上调miR-145表达抑制卵巢癌HO8910细胞侵袭、迁移及促进TβR-Ⅱ蛋白表达

目的:探究微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对卵巢癌(ovarian cancer,OC)HO8910细胞侵袭、迁移及TβR-Ⅱ蛋白水平的影响.方法:将某大学研究实验室细胞库提供的OC细胞HO8910分为ZW组(无转染HO8910细胞)、ZN组(转染miR-145-NC)、YJ组(转染miR...     

miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的机制研究

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的作用机制。方法:构建小鼠H22肝癌腹水模型。造模两周后处死小鼠并分离出脾脏组织,流式细胞术分析肝癌腹水组（MA组）与正常对照组（Control 组）小鼠脾脏Th9细胞表达水平。ELISA法检测脾脏IL-9表达水平。RT-PCR法检测脾脏miR-145表达水平。Western Blot法检测脾脏中PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α相关蛋白表达水平。分选小鼠脾脏CD4+T细胞,随机分为miR-145 mimics组和NC组,分别应用miR-145-5P mimics、阴性对照寡核苷酸（negative control,NC）进行转染,RT-PCR检测各组miR-145、HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达水平。结果:与Control 组相比,MA组Th9细胞及其细胞因子IL-9表达均升高（P<0.05）,miR-145表达降低（P<0.05）,p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α蛋白均升高（P<0.05）。与NC组相比,miR-145 mimics组miR-145显著升高,HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达下降。结论:肝癌腹水中Th9细胞升高可能与miR-145下降导致的PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α通路激活有关。     

miR-338-3p靶向PTP1B抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-338-3p和PTP1B对胃癌细胞迁移和侵袭的影响.方法:Western Blot法测定PTP1B在胃癌标本及癌旁组织中的表达.通过qRT-PCR检测miR-338-3p的表达.用PTP1B质粒和siRNA、miR-338-3p类似物转染SGC7901细胞,用Transwell法测定miR-338-3...     

沉默INHBA-AS1靶向miR-335-3p抑制外阴鳞状细胞癌细胞增殖、迁移

目的:探讨沉默长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）INHBA反义RNA1（INHBA antisense RNA1,INHBA-AS1）对外阴鳞状细胞癌细胞SW954生物学行为的影响及机制。方法:37例外阴鳞状细胞癌组织中INHBA-AS1、miR-335-3p表达运用qRT-PCR检测,高迁移率族蛋白2（high mobility group AT-hook 2,HMGA2）蛋白的表达运用Western blotting检测。实验分为con组、si-NC组、si-INHBA-AS1组、miR-NC组、miR-335-3p mimic组、si-INHBA-AS1+miR-335-3p inhibitor组。应用CCK-8实验检测SW954细胞增殖抑制率,克隆形成实验检测SW954细胞克隆形成,Transwell实验和划痕实验检测SW954细胞迁移,流式细胞术检测SW954细胞凋亡。双荧光素酶报告实验鉴定INHBA-AS1与miR-335-3p、miR-335-3p与HMGA2的靶向关系。结果:外阴鳞状细胞癌组织中INHBA-AS1、HMGA2蛋白的表达水平远高于癌旁组织,miR-335-3p的表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）。转染si-INHBA-AS1沉默INHBA-AS1或转染miR-335-3p mimic过表达miR-335-3p后,miR-335-3p表达水平、SW954细胞抑制率及凋亡率升高,HMGA2蛋白的表达水平、SW954细胞克隆形成数、迁移细胞数及划痕愈合率降低（P＜0.05）。INHBA-AS1靶向miR-335-3p,miR-335-3p靶向HMGA2。沉默INHBA-AS1处理的SW954细胞增殖、迁移、凋亡的影响被抑制miR-335-3p所逆转。结论:沉默外阴鳞状细胞癌细胞SW954中的INHBA-AS1通过miR-335-3p靶向HMGA2,抑制SW954细胞增殖、迁移,并诱导其凋亡。     

