感染、长期无进展HIV感染)中,CD127的表达和功能改变存在一定的差异,能部分为HAART所逆转,但在三型HIV-1感染者治疗上取得的效果有一定差异.此文就近年来的相关研究进展进行了综述.     

脓毒症患者调节性T细胞与CD64指数的相关性研究

目的 探讨CD4+ CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+在脓毒症发生发展中的作用.方法 流式细胞术检测脓毒症患者(其中生存组17例,死亡组11例)CD4+ CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+、CD64指数,同时测定白细胞数(WBC)和C-反应蛋白(CRP)的水平,并与正常对照组比较.结果 脓毒症组CD4+ CD25+/highCD127 low/-、CD64指数均明显高于正常对照组,CD14+ HLA-DR+明显低于正常对照组;动态观察结果显示,随着疾病的进展,生存组CD4+ CD25+highCD127low/-、CD64指数均明显回落,而死亡组两者却持续升高;而CD14+ HLA-DR+刚好相反,生存组CD14+HLA-DR+逐渐升高,死亡组CD14+ HLA-DR+明显低于存活组,且持续处于低水平状态;相关性分析显示,CD4+ CD25+/high CD127low/-与CD64指数、CRP正相关;CD14+ HLA-DR+与CD64指数、CRP明显负相关;CD54指数与WBC、CRP正相关.结论 CD4+CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+与疾病感染和炎症严重程度密切相关,可作为疾病严重程度及预后的指标.     

乳腺肿瘤患者血清miRNA-222、miRNA-21检测的临床意义

目的 探讨血清miRNA-222、miRNA-21水平对于乳腺肿瘤患者的临床意义.方法 选择经病理确诊并分类的35例乳腺癌患者和32例乳腺良性肿瘤患者;同时选35例女性健康体检者作为对照.采用RT-PCR的方法测定所有受试者的血清miRNA-222、miRNA-21的相对表达水平,分析血清miRNA-222、miRNA...     

CD4+Foxp3+ regulatory T cells converted by rapamycin from peripheral CD4+CD25− naive T cells display more potent regulatory ability in vitro

Background Rapamycin （RAPA） is a relatively new immunosuppressant drug that functions as a serine/threonine kinase inhibitor to prevent rejection in organ transplantation. RAPA blocks activation of T-effector （Teff） cells by inhibiting the response to interleukin-2. Recently, RAPA was also shown to selectively expand the T-regulator （Treg） cell population. To date, no studies have examined the mechanism by which RAPA converts Teff cells to Treg cells. Methods Peripheral CD4＋CD25- naive T cells were cultivated with RAPA and B cells as antigen-presenting cells （APCs） in vitro. CD4＋CD25- T cells were harvested after 6 days and analyzed for expression of forkhead box protein 3 （Foxp3） using flow cytometry. CD4＋CD25＋CD127- subsets as the converted Tregs were isolated from the mixed lymphocyte reactions （MLR） with CD127 negative selection, followed by CD4 and CD25 positive selection using microbeads and magnetic separation column （MSC）. Moreover, mRNA was extracted from converted Tregs and C57BL/6 naive CD4＋CD25＋ T cells and Foxp3 levels were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction （rt-PCR）. A total of 1×105 carboxyfluorescein succinimidyl ester （CFSE）-labeled naive CD4＋CD25- T cells/well from C57BL/6 mice were cocultured with DBA/2 or C3H maturation of dendritic cells （mDCs） （0.25×105/well） in 96-well round-bottom plates for 6 days. Then 1×105 or 0.25×105 converted Treg cells were added to every well as regulatory cells. Cells were harvested after 6 days of culture and analyzed for proliferation of CFSE-labeled naive CD4＋CD25- T cells using flow cytometry. Data were analyzed using CellQuest software.Results We found that RAPA can convert peripheral CD4＋CD25- naive T Cells to CD4＋Foxp3＋ Treg cells using B cells as APCs, and this subtype of Treg can potently suppress Teff proliferation and maintain antigenic specificity. Conclusion Our findings provide evidence that RAPA induces Treg cell conversion from Teff cells and uncovers an additional mechanism for tolerance induction by RAPA.     

长链非编码 RNALOC100288637在原发性肝癌中差异性表达的生物学意义及相关机制研究

目的：研究长链非编码 RNA （LncRNA ） LOC100288637在肝癌中的表达差异,对肝癌细胞增殖的影响及相关机制。方法分析GEO数据集GSE58043和GSE10694,得出LOC100288637及hsa‐miR‐101‐3p在肝癌组织中差异表达,RNA‐hy‐brid分析LOC100288637与hsa‐miR‐101‐3p的结合具有可能性。逆转录‐聚合酶链式反应在组织和细胞水平检测LOC100288637表达量。荧光原位杂交观察LOC100288637在细胞中的定位。敲低LOC100288637后CCK‐8检测细胞增殖情况。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,检测 LOC100288637的变化。结果 LOC100288637在肝癌组织中的表达量高于癌旁组织（ P＜0．05）;LOC100288637在肝癌细胞系中的表达量高于肝细胞系（P＜0．05）。LOC100288637在 HepG2细胞核质均有表达,以细胞质居多。敲低LOC100288637后 HepG2细胞增殖活性降低（P＜0．01）。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,LOC100288637表达量下降（P＜0．05）。结论 LncRNA LOC100288637可能在肝癌发生,发展过程中起重要作用并接受hsa‐miR‐101‐3p靶向调控影响肝癌细胞的增殖。