鼻咽癌患者血清中miR-141-3p和miR-155-3p的表达水平及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p的表达水平及临床意义.方法:选取2017年01月至2020年09月我院收治的95例鼻咽癌患者和45例健康对照组作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p及miR-155-3p表达水平.应用受试者工作特征(receiver opera...     

miR-124在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨miR-124在宫颈癌中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响。方法:收集宫颈癌组织和癌旁组织各13例,qRT-PCR法检测miR-124的表达,免疫组化检测STAT3的表达。生物信息学技术预测miR-124的靶基因,双荧光素酶报告基因、qRT-PCR、Western blot实验验证。每种宫颈细胞随机分为三组,一组转染miR-124 mimics,一组不转染,一组转染miR-124 inhibitor。CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果:miR-124在宫颈癌组织和细胞系中表达均降低(P均＜0.05),STAT3在宫颈癌组织中的表达明显增高(P<0.05)。STAT3是miR-124的直接靶基因,miR-124可靶向调节STAT3的mRNA和蛋白表达水平(P均＜0.05)。在Hela及Siha细胞中,miR-124 mimics转染组细胞增殖及迁移能力均降低(P均＜0.05),miR-124 inhibitor转染组细胞增殖及迁移能力均增加（P均＜0.05)。结论:miR-124在宫颈癌中低表达,可能通过靶向调节STAT3表达抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力。     

上皮性卵巢癌血清miR-1294及miR-4443的表达及其与预后的关系

目的:探讨上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）患者血清miR-1294及miR-4443的表达水平及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取我院2015年1月至2017年12月收治的106例EOC患者作为EOC组,另选取90例卵巢良性肿瘤患者作为良性组和60例正常健康女性作为对照组,检测血清miR-1294及miR-4443表达水平。以miR-1294及miR-4443的最佳截断值为标准将EOC患者分为高miR-1294组（n=33）、低miR-1294组（n=73）和高miR-4443组（n=36）、低miR-4443组（n=70）。EOC患者预后不良的危险因素应用单因素及多因素COX回归模型进行分析。结果:血清miR-1294表达水平（0.48±0.13 vs 1.16±0.57、1.21±0.62）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。血清miR-4443表达水平（0.71±0.18 vs 1.36±0.64、1.45±0.70）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。miR-1294和miR-4443高表达组的EOC患者临床分期、分化程度、淋巴结转移及腹膜转移与miR-1294和miR-4443低表达组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示,EOC患者生存期短与miR-1294及miR-4443低表达有关（P<0.001）。多因素分析显示,EOC患者预后不良的独立危险因素为淋巴结转移［HR（95%CI）=1.885（1.206～4.118）］、腹膜转移［HR（95%CI）=3.106（2.315～6.226）］、miR-1294＜0.73［HR（95%CI）=2.614（1.865～5.512）］及miR-4443＜1.04［HR（95%CI）=1.975（1.508～4.903）］。结论:miR-1294及miR-4443的低表达与EOC患者生存期短有关,是EOC患者预后预测的生物标志物。     

miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的机制研究

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的作用机制。方法:构建小鼠H22肝癌腹水模型。造模两周后处死小鼠并分离出脾脏组织,流式细胞术分析肝癌腹水组（MA组）与正常对照组（Control 组）小鼠脾脏Th9细胞表达水平。ELISA法检测脾脏IL-9表达水平。RT-PCR法检测脾脏miR-145表达水平。Western Blot法检测脾脏中PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α相关蛋白表达水平。分选小鼠脾脏CD4+T细胞,随机分为miR-145 mimics组和NC组,分别应用miR-145-5P mimics、阴性对照寡核苷酸（negative control,NC）进行转染,RT-PCR检测各组miR-145、HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达水平。结果:与Control 组相比,MA组Th9细胞及其细胞因子IL-9表达均升高（P<0.05）,miR-145表达降低（P<0.05）,p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α蛋白均升高（P<0.05）。与NC组相比,miR-145 mimics组miR-145显著升高,HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达下降。结论:肝癌腹水中Th9细胞升高可能与miR-145下降导致的PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α通路激活有关。     

lncRNA FOXD2-AS1通过靶向miR-506-5p调控宫颈癌细胞增殖与凋亡

[摘要] 目的: 探讨长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1 是否通过靶向miR-506-5p 调控宫颈癌细胞增殖和凋亡。方法:体外培养人宫颈癌细胞系HeLa、Siha、Caski 与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,用qPCR检测细胞中FOXD2-AS1 和miR-506-5p 的表达水平。用脂质体转染技术分别构建抑制FOXD2-AS1 表达和过表达miR-506-5p 的宫颈癌细胞,用MTT实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况,WB实验检测细胞中增殖相关蛋白CyclinD1、p21 和p27 及凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX和cleaved-capase-3的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXD2-AS1 是否靶向miR-506-5p,并分析同时抑制FOXD2-AS1 和miR-506-5p 表达对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。结果：与Ect1/E6E7 细胞比较,宫颈癌HeLa、Siha 和Caski 细胞中FOXD2-AS1 表达水平显著升高,miR-506-5p 表达水平降低（均P<0.01）。抑制FOXD2-AS1 表达可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1 蛋白和Bcl-2 蛋白表达,并促进p21、p27 和BAX、cleaved-capase-3 蛋白的表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡（均P<0.01）。过表达miR-506-5p 可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1 和Bcl-2 蛋白表达,促进p21 和BAX蛋白表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实宫颈癌细胞中FOXD2-AS1 靶向负调控miR-506-5p 的表达（P<0.01）。抑制miR-506-5p 表达逆转了抑制FOXD2-AS1 表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论: FOXD2-AS1 通过靶向miR-506-5p 的表达调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡。     

上调miR-145表达抑制卵巢癌HO8910细胞侵袭、迁移及促进TβR-Ⅱ蛋白表达

目的:探究微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对卵巢癌(ovarian cancer,OC)HO8910细胞侵袭、迁移及TβR-Ⅱ蛋白水平的影响.方法:将某大学研究实验室细胞库提供的OC细胞HO8910分为ZW组(无转染HO8910细胞)、ZN组(转染miR-145-NC)、YJ组(转染miR...     

沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤增殖和迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44增殖、迁移和侵袭的影响及其可能作用机制。方法:收集病理确诊且临床资料完整的视网膜母细胞瘤组织标本25例,同时选取因外伤摘除眼球的正常视网膜组织9例为对照;qRT-PCR法检测正常视网膜组织、视网膜母细胞瘤组织、人正常视网膜血管内皮细胞ACBRI-181、视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44中DLGAP1-AS2、miR-1193的表达量;将si-NC、si-DLGAP1-AS2、miR-NC、miR-1193 mimic、si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor(共转染)分别转染至HXO-Rb44细胞;双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS2与miR-1193的靶向关系;CCK-8法、平板克隆形成实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成数、迁移及侵袭;Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:视网膜母细胞瘤组织中DLGAP1-AS2的表达量高于正常视网膜组织(P<0.05),而miR-1193的表达量低于正常视网膜...     

miR-320-3p 调控脂肪细胞分化的研究

目的探讨miR-320-3p 对脂肪细胞分化的影响。方法分离并培养小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,并对其进行脂肪细胞诱导分化3 d,用qRT-PCR 检测miR-320-3p 在成脂分化过程中的表达水平。在骨髓基质细胞系 ST2 中转染miR-320-3p,对其进行成脂方向诱导分化,用油红O 染色和qRT-PCR 检测miR-320-3p 对ST2 成脂分化的影响。结果MSCs 向脂肪细胞分化过程中miR-320-3p 表达增加（P < 0.01）;与转染阴性对照NC mimics 相比,ST2 细胞转染miR-320-3p mimics 后油红O 染色显示脂肪细胞明显增多,脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT 增强子结合蛋白α（C/EBPα）和脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4（FABP4）基因表达显著升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-320-3p 可促进ST2 向脂肪细胞分化。     

信号转导及转录激活因子4（STAT4）介导的circ_0001879表达对高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨信号转导及转录激活因子4（STAT4）介导的circ_0001879表达对高糖处理的人视网膜微血管内皮细胞(HREC)增殖和凋亡的影响。方法　将HREC分为正常组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（25.0 mmol·L^-1葡萄糖）和甘露醇对照组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖+19.5 mmol·L^-1甘露醇）,继续培养。将高糖组细胞进一步分组,进行相应转染处理。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞circ_0001879、miR-338和多效生长因子（PTN）的表达。通过MTT、流式细胞术分析circ_0001879调控miR-338/PTN对HREC增殖和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告实验确定miR-338和circ_0001879、miR-338和PTN之间的相互作用;ChIP实验验证STAT4与circ_0001879的结合。结果　与甘露醇对照组HREC中 circ_0001879（1.21±0.13）、miR-338（0.99±0.08）和PTN（1.12±0.11）的表达相比,高糖组HREC中circ_0001879（2.93±0.21）和PTN（3.62±0.33）的表达显著升高,而miR-338（0.44±0.05）的表达降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。通过MTT和流式细胞术检测各组细胞增殖活力和凋亡率,结果显示,过表达miR-338能够抑制高糖处理的HREC的增殖活力,促进HREC凋亡,而敲减miR-338的表达则作用相反;miR-inhibitor对高糖处理的HREC的作用能够被si-circ部分抑制。双荧光素酶报告实验结果显示,PTN是miR-338的一个靶基因,且其表达受miR-338和circ_0001879的影响。ChIP实验结果显示,STAT4与circ_0001879启动子区域的B1、B3结合,STAT4能够与circ_0001879的启动子结合并且促进circ_0001879的转录。结论　STAT4能够激活circ_0001879的转录,circ_0001879进一步通过调节miR-338/PTN轴促进高糖条件下HREC增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-101下调c-met的表达提高宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 探讨miR-101与宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的关系并研究其机制。方法 流式细胞术分选Hela细胞系的肿瘤干细胞。荧光定量PCR检测Hela肿瘤干细胞中miR-101的表达水平。MTT法检测Hela肿瘤干细胞在5-氟尿嘧啶和miR-101处理下的细胞活力。Western blot试验检测5-氟尿嘧啶和miR-101对Hela肿瘤干细胞c-met表达水平,PI3K、AKT磷酸化水平及caspases 活化水平的影响。流式细胞术检测Hela肿瘤干细胞在5-氟尿嘧啶和miR-101处理下的凋亡率。结果 Hela干细胞中miR-101的表达水平相较Hela非干细胞细胞显著下降。Hela干细胞转染miR-101后,其对5-氟尿嘧啶的敏感性显著上升。Western blot试验显示miR-101能显著降低Hela肿瘤干细胞的c-met蛋白表达水平,表明c-met是miR-101的靶点。western blot流式细胞实验结果表明在Hela肿瘤干细胞中,miR-101通过下调c-met的表达抑制PI3K和AKT的磷酸化,从而提高Hela肿瘤干细胞对5-氟尿嘧啶依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 miR-101通过下调c-met的表达提高宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。