miR-193a-3p在食管癌细胞放射抵抗作用的初步研究

目的 探讨miR-193a-3p在食管鳞癌放射耐受性机制中的作用。方法 通过6 MV X射线对4个食管癌细胞系进行照射,采用MTT法检测出相对敏感系及耐受系细胞;茎环引物实时定量PCR法检测miR-193a-3p、miR-155、miR-22-3p在2个细胞中的表达,miR-193a-3p作为表达差异较为明显的microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染miR-193a-3p的mimic (3PM)或 antagomiR (3PA)序列及小干扰RNA (si-LOXL4)以提高或抑制其在细胞中的表达水平,MTT法和流式细胞分析术检测miR-193a-3p及其下游基因LOXL4对于放射敏感性的影响。结果 筛选出相对放射敏感细胞系(KYSE510)及耐受细胞系(KYSE410);miR-193a-3p在两系细胞中的表达水平差异显著高于miR-155、miR-22-3p (1.00:21.13);KYSE510细胞中转染mimic提高其表达后,与对照组相比,其放射敏感性降低,细胞凋亡比例显著下降11.10%(P<0.05),而KYSE410细胞中转染antagomiR后,其敏感性增加(P<0.05)。作为miR-193a-3p的下游基因,LOXL4的表达抑制也受到miR-193a-3p的调控,转染si-LOXL4降低其表达,与对照组相比放射敏感性也降低,细胞凋亡比例下降7.07%(P<0.05)。结论 miR-193a-3p可能通过调控基因LOXL4促进食管癌细胞放射耐受性。     

PRL-3调节PI3K信号通路在促进结肠癌细胞增殖侵袭中的作用

【目的】 研究肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)的过表达与PI3K信号通路的调节及其与结肠癌细胞增殖侵袭的关系?【方法】 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo- PRL-3和LoVo-VC,用qRT-PCR和Western blot的方法对miR-21及其靶蛋白PTEN的表达进行检测,在稳转细胞株中转染miR-21或对其进行敲除,用CCK-8?Tanswell实验对细胞的增殖侵袭能力的变化进行研究?【结果】 LoVo- PRL-3细胞的增殖侵袭能力要强于对照组LoVo-VC细胞?在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-21的表达上调而PTEN的表达被下调,在LoVo-VC细胞中过表达miR-21促进了细胞的增殖侵袭并降低PTEN的表达,而在LoVo- PRL-3细胞中敲除miR-21抑制了细胞的增殖侵袭并能部分恢复PTEN的表达?【结论】 PRL-3通过上调miR-21抑制PTEN的表达,调节了PI3K信号通路,从而促进了结肠癌细胞的增殖侵袭?     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

重型β地贫患儿外周血miR-144基因的检测及意义

目的检测重型β地贫患儿外周血miR-144基因表达水平,并分析miR-144与珠蛋白比率变化的关系。方法运用RT-PCR分别检测各20例重型β地贫患儿与健康对照组外周血miR-144基因表达水平及α/β珠蛋白的比率变化。结果与健康对照组比较,重型β地贫患儿外周血miR-144表达水平下降,差别有统计学意义,并且与α/β珠蛋白基因比率变化呈负相关性。结论微小RNAmiR-144可能调控重型β地贫患儿α/β珠蛋白基因比率的变化,将为重型β地贫的基因调节治疗提供新的实验依据。     

胃癌组织中血管生成素样蛋白2和miR-211表达水平与其预后的关系

目的 探讨胃癌组织中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和miR-211表达水平与其预后的关系.方法 采用免疫组化法检测胃癌根治术治疗的62例患者胃癌组织及其相应癌旁组织中ANGPTL2和miR-211的表达水平,并分析其对胃癌患者预后的影响.结果 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率分别为88.71%和83.87%,均显著高于其癌旁正常组织的3.23%和8.06%(P<0.05).62例患者随访3年的复发率、无病生存期(DFS)和3年生存率分别为45.16%、(16.62±4.78)个月和62.90%,且ANGPTL2和miR-211阳性表达患者的复发率高于阴性表达患者,DFS短于阴性表达患者,3年生存率则低于阴性表达患者(P<0.05).logistic线性回归分析结果显示,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率均可明显影响其预后情况(P<0.05).结论 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率较高且可影响其复发率、DFS和3年生存率等预后情况,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达可能作为其不良预后评估的参考指标.     

靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达

目的 构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%.结论 成功构建了靶向miR-221的siRNA 表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长.